動物組織基因組DNA的提取

2022-10-05 15:51:10 字數 808 閱讀 7211

4. 加入200μl無水乙醇,充分振盪混勻15s,此時可能出現絮狀沉澱,簡短離心以去除管蓋內壁的水珠。(沉澱dna)

6. 向吸附柱cb3中加入500μl緩衝液gd (使用前先檢查是否已加入無水乙醇),12,000rpm(~13,400×g)離心30s,倒掉廢液,將吸附柱cb3放**集管中。

7. 向吸附柱cb3中加入700μl漂洗液pw (使用前先檢查是否已加入無水乙醇),12,000rpm(~13,400×g)離心30s,倒掉廢液,將吸附柱cb3放**集管中。

8. 向吸附柱cb3中加入500μl漂洗液pw,12,000rpm(~13,400×g)離心30s,倒掉廢液。(6、7、8為漂洗)

9. 將吸附柱cb3放**集管中,12,000rpm(~13,400×g)離心2min,倒掉廢液。將吸附柱cb3置於室溫放置數分鐘,以徹底晾乾吸附材料中殘餘的漂洗液。

注意:這一步的目的是將吸附柱中殘餘的漂洗液去除,漂洗液中乙醇的殘留會影響後續的pcr等實驗。

10. 將吸附柱cb3轉入乙個乾淨的離心管中,向吸附膜的中間部位懸空滴加50-200μl洗脫緩衝液te,室溫放置2-5min,12,000rpm(~13,400×g)離心2min,將溶液收集到離心管中。(溶解洗脫dna)

注意:採用矽基質膜吸附的dna,可將dna在低鹽高ph值條件下洗脫下來。ph值在7.0-8.5之間洗脫效率較高,ph值低於7.0則洗脫效率很低。

洗脫緩衝液體積不應該少於50μl,體積過小影響**效率。為增加基因組dna的得率,可將離心得到的溶液再加入吸附柱cb3中,室溫放置2min, 12,000rpm(~13,400×g)離心2min。

dna產物應儲存在-20℃,以防止dna降解。

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