水果、蔬菜維生素c含量測定法（2,6－二氯靛酚滴定法）
【標準名稱】水果、蔬菜維生素c含量測定法（2,6－二氯靛酚滴定法）
【標準號】gb6195-86【標準檔案】gb6195─86gb6195—86 水果、蔬菜維生素c含量測定法（2,6－二氯靛酚滴定法）（經濟作物-瓜果、蔬菜種植與產品）
1適用範圍
本標準適用於果品、蔬菜及其加工製品中還原型抗壞血酸的測定（不含二價鐵、二價錫、一價銅、二氧化硫、亞硫酸鹽或硫代硫酸鹽），不適用於深色樣品。
2測定原理
染料2，6-二氯靛酚的顏色反應表現兩種特性，一是取決於其氧化還原狀態，氧化態為深藍色，還原態變為無色；二是受其介質的酸度影響，在鹼性溶液中呈深藍色，在酸性介質中呈淺紅色。用藍色的鹼性染料標準溶液，對含維生素c的酸性浸出液進行氧化還原滴定，染料被還原為無色，當到達滴定終點時，多餘的染料在酸性介質中則表現為淺紅色，由染料用量計算樣品中還原型抗壞血酸的含量。
3儀器裝置
a.高速組織搗碎機：8000～12000r/min。b.分析天平。c.滴定管：25ml、10ml。
d.容量瓶：100ml。
e.錐形瓶：100ml、50ml。
f.吸管：10ml、5ml、2ml、1ml。
g.燒杯：250ml、50ml。
h.漏斗。
4試劑（凡未加說明者均為分析純）
4.1浸提劑
4.1.1偏磷酸：2％溶液（w/v）**偏磷酸不穩定，切勿加熱。
4.1.2草酸：2％溶液（w/v）。
4.2抗壞血酸標準溶液（1mg/ml）：稱取100mg（準確至0.
1mg）抗壞血酸**，溶於浸提劑中並稀至100ml。現配現用。**一般抗壞血酸純度為99.
5％以上，可不標定。如試劑發黃，則棄去不用用。若要檢查其純度，可按附錄b方法標定。
4.32，6-二氯靛酚（2，6-二氯靛酚吲哚酚鈉鹽）溶液：稱取碳酸氫鈉52mg溶解在200ml熱蒸餾水中，然後稱取2，6-二氯靛酚50mg溶解在上述碳酸氫鈉溶液中。
冷卻定容至250ml，過濾至棕色瓶內，儲存在冰箱中。每次使用前，用標準抗壞血酸標定其滴定度。即吸取1ml抗壞血酸標準溶液於50ml錐形瓶中，加入10ml浸提劑，揺勻，用2，6-二氯靛酚溶液滴定至溶液呈粉紅色15s不褪色為止。
同時，另取10ml浸提劑做空白試驗。滴定度按式（1）計算：
滴定度t（mg/ml）=c·v/(v1-v21）
式中：t──每毫公升2，6-二氯靛酚溶液相當於抗壞血酸的毫克數；
c──抗壞血酸的濃度，mg/ml；
v──吸取抗壞血酸的體積，ml；
v1──滴定抗壞血酸溶液所用2，6-二氯靛酚溶液的體積，ml；
v2──滴定空白所用2，6-二氯靛酚溶液的體積，ml。
4.4白陶土（或稱高嶺土）：對維生素c無吸附性。
5測定步驟
5.1樣液製備：稱取具有代表性樣品的可食部分100g，放入組織搗碎機中，加100ml浸提劑，迅速搗成勻漿。
稱10～40g漿狀樣品，用浸提劑將樣品移入100ml容量瓶，並稀釋至刻度，搖勻過濾。若濾液有色，可按每克樣品加0.4g白陶土脫色後再過濾。
5.2滴定：吸取10ml濾液放入50ml錐形瓶中，用已標定過的2，6-二氯靛酚溶液滴定，直至溶液呈粉紅色15s不褪色為止。同時做空白試驗。
6結果計算
6.1計算公式：維生素c按式（2）計算：
維生素c（mg/100g）=〔（v-v0）·t·a/w〕×1002）
式中：v──滴定樣液時消耗染料溶液的體積，ml；
v0──滴定空白時消耗染料溶液的體積，ml；
