細胞核的分離與鑑定

2022-05-20 15:36:46 字數 1245 閱讀 6344

實驗專案

細胞器(核)的分離與核酸的鑑定

一實驗原理

細胞內各種結構的比重和大小等都不相同,在同一離心場內其沉降速度也不同,所以利用各細胞器在一定介質中的沉降速度的差異,可採取離心的方法,將細胞器分離出來。

差速沉降離心法:採用逐漸增加離心速度或低速和高速交替進行離心,使沉降速度不同的顆粒,在不同的離心速度及不同離心時間下分批分離的方法。

細胞器沉降先後順序先後是細胞核、線粒體、溶酶體和其他微體、核醣體和大分子。

細胞核的比重和大小與其他組分不同,分離細胞核最常用的方法是將組織製成勻漿,在均勻的懸浮介質用特定的離心、分離,然後進一步分析鑑定。其基本過程包括組織勻漿、分級分離和分析3個步驟。

勻漿是指在低溫下,將組織塊放入勻漿器,加入等滲勻漿介質進行研磨,破碎細胞,使之成為各種細胞器及其包含物的勻漿液。

二實驗用品

1.材料:小白鼠肝臟

2.試劑:生理鹽水、0.25mol/l蔗糖-0.003mol/l氯化鈣溶液、1%甲苯胺藍染液。

3.儀器裝置:顯微鏡、離心機、天平、離心管、滴管、玻璃漏斗、量筒、25毫公升燒杯、解剖剪、鑷子、沖洗瓶、紗布、玻璃勻漿器、載玻片、蓋玻片、染色盤架。

三實驗步驟

1.處死:斷頭處死小白鼠,手提尾部使腹內血液盡量流出。

2.取材:迅速開腹取肝,在盛有生理鹽水的小燒杯中反覆洗滌,稱取濕重約1g的肝組織放入在燒杯中。

3.勻漿:加入8ml預冷的0.

25mol/l蔗糖-0.003mol/l氯化鈣溶液與燒杯中,盡量剪碎肝組織,將剪碎的肝組織倒入玻璃勻漿器,使勻漿下端浸入盛有冰塊的器皿。左手握持勻漿器,右手將搗杆垂直插入管中勻漿,直至看不到明顯的組織塊。

4.過濾:用8層紗布過濾勻漿液與離心管中。

5.離心:在天平上平衡每對離心管,2500r/min離心15min,取上清液與另一離心管中,大約剩餘1ml左右的上清液。

6.塗片:取上清液制一張(標記1)。將原離心管中剩餘上清液吹打沉澱成懸液,另製一張塗片(標記2),自然乾燥。

7.染色:分別在塗片1、2上滴加甲苯胺藍染液,染色5~7min(即滴染)

8.洗滌:衝去染液,晾乾。

9.鏡檢:結合實驗結果的描述,鏡下觀察分析。

四注意事項

1.規範操作,防止滴管、試劑的汙染。

2.細核懸液的平鋪要輕柔;

4.使用離心機注意平衡,轉速從低到高;

5.各項混勻的工作,要充分,並且要注意安全,防止液體溢位。

五預期結果

經鹼性固綠染色的核體塗片被染成綠色,說明這是鹼性蛋白,即細胞核。

細胞核導學案

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