(2)瓊脂糖凝膠電泳
dna在電廠作用下，可以由電源的負極向正極泳動，泳動的速度與dn**段的長度成負相關，與電壓強度成正比，因此可以分離不同長度的dna。在有dna marker（不同已知鹼基對大小的dn**段的混合物）的條件下，由於不同鹼基大小的dn**段在瓊脂糖凝膠上湧動的速度不同，因此電泳完畢後會出現在膠塊的不同位置。通過將擴增出的dn**段與已知的條帶做比較，可以大概推測出該片段的鹼基對的大小。
如果要進一步檢測其大小，可以換另外規格的dna marker 繼續電泳。核酸螢光染料可以與dna嵌合，一起電泳，dna圖譜觀察儀可以激發特定的藍色光源，螢光染料在該光照射下可見到螢光，螢光的亮度與dna大小成正比。
三、實驗儀器及試劑
7種pcr組分微量可調移液器離心管 pcr儀水平電泳槽電泳儀電源紫外分光光度計 250ml錐形瓶(封口膜) 記號筆衛生紙
四、實驗步驟
1、dna體外擴增
(1) 將所有試劑管瞬時離心一次（4000r/min,1min），使管壁沒有殘留藥品，在引物和引物的離心管內用移液器各加入40ul雙蒸水（ddh2o），混勻後瞬時離心一次。所有的離心管都擺到雙面板上。
(2)向裝有taq dna 聚合酶的離心管按下錶加入以下成分：
原有的taq dna 聚合酶有15ul，此時混合液體系共計500ul,此步驟由第
一、二組同學合作完成。（在實驗老師的監督指導下操作，確保此後其他同學的實驗順利進行）
(3)共分25組，第
一、二組的同學併入其他小組進行實驗。每組取20ul的上述混合液於0.5ml的離心管中，加入15ul的液體石蠟封閉體系，以防止在加熱過程中蒸發。
(4) 對自己組的離心管上進行標記之後，放到pcr儀上進行dna擴增。
2、瓊脂糖凝膠電泳檢測dna
（1）用蒸餾水將電泳槽和梳子沖洗乾淨，放在水平桌面上，並架好梳子。
（2）配製濃度為1%（1 g/100 ml）的瓊脂糖凝膠2塊。在錐形瓶中，稱取1g的瓊脂糖粉，加入100ml 1x電泳緩衝液，用封口膜封住瓶口後在微波爐內加熱，使瓊脂糖粉熔化，然後冷卻至60 ℃，倒入電泳槽中（每塊膠50ml），插好梳子，待其凝固。（電泳槽首先用透明膠帶將兩端封住再進行倒膠）
（3）待膠凝固後，去掉膠帶紙，小心移去梳子，注意不要破壞加樣孔。將倒膠槽至於水平電泳槽內，梳井（點樣孔）一端朝負極方向。向電泳槽中緩緩倒入1x電泳緩衝液，以沒過膠面2 mm為宜。
（5）將80ul的6xloading buffer 加入到80ul的核酸螢光染料中，按1:1比例混合。
（6）移液器槍頭插入到擴增出的樣品離心管的底部，吸取20ul樣品於另一0.5ml的離心管中，注意不要吸到液體石蠟，再加1ul的染料混合液，充分振盪混勻。用移液器吸取10ul緩慢加入梳井內，槍頭抵到梳井口，以防止樣液被緩衝液沖散，此外，為防止手抖將凝膠破壞，可以用左手扶住右手的手腕。
（6）蓋上電泳槽蓋，接通電源，電壓為80 v，電流最大。
（7）當指示劑移動到凝膠中間時，斷開電源，終止電泳。
（8）取出凝膠塊，在dna圖譜觀察儀中觀察電泳帶及其位置，判斷擴增產物的情況。
3、紫外分光光度計檢測dna含量
（1）最後1組取2ulpcr反應液，加入98ul蒸餾水，將樣品稀釋50倍。
（2）以蒸餾水作為空白對照，在波長260nm處，將紫外分光光度計的讀數調節至零。
（3）加入dna稀釋液100ul至比色杯中，測定260nm處的光吸收值。
（4）根據下面的公式計算dna含量：
dna含量（ul/ml）=50*（260nm的讀數）x稀釋倍數
五、注意事項
1 離心機上蓋沒有鎖，在離心機運轉時，轉速最高可達16000r/min，如果這時開啟離心機上蓋，裡面的離心管就會甩出，對人身造成危險，切忌等全部停下來之後再開啟上蓋取出離心管。另外，離心管一定要對稱放置。
2 水平電泳槽在電泳時一定要蓋上上蓋，此時的緩衝液電壓可以達到80v，大大超過了人體的安全電壓，切忌不能用手觸碰緩衝液或者是電源兩端接頭。
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