t──2，6-二氯靛酚染料滴定度，mg/ml；
a──稀釋倍數；
w──樣品重量，g。
6.2平行測定的結果，用算術平均值表示，取三位有效數字，含量低的保留小數點後兩位數字。
6.3平行測定結果的相對相差，在維生素c含量大於20mg/100g時，不得超過2％，小於20mg/100g時，不得超過5％。
附錄a二甲苯-二氯靛酚比色法（補充件）
a.1適用範圍測定深色樣品中還原型抗壞血酸。
a.2測定原理用定量的2，6-二氯靛酚染料與試樣中的維生素c進行氧化還原反應，多餘的染料在酸性環境中呈紅色，用二甲苯萃取後比色，在一定範圍內，吸光度與染料濃度呈線性相關，由剩餘染料濃度用差減法計算維生素c含量。
a.3儀器裝置
a.3.1分光光度計或比色計。
a.3.2具塞試管：50ml。
a.4試劑（皆為分析純）
a.4.1偏磷酸：2％溶液（w/v）。
a.4.2乙酸鈉緩衝溶液（ph4.0）∶500ml50％（w/v）的乙酸鈉溶液與500ml冰乙酸混合。
a.4.32，6-二氯靛酚溶液：參照4.3條。
a.4.4二甲苯。
a.5測定步驟a.5.
1標準曲線的繪製：用6只50ml具塞試管加入5ml2％偏磷酸和5mlph4.0的乙酸鈉緩衝液，然後依次加入0.
0，0.1，0.3，0.
6，0.9，1.2及1.
5ml2，6-二氯靛酚溶液，用力搖動5s，再向各試管中加入10ml二甲苯，再激烈搖動20s，靜置分層後與試樣管同時比色（無染料的試液作空白），以吸光度為縱座標，2，6-二氯靛酚的毫公升數為橫座標繪製標準曲線。a.5.
2吸取5ml2％偏磷酸樣品浸出液（參照5.1條）於50ml具塞試管中，加5mlph4.0的乙酸鈉緩衝液和2ml染料溶液，激烈搖動5s，立即加入10ml二甲苯，再激烈搖動20s，待靜置分層後，從二甲苯層中小心吸取乙份，放入1cm比色杯中於500nm波長下進行比色。
記錄吸光度a，在標準曲線上查出二甲苯層中2，6-二氯靛酚的毫公升數。整個操作應在30min內完成。
a.6計算公式
維生素c（mg/100g）=〔（2-v）·t·a/w〕×100
式中：2──所用2，6-二氯靛酚染料的體積，ml；
v──查得2，6-二氯靛酚溶液的體積，ml；
a──稀釋倍數；
t──染料滴定度，mg/ml；
w──樣品重量，g。
附錄b抗壞血酸純度檢驗法（補充件）
b.1稱取100mg（準確至0.1mg）抗壞血酸待測樣品，用2％偏磷酸或2％草酸溶液溶解稀釋至100ml。
b.2吸取抗壞血酸溶液1ml於盛10ml2％偏磷酸或2％草酸溶液的錐形瓶中，加入6％碘化鉀溶液0.5ml和1％澱粉溶液五滴，搖勻。
用1.67×10-4m碘酸鉀標準溶液滴定，終點為極淡藍色。
b.3計算公式
b.3.1抗壞血酸濃度按式（b1）計算：
抗壞血酸濃度=v1×0.088/v2b1）
式中：v1──滴定時消耗1.67×10-4m碘酸鉀標準溶液的體積，ml；
v2──所取抗壞血酸溶液的體積，ml；
0.088──1ml1.67×10-4m碘酸鉀溶液相當於抗壞血酸的重量，mg；
b.3.2抗壞血酸純度（％）按式（b2）計算：
抗壞血酸純度（％）=（c·v/w）×100b2）
式中：c──所標定抗壞血酸的濃度，mg/ml；
v──抗壞血酸溶液總體積，ml；
w──抗壞血酸重量，mg。
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