取本品，分別加滅菌注射用水1ml溶解，採用薄膜過濾法依法檢查（中國藥典2023年版二部附錄ⅺ h），應符合規定。
菌液製備：10倍稀釋法
菌懸液製備計數結果
1、供試品處理
將供試品去掉鋁塑蓋，外表面用75%酒精全面消毒，然後向每支樣品中注入1.0ml0.1%的蛋白腖滅菌溶液，備用。
2、檢查
陽性對照：將等量的試驗菌直接加入到液體硫乙醇酸鹽培養基或改良馬丁液體培養基管中，在相應的溫度下培養。液體硫乙醇酸鹽培養基管在30-35℃下培養；改良馬丁液體培養基管在23-28℃下培養3-5天。
觀察記錄。
陰性對照：將滅菌的液體硫乙醇酸鹽培養基或改良馬丁液體培養基管直接放在相應的溫度下培養。液體硫乙醇酸鹽培養基管在30-35℃下培養；改良馬丁液體培養基管在23-28℃下培養3-5天。
觀察記錄。
樣品（薄膜過濾法）：每種實驗菌取10支處理好的供試品溶液，將溶液合併後加入製備好的菌懸液1ml，用0.1%的蛋白腖滅菌溶液稀釋至100ml，按薄膜過濾法過濾，取出濾膜，將其分為3等份，分別置於含硫乙醇酸鹽流體培養基及改良馬丁培養基的容器中，其中乙份作為陽性對照用。
其中：試驗菌為金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、生孢梭菌的濾膜接種至液體硫乙醇酸鹽培養基管中；試驗菌為白色念珠菌、黑曲黴菌的濾膜接種至改良馬丁液體培養基管中。液體硫乙醇酸鹽培養基管在30-35℃下培養；改良馬丁液體培養基管在23-28℃下培養3-5天。
觀察記錄。
試驗結果
表中接種管數中1代表用薄膜過濾法接種管；2代表各試驗菌不加供試品的陽性對照管。
3、實驗結論：含供試品的培養管中微生物生長無微弱、緩慢或不生長，表明供試品的該檢驗量在該檢驗條件下無抑菌作用。
附：試生產三批注射用胸腺五肽（規格10mg）無菌檢查原始記錄
內毒素測定方法學研究：
取本品三批樣品，加0.9%滅菌氯化鈉溶液製成0.6mg/ml的溶液，各取適用的家兔3只，共9只，依法測定（中國藥典2023年版二部附錄ⅺ d），劑量按家兔體重每1kg注射1ml。
熱原檢查試驗結果
結論：三批供試樣品熱原檢查均符合規定。細菌內毒素檢查法是目前控制臨床熱原反應較為理想的方法之一，同時也是國際上認為較成熟的檢測方法，以下對細菌內毒素方法進行驗證。
1、材料：注射用胸腺五肽（10mg/支）（自製樣品批號：20100401）；鱟試劑（λ為0.
25eu/ml，批號0911271）由湛江安度斯生物公司生產，細菌內毒素工作標準品（10eu/支，批號0905210）由湛江安度斯生物公司生產；內毒素檢驗用水（批號0909240）由湛江安度斯生物公司生產。
2、鱟試劑靈敏度復核試驗：將細菌內毒素工作標準品用細菌內毒素檢查用水溶解，在旋渦混合器上混合混勻15分鐘，然後製成2λ、λ、0.5λ和0.
25λ四個濃度的內毒素標準溶液，每稀釋一步均應在旋渦混合器上混勻30秒鐘。復溶後的0.1ml/支規格的鱟試劑原安瓿瓶18支，其中16管分別加入0.
1ml不同濃度的內毒素標準溶液，每乙個內毒素濃度平行做4管；另外2管加入0.1ml細菌內毒素檢查用水作為陰性對照。將試管中溶液輕輕混勻後，封閉管口，垂直放入37℃±1℃的恆溫器中，保溫60分鐘±2分鐘。
緩緩倒轉180℃觀察，管內形成凝膠，並且凝膠不變形，不從管壁滑脫者為陽性，記錄為（+）；未形成凝膠或凝膠不能保持完整並從管壁滑脫者為陰性，記錄為（-）。
鱟試劑靈敏度復核試驗結果
結果證明：該鱟試劑的靈敏度為0.25eu/ml。
3、內毒素限值的確定：藥品、生物製品的細菌內毒素限制（l）一般按以下公式確定：
l=k/m
l一般以eu/mg表示；k為人每千克體重每小時最大可接受的內毒素劑量，以eu/（表示，注射劑k=5eu/(為人用每千克體重每小時的最大供試品劑量，以mg/(表示，人均體重按60kg計算，注射時間按1小時計算。
注射用胸腺五肽依據中國藥典2023年版二部附錄ⅺ e內毒素限制（l）每1mg中含內毒素的量應小於3eu，在此基礎進行內毒素限制試驗，結果如下：
注射用胸腺五肽內毒素限度試驗結果
4、干擾試驗
供試品溶液的製備：取供試品加檢查用水溶解並按最大有效稀釋倍數60倍稀釋，制得供試品溶液。
按鱟試劑靈敏度復核試驗項操作，按下錶製備干擾試驗溶液：
干擾試驗及結果
es=1λ在0.5λ～2λ範圍內，et=1λ在0.5 es～2 es範圍內，證明供試品在稀釋60倍後無干擾作用。
注射用胸腺五肽三批中試內毒素檢查結果
結果表明：注射用胸腺五肽三批中試內毒素檢查結果符合規定。
結論：通過對注射用胸腺五肽進行干擾初篩試驗和干擾試驗，結果證明用細菌內毒素檢查法代替熱原檢查法是可行的，而且具有靈敏、快速等優點，由此可建立該品種的細菌內毒素檢查法，細菌內毒素限度定為每1mg樣品中內毒素應小於1.5eu。
附：試生產三批注射用胸腺五肽（規格10mg）內毒素檢查原始記錄
注射用胸腺五肽
