質粒dna的轉化
1、lb平板：將滅菌後的固體培養基（加入了抗生素），倒入90 mm的培養皿中(約10 ml)；
氨卞青黴素（amp+）: 儲存液濃度50 mg/ml、工作濃度為60 μg/ml
卡那（kan）:儲存液濃度50 mg/ml、工作濃度為25 μg/ml
四環素（tet）: 儲存液濃度5 mg/ml、工作濃度為25 μg/ml
2、200 μl槍頭，1.5 ml ep管，滅菌；
3、水浴鍋42℃（熱擊）；
電轉化1. 凍存的感受態細胞trans b (de3)，先於冰上溶解；分裝感受態細胞，每個小管50 μl。
2．加入用於轉化的質粒dna 0.1 μl；
3．轉入電擊杯，插入電擊儀電擊（調節電擊儀，使電脈衝為25μf，電壓2.5kv，電阻200ω）；
4．冰上放置30 min；
5．於42℃熱擊30 sec；
6．迅速放於冰上，5 min；
6．加入300 μl lb液體培養基，放入恆溫振盪器37℃、200rpm、1 h 30 min；
7，然後用加樣槍將菌液加到lb平板上，用推棒塗平，將有培養基的一面向下倒置培養過夜。
1、取15 ml的離心管編號，並依次加入1 ml的lb broth.在培養細菌的lb plate用10 l槍頭挑取1個菌落加入離心管，放入恆溫**器，37℃、150-200 rpm過夜培養。
2、過夜培養的菌：200 l菌液+200 l 30%甘油凍存於-20℃。
50 l菌液+5 ml lb broth 37℃、150-200 rpm培養3-4 h，取200 l測od600的值，剩餘菌液再加入iptg（終濃度為0.1mm），培養過夜，取200 l測od600的值。
3、離心：取200 l菌液於1.5 ml的ep管中，3000 rpm、5 min棄去上清液，收集沉澱
4、沉澱+16 l 1 × pbs（槍頭打散）+4 l 5× protein loading buffer/3.2 l 6× protein loading buffer置於100℃空氣煮5 min。
（15 ml的離心管中剩餘的菌液離心棄去上清液，置於-20℃儲存，用於蛋白電泳為陽性結果的蛋白純化）
質粒DNA的提取及電泳檢測
一實驗目的 通過本實驗學習掌握鹼裂解法提取細菌質粒dna。二實驗原理 1.細菌中有兩種dna，即染色體dna和質粒dna。2.質粒dna的提取方法有三種 鹼裂解法，煮沸法，去汙劑 如triton和sds 裂解法。3.鹼裂解法比較劇烈，可破壞鹼基配對，使宿主細胞dna變性，共價閉合環狀dna由於空間纏...
質粒DNA的提取 定量 酶切與PCR鑑定實驗報告
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植物總DNA的提取
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