人淋巴細胞的方便**是外周血
分離的原則是收率較高、純度較好、失活較低。
根據不同試驗有相對純度，無論採用哪種方法，應盡最大可能保持細胞應有活性。
分離的技術可由細胞的物理性狀和表面標誌設計，根據不同實驗目的可採用密度梯度離心法、吸附分離法和其它特殊分離法。
外周血各種血細胞的密度不盡相同，利用淋巴細胞分層液（ficoll）作密度梯度離心，使一定比重的細胞群按相應密度梯度分布，從而將各種血細胞加以分離。
為此利用一種密度介於1.075～1.092之間而近於等滲的溶液（分層液）做密度梯度離心，使一定密度的細胞按相應密度梯度分布，從而將各種血細胞加以分離。
常用的分層液有ficoll和percoll兩種。
1.採血，稀釋 （外周血：稀釋液=1：2）
2.在離心管中加入ficoll，沿傾斜的管壁緩緩加入稀釋的外周血 （ficoll：稀釋血=1：2）
3、20℃，1500r/min，離心30min
從上一次至下
稀釋的血漿、血小板
pbmc
ficoll
紅細胞、粒細胞
4.沿管壁周緣輕輕吸取pbmc層移入另一試管中。
5.加足量稀釋液充分洗滌，1800 r/min離心10min ，棄上清。
6.重複洗滌一次，1400r/min離心10min，棄上清。
7.適量的培養基重懸細胞 ，計數。
分離單個核細胞純度為95%
淋巴細胞約佔90%～95%
(一)紅細胞的去除
一般採用無菌蒸餾水低滲裂解法或0.83%氯化銨處理法。
(二)血小板的去除
將pbmc懸液通過離心洗滌2～3次，常可去除pbmc中絕大部分混雜的血小板。
在某些疾病狀態下，若外周血中血小板數量異常增多，可採用胎牛血清(fcs)梯度離心法
去除pbmc中混雜的血小板。
（三）單核細胞和粒細胞的去除
1．粘附去除法
原理：單核細胞和粒細胞在37℃和ca離子存在條件下能主動粘附在玻璃、塑料、尼龍
毛、棉花纖維或葡聚醣凝膠。採集的非粘附細胞即為淋巴細胞。
優點：簡便易行，對細胞損傷極少。
缺點：b細胞也有較弱的粘附能力，因此有部分b細胞丟失。
該法去除單核細胞後，大約95%的單個核細胞為淋巴細胞，活性大於95%。
2．羰基鐵粉吞噬法
原理：單核細胞具有吞噬羰基鐵粉的能力，吞噬羰基鐵粉後的單核細胞密度增大。
方法一：經聚蔗糖-泛影葡胺分層液密度梯度離心後，則單核細胞沉積於管底而被去除。
方法二：用磁鐵將細胞吸至管底，上層液中即含較純的淋巴細胞。
3．苯丙氨酸甲酯去除法
原理：苯丙氨酸甲酯(pme)具有親溶酶體性質，能滲入細胞溶酶體內被水解為游離氨基酸，導致溶酶體內因滲透壓改變而破裂，釋放出的酶類物質可引起細胞溶解。
用該法可溶解含溶酶體的細胞，如單核細胞、粒細胞和成纖維母細胞等，b細胞和大多數t細胞因缺乏溶酶體酶，因而不受影響。
該法去除單核細胞後，約99%的單個核細胞為淋巴細胞，活性大於95%。
原理：根據相應細胞的特性和不同的標誌加以選擇性純化。
常用方法：
1）e花環分離法
2）尼龍纖維分離法
3）流式細胞術
4）磁珠分離術
5）親和板結合分離法
淋巴細胞分離的常用方法及原理
檢驗學中的淋巴細胞分離的常用方法及原理是事業單位考試中重要的考點之一，是需要我們著重掌握的內容。今天讓我們一起來學習相關的知識點吧。純淋巴細胞群的採集是利用單核細胞在37 和ca2 存在時，能主動粘附在玻璃 塑料 尼龍毛 棉花纖維或葡聚醣凝膠的特性，從單個核細胞懸液中除去單核細胞，從而獲得純淋巴細胞...
輔助性T細胞之淋巴細胞亞群
輔助性t細胞介紹 上海優寧維生物科技 輔助性t細胞是淋巴細胞的乙個亞群，它對於免疫系統的建立以及功能的完善非常重要。這種細胞的特殊之處在於，它沒有溶解細胞或吞噬細胞的作用，但卻可以啟用並指導其他免疫細胞。在一些專業的抗原提呈細胞 apcs 如樹突狀細胞，巨噬細胞以及b細胞的啟用下，抗原特異性的cd4...
流產布魯氏菌誘導人類T淋巴細胞的凋亡
brucella abortus induces apoptosis of human t lymphocytes 摘要 免疫逃避是布魯氏菌在面對cd4 t細胞有效的適應性反應後在其內存活的必要條件。之前我們已經證明可以通過下調mhc 分子的表達及巨噬細胞的抗原呈遞間接的抑制cd4 t細胞。然而，目...