血凝抑制實驗常出現的錯誤

2023-02-12 06:15:02 字數 2659 閱讀 5997

一、 原理

病毒能夠與雞紅細胞發生凝集現象,這種紅細胞凝集現象可被特異性免疫血清所抑制,即紅細胞凝集抑制實驗(hi)。

二.應用

由於血凝反應可被特異性抗體所抑制,抗體與病毒結合後,血凝素不能吸附於紅細胞表面的受體上,因此血凝抑制實驗可以用於:

1.檢測血清中的抗體水平。

2.鑑定病毒。

3.輔助診斷病毒性疾病。

4.作為適時免疫的輔助手段,能避免免疫失敗、免疫空擋及重複免疫造成的損失。

三、ha、hi實驗結果示意圖

ha、hi實驗示意圖

a、c:ha實驗:凝集到第9孔;凝集價512

b、d:hi實驗:抑制到第6孔;抗體水平6個滴度

四、hi實驗易出現的錯誤

1、 對照孔凝集(如圖1)

1 鹽類凝集:所謂鹽類凝集即稀釋液中氯化鈉達至一定高濃度時,即使沒有血清抗體也能發生凝集反應。

2 當生理鹽水被細菌汙染時也可出現對照孔凝集。

3 血清變質或受細菌汙染。

圖(1)

2、全部凝集(如圖2)

1 當紅細胞受細菌汙染或儲存時間過長可出現此現象。

2 抗原滴加時出現失誤,工作抗原效價過高。

3 生理鹽水受細菌汙染或其它因素.

圖(2)

3、紅細胞全部下滑(如圖3)

①當配製抗原時,配製工作抗原效價過低,不足以凝集雞紅細胞。

②加樣時所有孔全部加成生理鹽水亦出現下圖現象。

圖(3)

4.工作抗原效價過高或過低對結果都有一定的影響。過高,測定抗體效價偏低;過低,測定效價過高,甚至很高。(見圖4)

圖(4)同一血清

a為工作抗原效價過低,第12孔抗原對照孔沒有100%凝集,這樣測定抗體就過高(211以上)

b為正確的工作抗原效價對照,實際抗體為28

c為工作抗原效價過高,測定抗體偏低,為25

5.不同**、不同濃度的紅細胞會使結果差異很大,所以紅細胞**一定要相同:

一般需要3只或3只以上公雞來提供紅細胞,將3只以上公雞紅細胞混合在一起。也可由1只公雞來提供紅細胞,但必須經臨床多次使用證明是可行的。有抗體雞提供的紅細胞需要更多次數洗滌。

但要注意有時不同的公雞提供的紅細胞對禽流感h5亞型抗體測定,效價差異很大。不同濃度的紅細胞對抗體測定也有影響。

6.溫度對實驗結果也有影響,一般要求在室溫25-37℃進行實驗,當實驗溫度低於4℃時紅細胞有時會發生自凝現象。

7.抗原與抗體作用時間過長或過短對結果影響較大:過短出現凝集不完全;過長出現洗脫現象。

8.96孔v型板是否洗淨,是否光滑也會影響實驗結果。

以上所述都是平時操作中容易出現的錯誤,所以進行實驗時一定要嚴格操作,每次測定應有嚴格的溫度範圍和作用時間,出現錯誤時要認真查詢原因,以免類似錯誤再次出現。另外,所用抗原應是穩定性好,效價高的濃縮抗原。

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