製作人：薛欽時間：2023年5月20日
一、實驗背景
● 維生素c又叫抗壞血酸，是一種水溶性維生素。食物中的維生素c被人體小腸上段吸收。一旦吸收，就分布到體內所有的水溶性結構中，正常**體內的維生素c代謝活性池中約有1500mg維生素c，最高儲存峰值為3000mg維生素c。
正常情況下，維生素c絕大部分在體內經代謝分解成草酸或與硫酸結合生成抗壞血酸-2-硫酸由尿排出；另一部分可直接由尿排出體外。
維生素c的作用：
● 1、促進骨膠原的生物合成。利於組織創傷口的更快癒合。
● 2、促進氨基酸中酪氨酸和色氨酸的代謝，延長肌體壽命。
● 3、改善鐵、鈣和葉酸的利用。
● 4、改善脂肪和類脂特別是膽固醇的代謝，預防心血管病。
● 5、促進牙齒和骨骼的生長，防止牙床出血，防止關節痛、腰腿痛。
● 6、增強肌體對外界環境的抗應激能力和免疫力。
● 7、水溶性強抗氧化劑，主要作用在體內水溶液中。
二、實驗目的
● 1.人類營養中最重要的維生素之一。缺乏時引起壞血病。
● 2.維生素c含量可作為植物抗衰老和抗逆境的重要生理指標，也可作為果品質量、選育良種的鑑別指標。
● 3.水果、蔬菜保鮮貯藏必須測定維生素c含量，了解果蔬品質量的高低。
● 4.了解和掌握2,6-二氯酚靛酚測定維生素c含量的原理和方法。
三、實驗原理
● 2，6—二氯靛酚是一種染料，其顏色反應表現為兩種特性。一是取決於氧化還原狀態，氧化態為深藍色，還原態為無色；二是受其介質酸度的影響，在鹼性介質中呈深藍色，在酸性溶液介質中呈淺紅色。
● 用藍色的鹼性染料標準液，滴定含vc的酸性浸出液，染料被還原為無色，到達終點時，微過量的2、6—二氯靛酚染料在酸性溶液中呈淺紅色即為終點。從染料消耗量即可計算出試樣中還原型抗壞血酸量。
2.6-二氯酚靛酚滴定法
● 維生素c: 強的還原性
● 將染料2.6-d 還原成無色的2.6-二氯酚靛酚
● 2.6-二氯酚靛酚:強的氧化性
● 中性/鹼性: 藍色酸性:紅色
● 氧化型2.6-二氯酚靛酚（紅色）
● 氧化型2.6-二氯酚靛酚（藍色）
● 還原型2.6-二氯酚靛酚 （無色）
四、不同的測定方法、
● 目前研究維生素c測定方法的報道較多,有關維生素c的測定方法。
● 螢光法。
● 2，6-二氯靛酚滴定法。
● 2，4-二硝基苯肼法。
● 分光光度分析法。
● 碘量法。
螢光法● 原理:
● 樣品中還原型抗壞血酸經活性炭氧化成脫氫型抗壞血酸後，與鄰苯二胺反應生成具有螢光的喹喔啉,其螢光強度與脫氫抗壞血酸的濃度在一定條件下成正比，以此測定食物中抗壞血酸和脫氫抗壞血酸的總量。
● 脫氫抗壞血酸與硼酸可形成複合物而不與鄰苯二胺反應，以此排除樣品中螢光雜質所產生的干擾。本方法的最小檢出限為0.022g/ml。
● 本方法適用於蔬菜、水果及其製品中總抗壞血酸的測定。
2，4-二硝基苯肼法
● 原理:
● 總抗壞血酸包括還原型、脫氫型和二酮古樂糖酸。樣品中還原型抗壞血酸經活性炭氧化為脫氫抗壞血酸，再與2，4-二硝基苯肼作用生成紅色脎，脎的含量與總抗壞血酸含量成正比，進行比色測定。
● 本方法適用於蔬菜、水果及其製品中總抗壞血酸的測定。
碘量法● 原理 :
● 維生素c包括氧化型、還原型和二酮古樂糖酸三種。當用碘滴定維生素c時，所滴定的碘被維生素c還原為碘離子。隨著滴定過程中維生素c全被氧化，所滴入的碘將以碘分子形式出現。
碘分子可以使含指示劑（澱粉）的溶液產生藍色，即為滴定終點。
● 由於維生素c分子中的烯二醇基有極強的還原性，能被碘氧化，用碘滴定vc。
分光光度分析法
● 原理：
● 維生素c在空氣中尤其在鹼性介質中極易被氧化成脫氫抗壞血酸。
● 通過吸收光譜曲線法確定維生素c的水溶液的最大吸收波長為267nm，進而通過工作曲線法快速測定蔬菜水果中維生素c的含量。
● 本方法與常規方法比較，具有準確、快速、穩定、試劑易得等優點。
五、儀器試劑與樣品
● 新鮮生菜
● 滴定管、三角瓶、研缽、量筒、移液管離心機
● 20g/l草酸溶液：稱取20g草酸，加水至1000ml。
● 60g/l碘化鉀溶液。
● 0.001mol/lkio3標準溶液。
● 2，6-二氯酚靛酚溶液。
● 1mg/ml抗壞血酸標準溶液。
六、實驗步驟
● 2，6-二氯酚靛酚標準液的標定
