城肉食品加工****化驗室
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標題：菌種管理控制程式1.目的
規範化驗室菌種的轉種、使用、保管、儲存和發放等工作。2.適用範圍
適用於化驗室菌種的使用和管理。3.職責
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3.1微生物組：按照本檔案要求做好菌種的轉種、使用、保管、儲存和發放工作。3.2技術負責人：負責監督菌種的使用及管理。4.工作指南
4.1本檢驗室儲存的菌種僅包括一部分致病性細菌，不包括病毒、螺旋體、衣原體、立克次體和真菌等菌種；儲存的菌種主要用於各類培養基、檢測試劑的效能測試和質量控制。4.2菌種的保管
4.2.1化驗室菌種儲存於專用的菌種儲存裝置。4.2.2微生物組檢測員負責保管菌種。
4.2.3菌種應按規定的時間定期轉種，一般每轉種3代做一次鑑定，如發現汙染或變異應及時處理。
4.2.4保管人員工作變動時應作好交接工作。
4.2菌種的使用和儲存4.2.
1菌種的類別
4.2.1.
1化驗室內的標準菌種根據用途不同，分為儲存菌種、傳代用菌種和工作用菌種。4.2.
1.1.1儲存菌種：
以冷凍乾燥保藏為主，用於菌種的長期儲存，一般是從菌種保藏中心或專業化驗室購買得到的標準菌株，用符號s表示。一般可儲存5年。
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標題：菌種管理控制程式
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4.2.1.
1.2傳代用菌種：採用甘油冷凍管保藏法或液體石蠟覆蓋保藏法，用於菌種的傳代，用符號g表示。
甘油冷凍管保藏法一般可儲存2年；液體石蠟覆蓋保藏法一般可儲存3～6個月。4.2.
1.1.3工作菌種：
儲存於瓊脂斜面培養基中，作為工作用菌種，用符號w表示。一般可儲存1～2個月。4.
2.2菌種的接收
菌種購到化驗室後，應在菌種接收記錄上填寫所購菌種的資訊，如名稱、數量和接收日期等。貼好標籤後儲存於-18℃以下。
4.2.3冷凍乾燥菌種的恢復培養
按菌種保藏中心的要求進行恢復培養。4.2.3.1安瓿管開封
用浸過70％酒精的脫脂棉擦淨安瓿管，用火焰將安瓿管頂端加熱，滴無菌水至加熱的安瓿管頂端使玻璃開裂，用銼刀或鑷子敲下已開裂的安瓿管的頂端。4.2.3.2菌株恢復培養
用無菌吸管，吸取0.3-0.4ml適宜的液體培養基（如營養肉湯），滴入安瓿管內，輕輕振盪，使凍乾菌體溶解呈懸浮狀，取約0.
2ml菌體懸浮液，移植於指定的瓊脂斜面/平板培養基上，剩餘的菌液，注入指定的液體培養基內（3-4ml），然後在建議的溫度下（一般培養溫度32.5℃±2.5℃，18～24h）培養。
4.2.3.
3注意事項：菌種活化前，請將安瓿管儲存在5-10℃的環境下；某些菌種經過冷凍乾燥儲存後，延遲期較長，需連續兩次繼代培養才能正常生長。4.
2.4菌種的傳代
菌種傳代一般不超過5代,從菌種儲存中心獲得的冷凍乾燥菌種為第0代。
4.2.4.1冷凍乾燥的菌種在液體培養基內恢復培養（第1代）後，轉種至平板培養基上得到單個純菌落，此為第2代。
4.2.4.
2鑑定菌種後製甘油冷凍管經菌種特性鑑定後，挑取平板上純菌落製成濃菌懸液用於製備甘油冷凍管，此作為第2代傳代用菌種（g2）；同時挑取純菌落轉接斜面，此菌種作為工作用菌種，為第3代（w3）。
4.2.4.3將第2代傳代用菌種（g2）管冷凍儲存（-30℃以下），將第3代工作用菌種（w3）以適當溫度下培養適當時間後可用於實驗。
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4.2.4.
4取一支冷凍儲存的第2代傳代用菌種（g2）轉種於平板和斜面培養基上，平板上的菌種製成甘油冷凍管，為第3代傳代用菌種（g3）；斜面培養基經適當溫度下培養適當時間後可用作第3代工作用菌種（w3）。
4.2.4.5當工作用菌種代數小於5時，可直接用上一代工作用菌種轉接下一代工作用菌種，如w3可直接轉接為w4。
4.2.4.6按上述程式操作，直至g4轉為w5為止，需重新開啟安瓿，再重複上述操作程式保藏和使用菌種。
4.2.5菌種的儲存方法4.2.5.1甘油冷凍管儲存法
甘油冷凍管儲存法適用於儲存傳代用菌種，一般可儲存2年。
4.2.5.
1.1將待儲存用菌種接種至平板或瓊脂斜面，經37℃24～48h培養後，用無菌接種環輕輕刮取菌苔，移至預先裝有試管的無菌蒸餾水中，調整菌液濃度，使其等同於麥氏比濁管第10號管。4.
2.5.1.
2向已製備好的菌懸液中加入等體積，濃度為20%的無菌甘油，得到10%甘油菌懸液。4.2.
5.1.3輕輕振搖，使10%甘油菌懸液充分混合，分裝於無菌小試管中，在-30℃條件下貯存。
4.2.5.
2液體石蠟覆蓋保藏法
液體石蠟覆蓋保藏法適用於儲存傳代用菌種，一般可儲存3-6個月。
4.2.5.2.1取純化菌種穿刺接種於半固體培養基中，經37℃18～24h培養後，加無菌液體石蠟覆蓋半固體表面（高度1厘公尺為宜）。
4.2.5.2.2石蠟油封存以後，放入4℃冰箱中儲存，也可直接放在低溫乾燥處保藏。
4.2.5.
2.3腸道細菌、葡萄球菌一般可儲存3-6個月；儲存o1群和非o1群霍亂弧菌時宜放置室溫陰暗處；儲存副溶血性弧菌時，用含3.5%氯化鈉半固體，宜放置室溫陰暗處；儲存葡萄球菌、鏈球菌可用10%血半固體。
4.2.5.
3斜面低溫儲存法
斜面低溫儲存法適用於儲存工作用菌種，一般可儲存1～2個月。
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取純化菌種轉接種於適宜的固體斜面培養基上，經37℃18～24℃培養後，用紙將管塞部分包紮好，放入4℃冰箱中儲存，也可直接放在低溫乾燥處保藏。4.3菌種的化驗室編號
編號原則：菌種名稱+類別/傳代次數-製備日期或接收日期，例副溶-g3-20081213。
注：菌種名稱使用中文簡稱，如「副溶血性弧菌」用「副溶」表示；「金黃色葡萄球菌」用「金葡」表示；「奇異變形桿菌」用「奇變」表示。4.4菌種的銷毀
4.4.1菌種銷毀採用高壓蒸汽滅菌：
121℃，30分鐘。4.4.
2下列菌種需及時銷毀處理：4.4.
2.1發生汙染或變異的菌種；4.4.
2.2超過儲存期限的菌種；4.4.
2.3使用後的菌種。5.
記錄菌種收發記錄表zljl/519-01菌種傳代記錄表zljl/519-02
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