安徽衛生職業技術學院學報２０１０年第９卷第４期
蔣大圓邾枝花
【中圖分類號】ｒ９７１【文獻標識碼】ａ【文章編號
【摘要】目的：建立解鬱安神顆粒微生物限度檢查法。方法：參照中國藥典收載方法試驗，以**率對方法有效性進行評價。
結果：採用平皿法進行黴菌及酵母菌計數，採用薄膜過濾法進行細菌計數，採用直接接種法進行大腸埃希茵檢查。結
論：該方法可用於解鬱安神顆粒微生物限度檢查。
【關鍵詞】解鬱安神顆粒微生物限度檢查方法驗證
解鬱安神顆粒由柴胡、大棗、石菖蒲、半夏
（制）、白朮（炒）、浮小麥、遠志（制）、甘草（炙）、梔子（炒）、百合、膽南星、鬱金、龍齒、酸棗仁（炒）、茯苓、當歸１６味中藥組成；具有舒肝解鬱，安神定志的功能。用於情志不舒、肝鬱氣滯等精神刺激所致的心煩，焦慮、失眠、健忘、更年期症候群，神經官能症等。目前各國藥典對口服製劑的微生物汙染狀況有明確的質控指標 】。
在對具有抗菌活性的藥品進行微生物限度檢測時，應首先消除其抗菌活性，並通過
實驗驗證以保證檢驗結果的有效性。考慮該藥品部分有效成分具有抑制微生物生長作用，可能影響其微生物限度檢查結果的可靠性。為建立快速有效的微生物限度檢測方法，參照《中國藥典￣２００５年版方法，對其微生物限度檢查法進行了方法驗證。
１儀器與材料
１．１儀器和濾器：ｔｙ—ｕ＿ｉ智慧型集菌儀，開放式無菌試驗過濾培養器樣品**：解鬱安神顆粒，自製；培養基：
膽鹽乳糖培養基、玫瑰紅鈉瓊脂培養基、營養瓊脂培養基、營養肉湯培養基、改良馬丁培養基、改良馬丁瓊脂培養基等均由北京三藥科技開發公司提供；驗證試驗用菌種：金黃色葡萄球菌枯草芽孢桿菌大腸埃希菌白色念珠菌黑麴黴中國藥品生物製品檢定所提供。
１．２方
法１．２．１菌液製備取經３７℃培養２４ｈ的金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌肉湯培養物各ｌｍｌ，取經２５℃培養４８ｈ的白色念珠菌液體培養物ｌｍｌ，分別加９ｍｌ０．９％無菌氯化鈉溶液，按１ｏ倍遞增稀釋法稀釋至１０ ～ｌ０ ，製成每１ｍｌ含５０～１００ｃｆｕ菌懸液；取經２５℃培養７ｄ的黑麴黴斜面培養物，加３～５ｍ１０．９％無菌氯化鈉溶液，洗下黴菌孢子，吸出孢子懸液，用標準比濁管比濁，與濁度相當後，取ｌｍｌ至無菌試管內，加９ｍｌ０．９％無菌氯化鈉溶液，逐管１０倍稀釋至ｌ０』４，製成每１ｍｌ含５０～１００ｃｆｕ菌懸液，備用。
作者單位：安徽醫學高等專科學校合肥收稿修回
１．２．２供試液製備稱取解鬱安神顆粒供試樣品
１０ｇ，加４５℃無菌ｐｈ７．０的氯化鈉一蛋白腖緩衝液稀釋至１００ｍｌ，混勻，製成１：１０供試液，備用。１．２．３細菌、黴菌及酵母菌計數方法的驗證１．２．３．１平皿法：
分別取供試液及上述５種試驗菌株菌液ｌｍｌ加入平皿中，然後每皿加營養瓊脂培養基或玫瑰紅鈉瓊脂培養基２０ｍｌ，搖勻，待凝固後，置規定溫度培養２４～７２小時觀察結果，菌落計數，測定**率。１．２．３．２培養基稀釋法：分別取供試液及上述５種試驗菌株菌液ｌｍｌ，加入平皿中，然後每皿加營養瓊脂培養基或玫瑰紅鈉瓊脂培養基２０ｍｌ，搖勻，待凝固後，置規定溫度培養２４～７２小時觀察結果，菌落計數，測定**率。
１．２．３３薄膜過濾法：取１：１０供試液ｌｍｌ加至４５℃１００ｍｌ的ｐｈ７．０無菌氯化鈉一蛋白腖緩衝液中，全部通過開放式濾器（濾膜先用沖洗液潤濕）中，用無菌氯化鈉一蛋白腖緩衝液沖洗，１００ｍｌ／次，在最後一次沖洗液中加入上述５０～１００ｃｆｕ的試驗菌，沖洗完畢後，濾乾，取出濾膜貼於規定的瓊脂培養基上，置規定溫度培養２４～７２小時觀察結果，菌落計數，測定**率。
