④取初步製成的上述菌懸液和生孢梭菌第3代新鮮培養物，用0.9%無菌氯化鈉溶液稀釋至不高於標準比濁管的濃度，即得每1ml含菌數小於100cfu驗證細菌菌液。
3.1.2孢子懸液製備程式
①取白色念珠菌和黑麴黴的凍乾菌種管各一支，分別在無菌操作下開啟，以毛細吸管加入適量營養肉湯，輕柔吹吸數次，使菌種融化分散後，吸出滴入改良馬丁瓊脂斜面上，使均勻分布，置23～28℃培養 5～7天。用接種環取適量第1代培養菌苔，劃線接種於改良馬丁瓊脂斜面上，同上述條件培養得第2代培養物。取第2代培養物，同法操作，得第3代培養物。
②用5.0ml吸管吸取3.0ml～5.
0ml0.9%無菌氯化鈉溶液加入上述第三代新鮮斜面試管內，反覆吹吸，洗脫孢子，用管口帶有薄的無菌棉花或紗布的毛細吸管吸出孢子懸液至無菌試管內，用0.9%無菌氯化鈉溶液稀釋至不高於標準比濁管的濃度，即得每1ml含菌數小於100cfu驗證孢子懸液。
3.2 薄膜過濾
3.2.1供試品試驗組
取規定量供試品，按《無菌檢查標準操作細則》薄膜過濾後，如為不含防腐劑供試品，則往其中乙隻濾筒內接入100ml改良馬丁培養基，往另乙隻濾筒內各接入100ml的硫乙醇酸鹽流體培養基，用5ml滅菌注射器抽取1ml驗證菌液，從集菌培養器膠管處注入培養基中；如為含防腐劑供試品，則待供試品過濾完後，連續3次用0.1%蛋白腖水溶液沖洗濾膜，每張濾膜每次沖洗量為100ml，在最後一次沖洗液中，加入1ml驗證菌液。每種製品抽取三批按上法操作。
3.2.2陽性對照組
取一套與供試品試驗組相同的集菌培養器，不過濾供試品，直接向與供試品試驗組相等量的培養基內接入1ml的驗證菌液。
3.2.3陰性對照
取規定量供試品，按《無菌檢查標準操作細則》薄膜過濾後，往其中乙隻濾筒內接入100ml改良馬丁培養基，另乙隻濾筒內接入100ml硫乙醇酸鹽流體培養基。
7.3.3.4培養
將硫乙醇酸鹽流體培養基置於30～35℃培養，改良馬丁培養基置於20～25℃，分別在培養的第1、2、3、4、5天觀察並記錄結果。
7.3.3.5可接受標準
所有驗證用試驗菌種均能在供試品組和陽性對照組中生長良好，並且同一試驗菌在供試品組和陽性對照組中生長的時間及強弱應沒有明顯差異。陰性對照應無菌生長。各品種三批驗證結果均應符合上述要求。
無菌檢查方法驗證
取本品，分別加滅菌注射用水1ml溶解，採用薄膜過濾法依法檢查 中國藥典2010年版二部附錄 h 應符合規定。菌液製備 10倍稀釋法 菌懸液製備計數結果 1 供試品處理 將供試品去掉鋁塑蓋，外表面用75 酒精全面消毒，然後向每支樣品中注入1.0ml0.1 的蛋白腖滅菌溶液，備用。2 檢查 陽性對照 將...
無菌檢查法驗證方案
浙江紅雨醫藥用品 無菌檢驗方法 驗證方案及報告 驗證方案申請人日期 年月日 驗證方案審核人日期 年月日 驗證方案審批人日期 年月日 1 概述 無菌檢查法是為了檢查藥典要求無菌的醫療器械產品是否無菌而建立的檢查法，是作為批准無菌產品放行的檢驗或監督部門對無菌產品質量監督中的乙個重要專案。它是根據用於實...
注射用克林黴素磷酸酯無菌檢查方法驗證
摘要 目的 確定注射用克林黴素磷酸酯的無菌檢查方法。方法 採用薄膜過濾法，通過確定沖洗量 選擇陽性對照菌及加入順序。結果 經試驗各實驗菌能夠正常生長。結論 方法學驗證採用薄膜過濾法進行的無菌檢查方法可行 有效。關鍵詞 注射用克林黴素磷酸酯 薄膜過濾法 驗證試驗 沖洗量 克林黴素磷酸酯為化學半合成的克...