第一章一．名詞解釋
1、基因工程：按工程學原理，將外源基因切割，與載體結合，匯入受體細胞，使其穩定表達的過程。
2、目的基因：開發人們特殊需要的基因產物或與優良性狀相關的基因。
3、工具酶：體外進行dna合成、切割、連線、修飾等過程需要的酶。
4、dna藥物：在受體細胞內表達產物有藥理作用或通過定位整合直接抑制致病基因的dna。
二．基因工程理論依據
（1）基因具有相同的物質基礎
（2）基因可以切割
（3）基因可以轉移
（4）基因與多肽有對應關係
（5）基因的密碼是通用的
（6）基因可以通過複製遺傳給下一代
三．基因工程研究內容
（1）轉殖載體的研究
（2）受體的研究
（3）工具酶的研究
（4）目的基因的研究
（5）新技術的研究
第二章一．名詞解釋
1、dna變性：dna在較高溫下，雙鏈間氫鍵斷開，形成單鏈dna的過程。
2、dna復性：變性的dna，降溫時恢復為雙鏈dna的過程。
3、解鏈溫度：讓dna達到50%變性的溫度。
4、複製子：從複製起點開始複製出乙個dna分子或片段的核苷酸序列。
5、啟動子：不轉錄rna，是rna聚合酶的識別結合位點。
6、轉錄區：能轉錄相應rna，包括編碼區和終止子。
7、操縱子：原核生物中兩個以上基共用乙個啟動子。
8、內含子：真核生物轉錄區中的非編碼間隔序列。
9、限制性核酸內切酶：使乙個磷酸二酯鍵斷開的脫氧核糖核酸酶。
10、稀切酶：有較長的識別序列和富含gc或at的識別序列的限制性核酸內切酶。
11、同裂酶：不同的酶有相同的識別序列。
12、同尾酶：切割不同識別序列產生相同末端的不同酶。
13、黏性末端：兩條鏈斷開位置是交錯的，叫黏性末端。
14、平末端：兩條鏈斷開位置是平齊的，叫平末端。
15、位點偏愛：某些限制酶對同一介質中的有些位點表現出偏愛性切割，即對不同位置的同乙個識別序列表現出不同的切割效率的現象稱作位點偏愛。
16、酶活單位：限制酶最適條件下60分鐘切割1ugdna所需的酶活性。
17、容積活性：1ul酶活單位所具有的酶活性。
18、限制酶的star活性：一些特定條件下，可以切斷與原來識別序列不同的鹼基序列，這個現象叫star活性。
19、寡核苷酸連桿：含限制酶識別序列的寡核苷酸序列。
20、銜接頭：含有一種以上限制酶識別序列，其一端或兩端已具有酶切產生的粘末端。
21、dna晶元：dn**段按事先設計的排列方式固定在載玻片或尼龍膜上組成的密集分子排列。
22、dna連線酶：能催化雙鏈dn**段緊靠的3』和5』形成磷酸二酯鍵的酶。
23、dna分子片段化：用限制酶將dna切割成可用於連線重組的片段的過程。
24、限制性圖譜：限制酶識別序列在dna上的分布圖。
二．dn**段連線方式
（1）互補粘末端的dn**段連線
（2）具平末端的dn**段連線
（3）dn**段修飾後連線
（4）dn**段加連桿後連線
三、寡核苷酸的化學合成法
（1）磷酸二酯法
（2）磷酸三酯法
（3）固相亞磷酸三酯法
（4）dna晶元法
種類：引物、連桿、銜接頭、dna晶元
四、何謂pcr
原理：以dna互補鏈聚合反應為基礎，通過dna變性，引物與模板一側復興雜交，耐熱dna聚合酶催化引物延伸等過程多次迴圈，獲得大量dna的技術。
方法：1、pcr管加入靶dna
2、加入緩衝液和引物
3、加熱至90-95℃
4、降溫至37-60℃，加taq dna聚合酶
5、公升溫至70-75℃，延伸1min
6、迴圈25-40次，最後一次延伸5min
7、-20℃儲存待用
五．dna晶元原理
經過處理的載玻片上鋪dna連桿，連桿上用光照可除去的光敏基團保護羥基，用特製掩護摸保護不需合成基團，光照下，出現游離羥基，按設計在加上帶光敏保護基團的核苷酸，然後加第
二、三……個，直至形成探針。探針與靶dna結合發生強螢光，用雷射共振顯微鏡激發檢測。
