（一）分子中含有羧基或可羧化的半抗原的偶聯）
1、混合酸酐法，也稱氯甲酸異丁酯法（isobutyl chloroformate method）
偶聯時，半抗原分子中的羧基可與氯甲酸異丁酯在有機溶劑中形成混合酸酐(mixedacidanhydride),然後與蛋白分子中的氨基形成肽鍵。
氨甲喋呤（mit）與β-半乳糖苷酶偶聯的混合酐法
1、5．8mg mit用0.1ml二甲基甲醯胺溶解，冷卻至10度，加2ul氯甲酸異丁酯，10度攪拌反應30分鐘。
2、1.5mg酶用2ml 50 m mol/l na2co3溶解。
3、10度反應4小時（必要時加naoh,以維持溶液的ph為9.0，q然後4度過夜。
4、過sephadex g-25層析柱，柱用含nacl 100m mol/l、mgcl2 10 m mol/l、2-巰基乙醇10mmol/l的50mmol/ltris-醋酸緩衝液(ph7.5)平衡和洗脫，合併含酶的洗脫管內液體，進一步純化後，儲存於含bsa 0.1％（w/v）、nan3 0.
02%(w/v)的緩衝液中。
碳化二亞胺法製備3,3`,5-三碘甲腺氨酸-血藍蛋白免疫原的操作步驟
1、取edc 100mg ,用ph8.0的10 m mol/l pbs液2.5ml使之充分溶解（i液）2、取3，3`,5-三碘甲腺原氨酸25mg ,用0.
2mol/l naoh溶液2ml溶解(ii液)3、取血藍蛋白(lemocyanin) 25mg,溶於10mmol/l pbs（ph8.0）液中（iii液）4、將ii液與iii液混合，在磁力攪拌下逐滴加入i液（餘下0.5ml）5、室溫下避光攪拌1小時，逐滴加入餘下的i液6、4度攪拌12小時7、靜置10小時（4度）
8、有蒸餾水使之充分透析（約48小時），得免疫原。
孕酮與與β-半乳糖苷酶偶聯的n-羥琥珀醯亞胺酯法
1、用二堊烷(dioxane)溶解孕酮-11-半琥珀酸酯，配成濃度為100m mol/l的溶液。
2、加羥琥珀醯亞胺(n-hydroxysuccinimide) 100 m mol/l和dcc（二環已基碳化二亞胺），200 m mol/l, 4度反應16小時。
3、用簿層掃瞄方法純化(氯仿：水=9：1)4、按孕酮/酶摩爾濃度比約為10的比例，將上述溶液加入到酶液（用ph7.4，濃度50 m mol/l的磷酸緩衝液溶解）中。5、
（二）含有氨基或可還原硝基半抗原的偶聯
芳香胺類半抗原與蛋白質重氮化偶聯的操作步驟
1、用0.1 mol/l hcl溶液配製4 m mol/l濃度的半抗原。
2、滴加1％nano2(過量)，4度持續攪拌。nano2的加入量可用澱粉-碘化物試紙或在白色磁磚上加1％澱粉和50m mol/l ki進行監控。游離亞硝酸可將氧化物氧化成碘，碘再與澱粉反應變成藍黑色。
3、溶液變成藍黑色後，繼續反應15分鐘。
4、用ph9.0、濃度為200m mol/l的硼酸或碳酸緩衝液溶解蛋白。5、邊攪拌，邊加入重氮化的半抗原（防止區域性發生酸過量現象），調節ph到9.5。
6、冰箱中攪拌反應2小時，不斷調節ph到9.0。7、用pbs透析2天
8、-20度儲存（濃度為20mg/ml）
雙功能的醯亞胺酯(imidateesters)可以氨基反應，形成脒。例如：用二甲基已二醯亞胺酯(dimethyladipimide)將去甲基三正喋呤(desmethylmortriptyline)與β-半乳糖苷酶偶聯。
