儀器分析實驗報告
實習名稱： 液相色譜分析實驗
學院： 化學工程學院
專業： 化學工程與工藝
班級： 化工班
姓名： 學號
指導教師
日期一、實驗目的
1、了解液相色譜的構造、原理及操作技術；
2、了解並熟悉液相色譜儀的流程及操作方法。
二．實驗原理
液相色譜由幫浦、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。
高效液相色譜分析的流程。由幫浦將儲液瓶中的溶劑吸入色譜系統，然後輸出，經流量與壓力測量之後，匯入進樣器。被測物由進樣器注入，並隨流動相通過色譜柱，在柱上進行分離後進入檢測器，檢測訊號由資料處理裝置採集與處理，並記錄色譜圖。
廢液流入廢液瓶。遇到複雜的混合物分離（極性範圍比較寬）還可用梯度控制器作梯度洗脫。這和氣相色譜的程式公升溫類似，不同的是氣相色譜改變溫度，而hplc改變的是流動相極性，使樣品各組分在最佳條件下得以分離。
高效液相色譜的分離過程。同其他色譜過程一樣，hplc也是溶質在固定相和流動相之間進行的一種連續多次交換過程。它借溶質在兩相間分配係數、親和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差別使不同溶質得以分離。
開始樣品加在柱頭上，假設樣品中含有3個組分，a、b和c，隨流動相一起進入色譜柱，開始在固定相和流動相之間進行分配。分配係數小的組分a不易被固定相阻留，較早地流出色譜柱。分配係數大的組分c 在固定相上滯留時間長，較晚流出色譜柱。
組分b的分配係數介於a，c之間，第二個流出色譜柱。若乙個含有多個組分的混合物進入系統，則混合物中各組分按其在兩相間分配係數的不同先後流出色譜柱，達到分離之目的。
不同組分在色譜過程中的分離情況，首先取決於各組分在兩相間的分配係數、吸附能力、親和力等是否有差異，這是熱力學平衡問題，也是分離的首要條件。其次，當不同組分在色譜柱中運動時，譜帶隨柱長展寬，分離情況與兩相之間的擴散係數、固定相粒度的大小、柱的填充情況以及流動相的流速等有關。所以分離最終效果則是熱力學與動力學兩方面的綜合效益。
三．儀器及試劑
儀器：液相色譜儀（大連依利特）、微量注射器
試劑；乙腈和0.1%磷酸水溶液1:1混合液、樣品（氨基布洛芬）
4．操作流程或步驟
1、準備(老師已備好)
(1) 準備所需的流動相，用合適的濾膜過濾，超聲脫氣；
(2) 根據待檢樣品的需要選擇並安裝好合適的色譜柱；
(3) 配置樣品和標準溶液（也可在平衡系統時配製），用合適的濾膜過濾；
(4) 檢查儀器各部件的電源線、資料線和輸液管道是否連線正常；
(5) 開機：接通電源，依次開啟不間斷電源、幫浦、檢測器，和檢測器自檢後，開啟印表機、電腦顯示器、主機，最後開啟色譜工作站。
(6) 用樣品液潤洗注射器，潤洗乾淨後，取20l標準液，注入貯液器，觀察電腦上峰的形成。
(7) 用潤洗液潤洗注射器，潤洗乾淨後，取20l樣品也，注入貯液器，觀察電腦上峰的形成，一次方法測量多組。
(8) 實驗完成後，清理實驗儀器，關閉相應儀器，最後關閉電源。
2、引數設定
（1）波長設定：在檢測器顯示初始螢幕時，按[func]鍵,用數字鍵輸入波長值，按[enter]鍵確認。按[ce]鍵退出到初始螢幕，也可以選擇lc-solution軟體方便地設定；
(2)流速設定：在幫浦顯示初始螢幕時，按[func]鍵,用數字鍵輸入所需的流速（柱**時流速一般不超過1ml/min），按[enter]鍵確認。按[ce]鍵退出，也可以選擇lc-solution軟體設定；
(3)流動相比例設定：在a幫浦顯示初始螢幕時，按[func]鍵,用數字鍵輸入流動相b的濃度百分數，按[enter]鍵確認。按[ce]鍵退出，也可在軟體中設定。
3、更換流動相併排氣泡
將a/b管路的吸濾器放入裝有準備好的流動相的儲液瓶中，逆時針轉動a/b幫浦的排液閥180o，開啟排液閥，按a/b幫浦的[purge]鍵，pump指示燈亮，幫浦大約以9.9ml/min的流速沖洗，3min（可設定）後自動停止，將排液閥順時針轉到底，關閉排液閥，如管路中有氣泡，則重複以上操作直至氣泡排盡。
4、平衡系統
(1) 按幫浦的[pump]鍵，亮pump指示燈。用檢驗方法規定的流動相沖洗系統，一般最少需6倍柱體積的流動相，觀測幫浦控制螢幕上的壓力值，壓力波動應不超過1mpa。