● 吸取1mg/ml抗壞血酸溶液1ml置於錐形瓶中，加10ml 20g/l草酸，搖勻，用2，6-二氯酚靛酚滴定至溶液呈淡紅色。在15s不消失為終點。計算出1ml染料相當於多少毫克抗壞血酸（取10ml 20g/l草酸作空白對照）計算滴定度t：
維生素c的提取和測定
● 1、稱取10 g新鮮生菜樣品，置研缽中，分次加20ml 20g/l草酸，研成勻漿，用的20g/l草酸定容100ml。通過紗布過濾後取10ml放於離心機中3000r/min離心10min,吸取上清使用。
● 2、吸取濾液10 ml，放入50 ml三角瓶中，立即用已標定的2，6-二氯酚靛酚溶液滴定至出現明顯的粉紅色在15 s內不消失為止。記錄所用滴定液體積。另取10ml 20g/l草酸作空白對照實驗。
七、結果計算
● v1---滴定空白所用染料溶液的體積，ml
● v2---滴定樣品所用染料溶液的體積，ml
● t---2，6-二氯酚靛染料溶液的滴定度,mg/ml
● m---樣品的質量，g
2,6—二氯靛酚溶液的標定
樣品中維生素c含量的測定
● v1---滴定空白所用染料溶液的體積，ml
● v2---滴定樣品所用染料溶液的體積，ml
● v----吸取維生素c標準溶液的體積，ml
八、注意事項
● 1、本法測定的結果為食品中的還原型抗壞血酸含量，而非維生素c總量。此法是測定還原型抗壞血酸最簡便的方法，適合於大批果蔬，但對紅色果蔬不太適宜。
● 2、維生素c在酸性條件下較穩定，故樣品處理或浸提都應在弱酸性環境中進行。浸提劑以偏磷酸(hpo3)穩定維生素c效果最好，但**較貴。一般可採用草酸(20g/l)代替偏磷酸，價廉且效果也較好。
● 3、vc不穩定，在空氣中易被氧化，研磨時，盡可能要快，以減少vc的氧化。
● 4、樣品處理過程中加入等量的2%草酸，目的是抑制抗壞血酸氧化酶，避免維生素c氧化損失，也可用2%偏磷酸代替。
● 5、某些水果、蔬菜（如橘子、西紅柿等）漿狀物在100ml容量瓶中泡沫太多，可加入戊醇2~3滴消除之。
● 6、同法作空白實驗，消除系統誤差。
● 7.操作要迅速，防止還原型維生素c被空氣中的氧化。滴定過程一般不超過2min。
滴定所用的染料不應小於1ml或多於4ml，如果樣品含維生素c太高或太低時，可酌情增減樣液用量或改變提取液稀釋度。
干擾滴定因素有：
● 1、色素若提取液中色素很多時，滴定不易看出顏色變化，可用白陶土脫色，或加1ml氯仿，到達終點時，氯仿層呈現淡紅色。
● 2、fe2+可還原二氯酚靛酚。對含有大量fe2+的樣品可用8%乙酸溶液代替草酸溶液提取，此時fe2+不會很快與染料起作用。
● 3、維生素c提取時要避光、避免與銅鐵接觸，以免vc氧化。
九、實驗結果與討論
● 1、為什麼在測定維生素c的同時要進行2,6-d溶液的標定？
● 2、為了保證抗壞血酸含量測定準確， 應注意些什麼？
● 3、為了測得準確的維生素c含量，實驗過程中都應注意哪些操作步驟？為什麼？
● 4、食品中維生素c測定的方法有哪些，各自的原理和適用範圍是什麼？
● 5、測定脂溶性維生素時樣品需如何處理？
● 6、測定水溶性維生素時、從樣品中提取濃縮可採用那些方法？
● 7、加入20g/l草酸溶液的目的是什麼？
常見蔬菜維生素C含量的測定檔
一 實驗目的 1 掌握一般食品試樣準備的方法 2 掌握碘量法測定蔬菜維生素c含量測定的原理和方法 二 實驗原理 維生素c簡稱維c，具有防治壞血病的功能，又叫抗壞血酸。是含有6個碳原子的酸性多羥基化合物。分子中第2及第3位碳原子上的2個烯醇式羥基極易釋放出h 具有很強的還原性。在氧化劑存在時，抗壞血酸...
橘子中維生素C含量測定實驗方案
2 標準液滴定 準確吸取標準抗壞血酸溶液1ml置100ml錐形瓶中，加9ml 1 草酸，用微量滴定管以0.1 2,6 二氯酚靛酚溶液滴定至淡紅色，並保持15s不褪色，即達終點。由所用染料的體積計算出1ml染料相當於多少毫克抗壞血酸 取10ml 1 草酸作空白對照，按以上方法滴定 3 樣品滴定 準確吸...
關於維生素C的
1.維生素c的作用 維生素c的主要作用是提高免疫力，預防癌症 心臟病 中風，保護牙齒和牙齦等。另外，堅持按時服用維生素c還可以使 黑色素沉著減少，從而減少黑斑和雀斑，使 白皙。美國專家認為，每人每天維生素c的最佳用量應為200 300毫克，最低不少於60毫克，半杯 大約一百毫公升 新鮮橙汁便可滿足這...