分析方法驗證

學習參考資料201106-4

◆ 分析方法的驗證：

分析方法的驗證是乙個過程，這個過程是經由實驗室的研究而進行的。驗證必須表明分析方法所具有的效能，能夠滿足分析方法實際使用的要求。本文表一枚舉了乙個典型的分析方法所必需要驗證的特性。

由於所涉及到的術語及術語使用的不同，所以分析方法所應表現的特性在本章的下一部分加以規定，並對典型的方法或可以被測量的方法加以描述。

如有如下的情況，必須進行再驗證，分析方法經過修改以後再呈遞給美國藥典的。一種新的產品或新的材料使用已經建立的通用方法的（見下面「含量驗證所需要的基本資料」項下的規定）。

ich檔案給了乙個指南，對下列情況必須要進行再驗證：原料藥合成路線發生了變更，製劑產品的成分發生了變更，分析方法發生了變更。

表一分析方法驗證中的典型的分析特性

準確性精密度

專有性檢測限

定量限線性

範圍◆ 分析方法的表現特性：

一、準確性——

定義——分析方法的準確性就是由這種分析方法得出的結果，與真正數值的一種接近值。分析方法準確性的建立必須有乙個範圍。

確定——對原料藥含量的分析，準確度的確定是分析一種已知純度的被測物質（例如：標準品）而得到，或者是通過與另一種方法的結果進行比較而得到，另一種方法的準確性已經得到了確認。對製劑產品的準確性的確定，可以使用分析製劑配方中每一種成份的已知含量的合成藥的混合物而得到，每一種成份的加入混合是要根據方法規定的範圍來進行的。

如果沒有可能得到製劑產品中的所有組份的樣品，如下的方法也是可以被接受的，在製劑產品中加入一已知濃度的被測物（所謂「植入法」），或者是與第二種已知特性的分析方法的結果進行比較而得到，這第二種分析方法的準確性已有規定或已被確認。

對於雜質定量分析，分析方法的準確性可以通過分析在樣品中（例如，原料藥或製劑）加入已知含量的雜質來評估。如果得不到含一定量雜質或降解產物的樣品，分析結果可以和用另一種已知準確性的方法所得到的資料相比較。

如果得不到資料，必須在與相應的原料藥對比的基礎上來計算雜質的量；如果已知，必須使用雜質與相應的原料藥的等比值（相對因子）。

準確性可以通過計算分析樣品中的已知被測物的**百分率來表示，也可以用平均值與真實值的差加可信限。

ich檔案推薦準確度在專有性的範圍內至少用三個不同有濃度和九次檢測來確定（也就是用三個濃度，每個濃度重複做三次）。

二、精密度——

定義——精密度是指乙個均勻的樣經多次抽樣檢驗，每單個檢驗結果相接近的程度。分析方法的精密度通常可以用一系列檢驗結果的標準偏差或相對標準偏差（變異係數）來表示。分析方法的精密度在正常條件下可以用分析方法的重現性或重複性來測得。

在這裡，重現性就是用相同的檢驗方法，在不同的實驗室做相同研究。中間精度是實驗室內部條件的改變，是在同乙個實驗室，在不同的日期裡，不同的檢驗員和不同的分析儀器做出的結果來表示的。重複性是指在同一實驗室、相同的檢驗員用相同的儀器在一段短時間內所做的分析。

由於多種原因，重複性在美國藥典分析方法中是乙個非常重要的標準，儘管在向藥典呈遞前，實驗室之間的重現性和中間精度在分析方法標準化的過程中也是非常重要的。

測定——精度的測定是要做足夠數量的樣品的含量分析，以能夠用有效的統計學的方法來進行評估。這裡的統計學方法是標準偏差和相對標準偏差（變異係數），這裡所指的含量分析是每乙個樣品按照檢驗方法從頭至尾的全檢。

ich檔案推薦重複性至少要做九次測試（三個濃度，每個濃度重複測三次，或者是把被測物質當作100％濃度測六次）。

三、專有性——

定義——ich檔案規定分析方法的專有性是在有其它成份存在的情況下，例如：雜質、降解產物和輔料，被測物質能準確檢出的能力。如果分析方法不夠專有，可以採用其它的方法進行補充〈備註——有一些享有盛譽的國際權威機構（idpac、aoac）在保留「專有性」時，更加用「選擇性」這個術語。

〉對檢測或含量的分析方法，上述的定義有如下的含義：

鑑別試驗：確保被測物質的鑑別。

純度檢驗：確保所有的檢驗方法能把被檢物中的雜質精確地檢出（例如，有關物質的檢驗，重金屬限度，有機揮發雜質限度等）。

含量分析：提供乙個準確的結果，使樣品中的被測物的含量或效價能被精確地檢出。

確定——定性分析（鑑別反應），應能顯示出與可能共存的物質或結構相似的化合物的選擇能力。含被測物的樣品呈陽性反應，不含被測物質以及結構相似的化合物均成負性反應。

對於雜質的分析方法專有性的確定，可以的樣品中加入適當含量的雜質，雜質被檢出具有適當的準確性和精密度。

對含量的分析，專有性應表現為在樣品中加入雜質或輔料分析結果不受影響。在實際操作中，可以在藥品中加入適量的雜質或輔料，這些另外加入的東西並不使其結果受到影響。

如果雜質或降解產物的標準品買不到的話，專有性分析結果可以與另一種專有性已經被確認的方法的結果比較而得到（例如，藥典方法或其它合法的方法）。這種比較方法可以把樣品儲存在相對嚴酷的條件下（例如，光、熱、濕度、酸鹼水解，氧化）。對含量的分析、結果必須進行比較；用色譜對雜質進行檢驗時，雜質的基本狀況要進行比較。

ich檔案規定，當使用色譜法的時候，代表性的色譜儀必須表現出選擇性、峰必須要有適當的標示。峰純度的檢測（可以用光二級管陣列檢測或質譜檢測），應顯示其色譜峰只對一種成份的屬性。

四、檢測限——

定義——檢測限度就是限度測試的一種特徵性。在規定的實驗條件下被檢測的物質所能檢出的最小量，而不需要被定量檢出。

所以，限度檢測僅僅是表示被檢物質高於或者低於某個濃度。樣品中的被檢物質的檢測限度，通常是用濃度來表示（例如，百分之多少，十億分之多少等）。

方法：——非儀器法。通常是加入已知濃度的被測物，以便建立乙個最小的濃度。

在這個濃度上，被檢物質可以可*地被檢出來。儀器法也可以使用與非儀器法相同的方法。限度檢測作為一種正式檢測，並不需要測出實際含量。

相反，檢測限度是通過比較分析樣品和已知被測物濃度的樣品，而顯示出樣品中的被測物充分地低於要求。例如，需要檢測乙個在0.1%濃度的雜質，就必需證明這個濃度上的雜質檢測的方法是可*的。

用儀器方法時，可以用信噪法，ich檔案描述了乙個常用的方法。訊雜比的確定是通過比較以知低濃度的被測樣品與空白樣品的測試訊號確定被測物可被可*檢測到的最小濃度，通常建議在訊雜比在2：1或3：

1時相應濃度或注入儀器的量確定檢測限。

其他的方法可以是檢驗曲線的斜率和響應訊號的標準差。

無論是用哪一種方法，檢測限都要有乙個隨後的驗證。驗證的方法是要分析適量批量的樣品，這些樣品的含量接近檢測限，或者就是在檢測限上被製備的。

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