應用雙功能醯亞胺酯（imidate esters）製備去甲基三正喋呤-與β-半乳糖苷酶標記特的操作步驟
1、用含5％（w/v）n-乙基嗎啉的無水甲醇0.4ml,在室溫下溶解570ug去甲基三正喋呤和488ug二甲基已二醯亞胺酯(dimethyladipimide)(a液)
2、取與β-半乳糖苷酶100ug,溶於ph9.9的100mmol/l碳酸緩衝液（含mgcl210mmol/l,2-巰基乙醇10 m mol/l 0.1ml(b液)3、將a液倒入b液。
4、20度反應90分鐘後，加含nacl 100 m mol/l, mgcl2 10 m mol/l和2-巰基乙醇10 mmol/l、ph7.5的tris-醋酸緩衝液(50m mol/l) 1ml,終止反應。
5、過sephadex g-25,去除小分子物質，得酶標記物（約75％的酶與半抗原結合，但用三正喋呤代替去甲三正喋呤(demethylmortriptyline )進行偶聯，則只有15％的酶與之結合。
（三）含巰基半抗原的偶聯
可用馬來醯亞胺方法與蛋白偶聯。此外，將載體蛋白用溴乙醯胺(bromoacetamide)啟用。或將載體蛋白與半抗原在ph4.
0的醋酸緩衝液中，通過過氧化氫的作用形成二硫鍵，也可以將半抗原連線到蛋白質分子上。
（四）含羥基的半抗原偶聯
醇類羥基通過形成半琥珀酸酯轉化為羧基的操作步驟1、15g 2,2,2-三氯乙醇（2,2,2-trichloroethanol）,12g琥珀酸酐(succinic anhydride)和8.7ml三乙基胺(triethylamime)用100 ml乙醯乙酯溶解。2、加熱回流1小時。
3、減壓蒸餾去溶劑，,殘餘物用5% nahco3水溶液溶解。4、用乙醚洗滌兩次，然後用h2so4進行s酸化（ph到2.0）.
5、用水洗滌固形物（為三氯乙基半琥珀酸酯）兩次，用氯仿-已烷使其結晶（產量約75％，熔點88-89度）
6、取2.5g半琥珀酸酯溶於6.5ml亞硫醯氯(thionyl chloride)中，65度加熱30分鐘。7、減壓蒸發，乾燥1小時（高度真空條件下）。
8、將上述產生（2，2，2-三氯憶基琥珀醯氯）溶於15mln,n-二甲基-乙酸乙醯胺(n,n-dimethylethylacetamide)中，室溫攪拌反應2小時。
9、65度真空蒸發後，用異丙醇使結晶析出來（得鹽酸化的結晶---5`-酯約84％，熔點160度）。
10、用溶於二甲基甲醯胺中的鋅和醋酸解離三氯乙酯，得f半抗原-半琥珀酸酯，這樣引和的羧基可與蛋白質偶聯（如用碳化二亞胺化）。
半抗原用naio4氧化其中的糖苷醇後再與蛋白質偶聯的操作步驟
1、20mg腺苷溶於1ml 100m mol/l naio4溶液中，4度避光反應30分鐘。2、加1滴乙二醇(得a液)
3、將a液加入到β-半乳糖苷酶液（20mg/ml,用150m mol/l nacl,10m mol/l mgcl2水溶液溶解，用3％k2co3調節ph至9.0）中4、4度反應2小時，期間不斷調節ph9.0
5、加入臨時配製的50 mg/ml nabo4溶液，用量為反應體積的1/10。4度反應過夜。6、用含有mgcl2 10m mol/l,2-巰基乙醇10 m mol/l、nacl 100 m mol/l的50 m mol/l磷酸緩衝液(ph7.