第三章一．名詞解釋
1、cos位點：進入細菌細胞後，便迅速通過黏性末端配對形成雙鏈環狀的dna分子，這種黏性末端結合形成雙鏈的區域稱為cos位點。
2、cos細胞系：非洲綠猿腎細胞系，經複製起始缺陷的sv40轉化，產生能組成型表達sv40t抗原的細胞株。
3、co**id轉殖載體：λ噬菌體衍生物，由質粒和含有cos位點的λdn**段組裝的一類新載體。
4、強啟動子：轉錄35srna的啟動子。
5、微型染色體：sv40（猴空泡病毒40）dna與宿主組蛋白結合，形成的念珠狀核小體。
6、早期轉錄區：轉錄與感染相關的t抗原與t抗原基因。
7、晚期轉錄區：轉錄殼蛋白（vp1， vp2，vp3）等。
8、sv40取代載體：用外源dna取代sv40dna的晚期轉錄區或部分早期轉錄區，構建成相應的晚期或早期轉錄區取代型轉殖載體。
9、微型病毒複製質粒轉殖載體：含sv40dna複製起始位點，缺t抗原，只能轉染cos細胞系和hfs細胞系。
10、整合平台：受體細胞基因組上給定的外源dna定位整合的區域。
11、定位整合轉殖載體：除一般質粒轉殖載體必備元件，還含有1或2個與整合平台核苷酸序列同源的dn**段。
12、基因打靶：利用整合平台系統轉基因的方法。
13、反義核酸技術：與靶基因能互補的dna、rn**段，可以特異結合封閉靶基因。
二．λ噬菌體作為轉殖載體的依據：
（1）λ噬菌體是一種溫和噬菌體（安全）
（2）能承載較大外源dna（大）
（3）λ噬菌體dna有多種限制酶識別位點，便於多種外源dna酶切片段的轉殖。（多）
構建策略和路線：
（1）切去λdna非必須區和多餘酶切位點
（2）在λdna非必須區組入標記基因
（3）重組λdna包裝為顆粒，匯入受體細胞
三．camv的閱讀框和間隔區：
8個閱讀框：orf，orf， orf， orf ，orf， orf，orf， orf
8個間隔區：ir1， ir2， ir3
轉殖位點：orf，orf
四．ad（腺病毒）的特點：
（1）宿主廣，易感染；毒性低，安全
（2）可容納外源dn**段（2kb），且外源dna不插入染色體
（3）ad的dna為線性dna分子
應用價值：
（1）表達真核基因
（2）研究開發疫苗
（3）基因**癌症
五．定位整合載體的模式：
（1）內源平台雙交換置換載體
（2）外源平台雙交換置換載體
（3）內源平台雙交換插入載體
（4）內源平台單交換插入載體
六．yac（酵母人工染色體）特點：可容納1000kb甚至3000kb的外源dn**段。
組成：（1）含有質粒的ori ，apr和
（2）含酵母染色體的tel（端粒）,ars（染色體dna複製起始位點）,cen（著絲粒）,trp（色氨酸缺陷）,ura （尿嘧啶缺陷）,sup4
七．載體分類：
（1）質粒載體
（2）病毒或噬菌體載體
（3）染色體定位整合轉殖載體
（4）人工染色體轉殖載體
（5）特殊用途載體
特殊用途載體：
（1）組織特異性表達載體
（2）啟動子探針載體
（3）串聯啟動子表達載體
（4）雙啟動子表達載體
（5）含增強子表達載體
（6）誘導表達載體
（7）反義表達載體
(8)分泌性表達載體
第四章一．名詞解釋
1、基因組文庫：某種生物基因組全部遺傳資訊通過轉殖載體儲存在乙個受體菌群，這個群體叫基因組文庫。
cdna文庫：生物基因組mrna逆轉錄產生的各種cdn**段與載體重組，通重載體儲存於受體菌群，這個菌群叫cdna文庫。
2、鳥槍法：用多種內切酶使用基因組隨機產生片段，並用產生的片段作為模板進行轉殖的方法。
3、表達型cdna文庫：目的基因表達為蛋白質，並用抗體篩選。
非表達型cdna文庫：目的基因不表達為蛋白質，並用探針篩選。
4、表達序列標籤（est）：能特異標記某個基因的序列，能顯示該基因與其它基因的區別。