zhusheyong xiongxian wutai
thymopentin for injection
本品為胸腺五肽與甘露醇等經冷凍、乾燥的無菌製品，含胸腺五肽（c30h49n9o9）應為標示量的90.0%~110.0%。
【性狀】 本品為白色凍乾疏鬆塊狀物或粉末。
【鑑別】
（1）取本品，每支加水1ml溶解後，加雙縮脲試劑（取硫酸銅0.15g，加酒石酸鉀鈉0.6g，加水50ml,攪拌下加入10%氫氧化鈉溶液30ml，加水至100ml）1ml，即顯藍紫色或紫紅色。
（2）在含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品溶液主峰的保留時間應與對照品溶液的主峰的保留時間一致。
【檢查】
酸鹼度取本品，每支加水5ml溶解後混勻，依法測定（中國藥典2023年版二部附錄ⅵ h），ph值為6.5～7.5。
溶液澄清度與顏色取本品5支，每支加水1ml溶解後，溶液應為澄清無色；如顯渾濁，與1號濁度標準液（中國藥典2023年版二部附錄ⅸ b）比較，均不得更濃。
乾燥失重取本品0.1g，以五氧化二磷為乾燥劑，減壓乾燥至恒重，減失重量不得過5.0%（中國藥典2023年版二部附錄ⅷ l）。
相關多肽取本品適量，加流動相溶解並稀釋成1ml含10mg的溶液，作為供試品溶液；精密量取供試品溶液適量，用流動相稀釋成每1ml中含0.1mg的溶液，作為對照溶液。照含量測定項下的色譜條件，取對照溶液20ul，注入液相色譜儀，調節儀器靈敏度，使主峰高為滿量程的10%～20%，再取供試品溶液20ul，注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主峰保留時間的2.
5倍。供試品溶液色譜圖中如有雜質峰，單一最大雜質峰面積不得大於對照溶液主峰面積（1.0%）；各雜質峰面積之和不得大於對照溶液主峰面積的2.
5倍（2.5%）。
含量均勻度以含量測定項下方法測得的每瓶含量計算，應符合規定（中國藥典2023年版二部附錄ⅹ e）。
無菌取本品， 分別加滅菌注射用水1ml溶解，依法檢查（中國藥典2023年版二部附錄ⅺ h），應符合規定。
細菌內毒素取本品，依法檢查（中國藥典2023年版二部附錄ⅺ e），每1mg中含內毒素的量應小於1.5eu。
其他應符合注射劑項下有關的各項規定（中國藥典2023年版二部附錄ⅰ b）。
【含量測定】照高效液相色譜法（中國藥典2023年版二部附錄v d）測定。
色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以0.05mol/l磷酸鹽緩衝液（ph7.0）-甲醇（90：
10）為流動相；檢測波長為275nm。理論塔板數按胸腺五肽峰計算不低於1200。取對照品溶液20ul，重複進樣6次，其峰面積的變異係數應不大於2.
0%測定法取本品，加流動相溶解並稀釋製成每1ml中約含胸腺五肽0.5mg的溶液，作為供試品溶液，精密量取20ul，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取胸腺五肽對照品適量，同法測定，按外標法以峰面積計算。
【類別】 免疫調節藥
【規格】 10mg（按胸腺五肽計）
【貯藏】 密閉，在涼暗處（避光並不超過20℃）儲存。
注射用胸腺五肽質量標準起草說明
，熱原檢查改為內毒素檢查。
【性狀】 根據產品實際外觀形狀制定。
【鑑別】 根據國家標準ybh11602005制定，通過方法學驗證。中試和試生產三批均符合要求。
【檢查】 酸鹼度、溶液澄清度與顏色、乾燥失重、相關多肽、含量均勻度、無菌根據國家標準ybh11602005制定，其中相關多肽、含量均勻度、無菌通過方法學驗證。中試和試生產三批均符合要求。
無菌檢查方法學驗證
取初步製成的上述菌懸液和生孢梭菌第3代新鮮培養物，用0.9 無菌氯化鈉溶液稀釋至不高於標準比濁管的濃度，即得每1ml含菌數小於100cfu驗證細菌菌液。3.1.2孢子懸液製備程式 取白色念珠菌和黑麴黴的凍乾菌種管各一支，分別在無菌操作下開啟，以毛細吸管加入適量營養肉湯，輕柔吹吸數次，使菌種融化分散後...
無菌檢查法驗證方案
浙江紅雨醫藥用品 無菌檢驗方法 驗證方案及報告 驗證方案申請人日期 年月日 驗證方案審核人日期 年月日 驗證方案審批人日期 年月日 1 概述 無菌檢查法是為了檢查藥典要求無菌的醫療器械產品是否無菌而建立的檢查法，是作為批准無菌產品放行的檢驗或監督部門對無菌產品質量監督中的乙個重要專案。它是根據用於實...
注射用克林黴素磷酸酯無菌檢查方法驗證
摘要 目的 確定注射用克林黴素磷酸酯的無菌檢查方法。方法 採用薄膜過濾法，通過確定沖洗量 選擇陽性對照菌及加入順序。結果 經試驗各實驗菌能夠正常生長。結論 方法學驗證採用薄膜過濾法進行的無菌檢查方法可行 有效。關鍵詞 注射用克林黴素磷酸酯 薄膜過濾法 驗證試驗 沖洗量 克林黴素磷酸酯為化學半合成的克...