一、為了延長hplc液相幫浦的使用壽命和維持其輸液的穩定性請按照以下注意事項操作：
1、防止任何固體微粒進入hplc液相幫浦體，因為塵埃或其它任何雜質都會磨損hplc液相柱塞、hplc密封環、hplc液相缸體和hplc液相單向閥，因此應預先除去流動相中的任何固體微粒。流動相最好在玻璃容器內蒸餾，而常用的方法是過濾，可採用millipore濾膜（0.2um或05um）等濾器。
幫浦的入口都應該連線砂濾棒（或片），輸液幫浦的濾器應經常更換。
2、流動相不應含有任何腐蝕性物質，含有緩衝液的流動相不應保留在幫浦內，尤其是hplc停幫浦過夜或更長時間的情況下。如果將含有緩衝液的流動相留在hplc液相幫浦內，由於蒸發或洩漏，甚至只是由於溶液的靜止，就可能析出鹽的微小晶體，這些晶體將和上述固體微粒一樣損壞hplc密封環和hplc柱塞等。因此，必須hplc幫浦入純水充分清洗後，再換成適合於hplc色譜柱儲存和有利於hplc幫浦維護的溶劑（對於反相鍵合固定相，可以是甲醇或甲醇和水）。
3、hplc幫浦工作時要留心防止溶劑瓶內的流動相用完，否則hplc空幫浦
運轉也磨損hplc柱塞、hplc密封環或hplc缸體最終產生漏液。
4、hplc輸液幫浦的工作壓力不要超過規定的最高壓力，否則會使高壓密封環變形，產生漏液。
5、流動相應先脫氣，以免在hplc幫浦內產生氣泡，影響流量的穩定性，如果有大量氣泡hplc幫浦就無法工作。
二、如果hplc輸液幫浦產生故障，需查明原因，採取相應的措施排除故障：
1、沒有流動相流出，又無壓力指示。原因可能是hplc幫浦內有大量的氣體，這時可開啟洩壓閥，使hplc幫浦在較大的流量（5ml/min）下運轉，將氣泡排盡，也可用乙個50ml的注射器在幫浦出口處幫助抽出氣體。另乙個原因可能是hplc密封環磨損，需更換。
2、hplc壓力的流量不穩。原因可能是氣泡，需要排除，或者是單向閥內有異物，可以卸下hplc單向閥，浸入丙酮內，進行超聲清洗。有時有可能是砂濾棒內有氣泡或被鹽的微小晶體粒或滋生的微生物部分堵塞，這時卸下砂濾棒浸入流動相內，超聲除氣泡，或將砂濾棒（片）浸入稀酸（如4mol/l硝酸）內迅速除去微生物或將鹽溶解，再立即清洗。
3、hplc壓力過高的原因，是管路被堵塞，需要清除或清洗。壓力降低的原因則可能是管路有洩漏。檢查堵塞或洩漏時可逐段進行。
hplc-液相色譜儀檢定中常見的影響因素及解決方法:1.氣泡
由於hplc系統中氣泡的存在，會造成色譜圖上出現尖銳的雜訊峰，嚴重時會造成分析靈敏度下降；氣泡變大進入流路或色譜柱時會使流動相的流速變慢或不穩定，使基線起伏。造成上述現象的主要原因有三條：一是流動相溶液中往往因溶解有氧氣或混入了空氣而形成氣泡；二是系統開始工作時未能將流路中的空氣驅趕乾淨；三是在注入樣品時不注意混入了空氣。
為了避免這類問題的出現，hplc實際分析過程中必須重視對流動相進行脫氣處理；在hplc系統開始工作前，可以用注射器連線恆流幫浦的排空閥，抽入流動相，將流路中的空氣驅趕乾淨；在注入樣品前注意排出樣品注射器中的空氣。2.柱溫
在操作hplc時，色譜柱是在室溫環境下工作的。大多數的工作環境溫度是不斷變化的，溫度的差別就會引起較複雜的問題。溫度的影響在所有的色譜分析方式中都是存在的，hplc方法中的洗脫方式受溫度的影響。
等度洗脫時溫度會影響保留時間，當溫度公升高時所有的色譜峰都前移了，等度洗脫時一般溫度每公升高１℃，保留時間會縮短（1~3）％。溫度變化對梯度洗脫和等度洗脫的影響趨勢是一樣的。溫度變化對梯度洗脫的影響要小於對等度洗脫的影響。
即便如此，若梯度洗脫時不控制溫度的話，保留值一般也會有較大的變化。溫度變化還可能引起選擇性顯著變化。