序列標籤（st）：含有乙個獨特轉錄物的足夠資訊量，可代表此轉錄的特異性。
5、表達圖譜： cdna和基因序列在染色體上的定位分布圖。
6、dna標籤法：dna插入植物基因內部或鄰位通過突變形成新基因，插入的序列相當於在植物基因貼了乙個標籤。若序列已知，可作為探針篩選目的基因。
7、rda：代表性差別分析，通過野生型與突變型基因組比較來分離鑑定突變基因的方法。
8、抑制pcr：利用鏈內退火優於鏈間退火的特點,使非目的序列片段兩端反向重複序列在退火時產生類似發卡的互補結構,無法作為模板與引物配對,從而選擇性抑制非目的基因片段的擴增.。
9、差別雜交：通過製備兩個不同群體的mrna提取物，來篩選目的基因的一種技術。
二、製備目的基因的方法：
（1）直接分離法
（2）化學合成法
（3）pcr法
（4）構建基因文庫法
直接分離法包括：
（1）物理化學法
（2）限制酶切法
（3）逆轉錄法
（4）雙抗體免疫法
三．cdna文庫構建步驟：
（1）總mrna的製備分離
（2）cdna的合成
（3）雙鏈cdna的合成
（4）雙鏈cdna與載體重組
（5）重組載體匯入宿主細胞
（6）篩選目的基因
四．從基因文庫分離目的基因的方法：
（1）序列轉殖法
（2）基因定位轉殖法
（3）基因定位候選轉殖法
（4）目的基因功能轉殖法
（5）功能結合法
（6）染色體顯微切割與微轉殖法
（7）dna插入誘變法
（8）差別雜交和減法雜交
（9）差示分析法
（10）根據生物大分子間相互作用分離
第五章一．southern印記雜交，northern印跡雜交，斑點印跡雜交，菌落原位雜交比較
southern印記雜交：是進行基因組dna特定序列定位的通用方法。用瓊脂糖凝膠電泳分離經限制性內切酶消化的dn**段，將膠上的dna變性並在原位將單鏈dn**段轉移至固相支援物，經固定，再與相對應結構的標記探針進行雜交，用放射自顯影或酶反應顯色，從而檢測特定dna分子的含量。
northern印跡雜交：與southern印記雜交相似，但主要檢測rna。
斑點印跡雜交：在southern印記雜交基礎上發展起來，將變性的dna或rna直接轉移到雜交濾膜，然後用核酸探針分子雜交，以檢測核酸樣品中是否有特異的dna或rna。
菌落原位雜交：將細菌從培養平板轉移到硝酸纖維素濾膜上，然後將濾膜上的菌落裂菌以發布dna。將dna烘乾固定於膜上與探針雜交，放射自顯影檢測菌落雜交訊號，並與平板上的菌落對位。
二．探針標記物種類：
（1）放射性標記物
（2）非放射性標記物：生物素，地高辛，螢光素
受體要求：
（1）便於重組dna匯入
（2）使重組dna穩定存在
基因工程複習
第二章分子轉殖工具酶 基因工程工具酶 限制性內切酶 主要用於dna分子的特異切割 dna甲基化酶 用於dna分子的甲基化 核酸酶 用於dna和rna的非特異性切割 核酸聚合酶 用於dna和rna的合成 核酸連線酶 用於dna和rna的連線 核酸末端修飾酶 用於dna和rna的末端修飾 其它酶類 用於...
A基因工程複習題
一 單項選擇題 每題1分，共40題，共4 0分 1 基因工程誕生於 年。a 1972b 1973 c 1971d 1978 2 基因工程操作的三大基本元件是 i 基因 供體 ii 受體 iii 載體 iv 抗體 v 配體 i ii iiii iii iv ii iii ivii iv v 3 第乙個...
基因工程專題
專題九第1講 一 選擇題 1 我國科學工作者培育的轉基因抗蟲棉，其抗蟲基因 於 a 蘇雲金芽孢桿菌中的抗蟲基因 b 棉鈴蟲變異形成的致死基因 c 寄生在棉鈴蟲體內的線蟲基因 d 普通棉的突變基因 答案 a 解析 用於植物抗蟲基因工程研究的基因很多，但並不是所有的基因均可用於轉基因抗蟲棉的培育，而應根...