4)透析(更換透析液數次)
（五）含酮基或酮基半抗原的偶聯
是將酮基經羥胺類化合物處理變成肟類化合物，再進一步將肟類化合物中的羥基，衍變成羧基化合物，再進一步進行含羧基半抗原的偶聯操作。這類羥胺類化合物主要有：氨氧乙酸aminoxy acetic acid或羧甲氧胺carboxymethoxyl amine或者鹽酸羥胺酮基的類固醇分子中引入羧基的操作步驟
1、在200ml乙醇中，加入o-(羧甲基)羥胺（o-(carboxyl)hydroxylamine）和酮基半抗原，使其濃度分別為10m mol/l和4m mol/l2、加熱回流90分鐘
3、旋轉蒸發，減少容積，然後加水至40ml，用乙醚抽提4、用水洗滌乙醚抽提物，用na2so4乾燥成白色粉末。
（六）、其他半抗原的偶聯
雖含有游離基團，但因這些基團對於維其生物活性十分重要，因些不能直接用來與載體蛋白偶聯。
製備雌二醇-6-肟的操作步驟a、雌二醇二醋酸鹽的製備
1、1g雌二醇溶於14ml吡啶及3.5ml醋酐中2、加熱回流1小時，冷卻後傾入冰水中。
3、收集白色晶體，得產物約1.1g（熔點126到127度）b、雌二醇-6-酮-二醋酸鹽的製備
4、雌二醇二醋酸鹽1.1g，滴加冰醋酸3.8ml溶解後加含0.93gcro3的含水冰醋酸6.35ml(h2o:hac=0.75:5.6)
5、室溫攪拌1小時，靜置24小時6、用水稀釋，用乙醚提取4次7、用蒸餾水洗2次
8、減壓蒸餾，得結晶油狀渣物。
9、用90度烘乾20分鐘，得粗製品約500mg
10、用11ml無水乙醇溶解粗製品，再加1.1ml冰醋酸及1.5g吉納你特t試劑(giradt)，回流1小時。
11、冷卻後，用冰致冷的蒸餾水稀釋，用2.5mol/lnaoh調節ph至6.0-6.2.12、用乙醚抽提3次，棄去乙醚。
13、水層用濃鹽酸酸化（鹽酸終濃度為1mol/l).14、室溫靜置2小時。15、用乙醚抽提3次。
16、合併乙醚抽提液，用0.125mol/l碳酸鈉溶液洗1次，用蒸餾水洗3次。17、用無水硫酸鈉脫水，蒸乾。18、加7ml醋酐，回流20分鐘。
19、冷卻後傾入用冰致冷的蒸餾水中，然後過濾、乾燥得產物約176mg (熔點為162-166度)c、二醇-6-酮的製備
20、用5.5ml 20％的氫氧化鉀-甲醇溶液(w/v)溶解雌二醇-6-酮-二醋酸鹽（176mg）,在室溫下於氮氣中水解24小時。
21、加蒸餾水稀釋，用乙醚抽提3次。
22、在乙醚提取液中無水硫酸鈉進行脫水，蒸發乾燥，得產物約60mg(熔點為278-282度)d、雌二醇-6-肟的製備23、取雌二醇-6-酮50mg ,鹽酸羧甲基羧胺50mg,溶於20％含水甲醇(v/v)7ml和1mol/l醋酸鈉4ml中，回流1.5小時。
24、減壓、蒸餾、濃縮後，加蒸餾水20ml25、用2 mol/l naoh調節ph至8.5。26、用醋酸乙酯抽提4次
27、水層用1 mol/l鹽酸酸化至ph2.5。28、用醋酸乙酯抽提4次
29、合併抽提液，蒸乾，得產物約100mg(結晶熔點約186-188度)
其他半抗原如：青黴素、生物素、地高辛、螢光素等半抗原交聯。
常用的教學方法簡介
5 示範法教學法 示範如何去做 教師執行一套規範的程式或動作作為有效刺激，引起學生相應的模仿行為。如裝置操作示範 語言示範 態度示範 技能方面的動作示範等。教師示範有關的行為 過程和技巧，並引導學生進行系統觀察，使其直觀 具體地理解某種技術現象或原理，認識構成物件的各種複雜環節，並掌握操作要領。可根...
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