１．２．３．４**率的計算試驗組菌**率（％）＝『（試驗組平均菌落數一供試品對照組平均菌落數）／ｆ菌液組的平均菌落數控制菌檢查方法驗證本品為口服製劑，不含生藥和動物藥，參照《中國藥典￣２００５年版，控制菌需對大腸埃希菌進行檢查［４１。結合細菌計數檢測的驗證實驗結果，按直接接種法對其進行驗證，取１：１０供試液１０ｍｌ加入１００ｍｌ的膽鹽乳糖培養基中，加入上述５０～１００ｃｆｕ的試驗菌，置３５％培養２４小時，按相應的控制菌的檢查法檢查 ，試驗組應檢出大腸埃希菌；陰性菌對照組（金黃色葡萄球菌）不得檢出。
２結果２．１採用平皿法和培養基稀釋法時，大腸埃希菌、黑曲黴菌、白色念珠菌的**率達到７０％，金黃色葡
萄球菌、枯草芽孢桿菌的**率均低於７０％，而使用薄膜過濾法後，金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的**率均達到７０％以上（見表１）。２．２ 控制菌檢查方法驗證結果試驗組中檢出大腸
７８醫學基礎與藥學研究
表１細菌、黴菌及酵母菌計數方法的驗證結果
蛋白腖緩衝液的溫度大於４５℃時，容易傷害藥品中
汙染的雜菌，影響檢測結果。３ｉ３根據以上試驗結果，提出解鬱安神顆粒微生物限度檢查法：採用平皿法進行黴菌及酵母菌計數，採用薄膜過濾法進行細菌計數，採用直接接種法進行大腸埃希菌檢查。
參考文獻
埃希菌，陰性菌對照組（金黃色葡萄球菌）未檢出，可
以採用直接接種法進行大腸埃希菌的檢查。３討論
３．１解鬱安神顆粒對真菌抑制作用較弱，可採用平皿法進行黴菌及酵母菌計數，而對細菌有一定的抑制作用，採用培養基稀釋法無法完全消除其抑菌作用，因而採用薄膜過濾法，可以使**率達到微生物限度檢查要求。３．２供試液製備及薄膜過濾法沖洗時，ｐｈ７．０的氯化鈉一蛋白腖緩衝液的溫度控制在４５℃時，可以增加供試液的溶解性，有利於供試液的濾過，利於消除該藥物的抑菌活性；但應當注意ｐｈ７．０的氯化鈉一
４國家藥典委員會．中國藥典（一部）［ｓ】北京：化學工
業出版社
５中國藥品檢驗標準操作規範
（編審：張善堂施仲賦）
（上接第４４頁）
參考文獻
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ｕ］．江西醫藥
３葛久禹．根管**學【ｍｊ．第２版，江蘇：科學技術出
版社，２００８，３９８
廠編審：張志巨集施仲賦）
微生物限度檢查記錄
樣品名稱檢驗日期 檢驗編號 完成日期 批號取供試品ml或g，加0.9 無菌氯化鈉溶液至ml，用適宜方法混勻，作為1 10 供試液製備 的供試液。其他不溶於水的供試品可用適宜的方法製成1 10供試液。一 需氧菌數檢查 30 35 胰酪大豆腖瓊脂培養基 配製批號 培養時間1天2天3天4天5天均值標準結果...
藥品微生物限度檢查方法驗證試驗
吉林九鑫藥業 檢驗原始記錄 1 檢品名稱 更年寧檢品批號 20111001 2 驗證依據 中國藥典2010年版 微生物限度檢查方法驗證試驗 3 儀器 4 培養基 5 細菌 黴菌及酵母菌計數方法的驗證 5.1 驗證用菌種 大腸埃希菌枯草芽孢桿菌金黃色葡萄球菌白色念球菌黑曲黴菌 巿藥檢所 5 2菌液製備...
微生物限度檢查法
中國藥品檢驗標準操作規程2010版 微生物限度檢查法 一 細菌 黴菌和酵母菌計數 簡述 細菌 黴菌和酵母菌計數是檢測非規定滅菌製劑及原 輔料受微生物汙染程度的方法。也是用於評價生產企業藥用原料 輔料 裝置 器具 工藝流程 環境和操作者的衛生狀況的重要手段和依據。細菌 黴菌和酵母菌計數均採用平板菌落計...