正如柱子不能完全平衡將導致保留時間的重現性差一樣，柱溫不平衡也會導致不理想的後果，這個問題在峰寬上的影響尤其明顯。當溫度變化時除了選擇性和保留時間的變化之外，峰寬也會發生變化。公升高溫度通常會使理論塔板數公升高，峰寬變窄，由於峰面積不變，峰越窄就會越高，因此公升高溫度可以達到更小的檢測限。
柱子裡的溫度變化也會影響峰形。當流動相和柱子之間的溫差增大時，由溫度不平衡而導致的峰變形就會加劇。
為了獲得一致的結果我們必須要控制柱溫，使用柱溫箱是最好的辦法。如果沒有柱溫箱，最有效的辦法就是將色譜柱隔絕在乙個溫度波動最小的地方。
3.色譜柱汙染
色譜柱汙染會引起保留時間漂移。hplc色譜柱是非常有效的吸附性過濾器，它可以過濾並吸附流動相攜帶的任何物質。汙染源可能是：
流動相本身，流動兼容器，連線管、幫浦、進樣器和儀器密封墊，以及樣品等。
樣品中如果存在hplc色譜柱上保留很強的組分，就可能使保留時間漂移。通常樣品中的強保留組分具有較高的分子量，在此情況下，保留時間漂移的同時或其後會有反壓的增加。可以通過使用固相提取等樣品前處理方法來去除樣品基質的影響。
避免hplc色譜柱汙染最簡單的方法是防患於未然。相比之下，找到問題的所在並設計有效的清洗步驟以去除汙染物要困難的多。通常使用在給定色譜條件下的強溶劑，但並非所有汙染物都可以在流動相中溶解。
使用保護柱是個非常有效的方法。反衝hplc色譜柱僅是不得已時採用的辦法。
色譜柱平衡
如果我們觀察到保留時間漂移，首先應考慮色譜柱是否已用流動相完全平衡。通常平衡需要10~20個柱體積的流動相。但如果在流動相中加入少量新增劑則需要相當長的時間來平衡hplc色譜柱。
需要柱子的充分平衡，然後才能對hplc進行檢定。
5.流動相有機溶劑
hplc分析總要求使用hplc純的試劑，關鍵是兩點：純度高、紫外吸收
小。純度高，是希望沒有雜質干擾hplc分析；不會有金屬離子損害純度為99.99%以上的高純度矽膠基質。
可以通過重蒸分析純溶劑；或濾膜過濾，並定期把前置的過濾頭取下，放稀硝酸裡清洗，再用純水洗至中性。
流動相有機溶劑可能影響hplc的檢測限。6.柱壓
hplc柱壓過高是hplc分析中常碰到的問題。其原因有多方面，而且常常並不是hplc柱子本身的問題。hplc溶劑或樣品含有顆粒雜質，這些雜質將篩板堵塞引起壓力上公升，應更換hplc柱子入口篩板；幫浦內有空氣，解決的辦法是清除hplc幫浦內空氣，對溶劑進行脫氣處理；比例閥失效，應更換hplc比例閥；幫浦密封墊損壞，應更換hplc密封墊；系統檢漏，則hplc找出漏點，密封即可。
hplc分析中，在色譜柱正常，樣品靈敏度足夠，分析方法合適，色譜峰在出峰時間較短的條件下，峰形應對稱而尖銳。充分考慮到可能影響分析結果的因素，可以科學地進行液相色譜儀的檢定。
高效液相色譜實驗報告
4 檢測系統 hplc檢測器分為通用型檢測器和專用型檢測器兩類。通用型檢測器可連續測量色譜柱流出物 包括流動相和樣品組分 的全部特性變化。這類檢測儀器包括示差折光檢測器 介電常數檢測器 電導檢測器和磁光旋轉檢測器。這類檢測器適用範圍廣，但是對於流動相有響應，受溫度變化 流動相流速和組成變化的影響，檢...
高效液相色譜原理和操作詳解
高效液相色譜 我國藥典收載高效液相色譜法專案和數量比較表 鑑於hplc應用在藥品分析中越來越多，因此每乙個藥品分析人員應該掌握並應用hplc。i 概論 2 一 液相色譜理論發展簡況 2 二 hplc的特點和優點 2 三 色譜法分類 3 四 色譜分離原理 3 ii 基本概念和理論 5 一 基本概念和術...
液相色譜問題總結
hplc色譜常見問題 1.用hplc進行分析時保留時間有時發生漂移，有時發生快速變化，原因何在？如何解決？2.液相色譜中峰出現拖尾或出現雙峰的原因是什麼？3.hplc靈敏度不夠的主要原因及解決辦法 4.做hplc分析時，柱壓不穩定，原因何在？如何解決？5.我最近更換了另一種牌號的ods柱，雖然分離情...