(2) 觀察基線變化。如果沖洗至基線漂移<0.01mv/min，雜訊為<0.001mv時，可認為系統已達到平衡系統，可以進樣。
(3) 進樣：將樣品用濾膜過濾，用10ul玻璃注射器將樣品液體從進樣閥進（注意，進樣時，盡量不要讓針頭接觸進樣孔的壁），進好樣後，進行測試，觀察工作電腦桌面上液相曲線變化，測試完後停止進樣，用電腦進行資料分析。
5、關機實驗完畢後，關閉儀器和電腦。
五．實驗引數
見附頁6．實驗結論
1.已知液相關資料的計算
1）理論塔板數的計算
如圖取第3組、第8組得
峰高的平均值
峰面積平均值a=(1825.31+1758.64)/2=1791.975
如圖取第3組資料，
保留時間：
2）分離度的計算
取資料第2組，第3組資料
取第3組，第4組資料
取：r=1.5作為相鄰兩峰完全分離的標準。即可得到如下結論：
，可認為完全分離。
，可認為完全分離。
2.未知液相關資料的計算
取第12組、16組、20組資料
峰高平均值
峰面積平均值a=(170.84+174.42+176.54)/3=173.93
1）理論塔板數的計算
同上代入第16組資料，如下
2）分離度的計算
取第15、16組資料：
取資料第16、17組資料
，可認為完全分離。
，可認為完全分離。
7．結論
標準液峰分別是出現在2.97750min的第3個峰、出現在9.34500min的第8個峰；三次樣品峰分別是出現在15.
49583min的第12個峰、出現在20.46667min的第16個峰和出現在26.50883min的第20個峰。
由於實驗組分比較簡單，只要在實驗過程中，嚴格控制且定量進樣，就能得出準確的實驗結果。若採用歸一化法或內標法，雖然能得到準確更高的實驗結果，但由於實驗操作及計算均較為複雜，實驗及資料處理的時間長，效率相對不高，故實驗中採用外標法作為定量的方法。
最佳色譜條件的選擇是本實驗準確度的關鍵。進樣針進樣時確保進樣針中沒有殘留氣泡，另外，在進不同濃度或不同的物質前因先用甲醇溶液潤洗乾淨，以免相互影響。
8．注意事項
(1) 流動相必須用hplc級的試劑，使用前過濾除去其中的顆粒性雜質和其他物質。
(2) 使用緩衝溶液時，做完樣品後應立即用去離子水沖洗管路及柱子，然後用甲醇(或甲醇水溶液)沖洗，以充分洗去離子。對於柱塞杆外部，做完樣品後也必須用去離子水沖洗20ml左右。
(3) 每次做完樣品後應該用溶解樣品的溶劑清洗進樣器。
(4) 氣泡會致使壓力不穩，重現性差，所以在使用過程中要盡量避免產生氣泡。
(5) 如果進液管內不進液體時，要使用注射器吸液：通常在輸液前要進行流動相的清洗。
(6) 更換流動相時應該先將吸濾頭部分放入燒杯中邊振動邊靖洗，然後插入新的流動相中。
九．問題討論
影響柱效能的主要因素有：填料、柱壓、溫度、流速。於是在實驗過程中要注意儀器在執行中不能進入氣體，否則會導致壓力不穩定，影響柱效。
色譜柱標明了流體的流動方向，不要改變其流動方向，否則會降低色譜柱的效能。
為什麼不能用純乙腈作為流動相？因為這樣會使單向閥粘住而導致幫浦不進液。
高效液相色譜實驗報告
4 檢測系統 hplc檢測器分為通用型檢測器和專用型檢測器兩類。通用型檢測器可連續測量色譜柱流出物 包括流動相和樣品組分 的全部特性變化。這類檢測儀器包括示差折光檢測器 介電常數檢測器 電導檢測器和磁光旋轉檢測器。這類檢測器適用範圍廣，但是對於流動相有響應，受溫度變化 流動相流速和組成變化的影響，檢...
高效液相實驗報告
篇一 高效液相色譜實驗報告 一 實驗目的 1了解液相色譜的發展歷史及最新進展 2 學習液相色譜的基本構造及原理 3 掌握液相色譜的操作方法和分析方法，能夠通過hplc分離測定來對目標化合物的分析鑑定。二 實驗原理 液相色譜法採用液體作為流動相，利用物質在兩相中的吸附或分配係數的微小差異達到分離的目的...
液相色譜問題總結
hplc色譜常見問題 1.用hplc進行分析時保留時間有時發生漂移，有時發生快速變化，原因何在？如何解決？2.液相色譜中峰出現拖尾或出現雙峰的原因是什麼？3.hplc靈敏度不夠的主要原因及解決辦法 4.做hplc分析時，柱壓不穩定，原因何在？如何解決？5.我最近更換了另一種牌號的ods柱，雖然分離情...