篇一：高效液相色譜實驗報告
一 、實驗目的
1了解液相色譜的發展歷史及最新進展 2 學習液相色譜的基本構造及原理
3 掌握液相色譜的操作方法和分析方法，能夠通過hplc分離測定來對目標化合物的分析鑑定。
二 、實驗原理
液相色譜法採用液體作為流動相，利用物質在兩相中的吸附或分配係數的微小差異達到分離的目的。當兩相做相對移動時，被測物質在兩相之間進行反覆多次的質量交換，使溶質間微小的性質差異產生放大的效果，達到分離分析和測定的目的。液相色譜與氣相色譜相比，最大的優點是可以分離不可揮發而具有一定溶解性的物質或受熱後不穩定的物質，這類物質在已知化合物中占有相當大的比例，這也確定了液相色譜在應用領域中的地位。
高效液相色譜可分析低分子量、低沸點的有機化合物，更多適用於分析中、高分子量、高沸點及熱穩定性差的有機化合物。80%的有機化合物都可以用高效液相色譜分析，目前以已經廣泛應用於生物工程、製藥工程、食品工業、環境檢測、石油化工等行業。
三 、高效液相色譜的分類
吸附色譜法、分配色譜法、空間排阻色譜法、離子交換色譜法、親和色譜法、化學鍵合相色譜法
四 、高效液相色譜儀的基本構造
高效液相色譜至少包括輸液系統、進樣器、分離柱、檢測器和資料處理系統等幾部分。 1 輸液系統：
包括貯液及脫氣裝置、高壓輸液幫浦和梯度洗脫裝置。貯液裝置用於存貯足夠量、符合hplc要求的流動相。高效液相色譜柱填料顆粒比較小，通過柱子的流動相受到的流動阻力很大，因此需要高壓幫浦輸送流動相。
2 進樣系統：
將待測的樣品引入到色譜柱的裝置。液相色譜進樣裝置需要滿足重複性好、死體積小、保證柱中心進樣、進樣時引起的流量波動小、便於實現自動化等多項要求。進樣系統包括取樣、進樣兩項功能。
3 分離柱：
色譜柱是色譜儀的心臟、柱效高、選擇性好、分析速度快是對色譜柱的一般要求。商品化的hplc微粒填料，如矽膠和以矽膠為基質的鍵合相、氧化鋁、有機聚合物微球（包括離子交換樹脂）等的粒度通常在3μm、5μm、7μm、以及10μm。採用的固定相粒度甚至可以達到1μm，而製備色譜所採用的固定相粒度通常大於10μm。
hplc填充柱效的理論值可以達到50000/m～160000/m理論板，一般採用100-300mm的柱長可滿足大多數樣品的分析的需要。由於柱效內、外多種因素的影響，因此為使色譜柱達到其應有的效率。應盡量的減小系統的死體積。
4 檢測系統：
hplc檢測器分為通用型檢測器和專用型檢測器兩類。通用型檢測器可連續測量色譜柱流出物（包括流動相和樣品組分）的全部特性變化。這類檢測儀器包括示差折光檢測器、介電常數檢測器、電導檢測器和磁光旋轉檢測器。
這類檢測器適用範圍廣，但是對於流動相有響應，受溫度變化、流動相流速和組成變化的影響，檢測靈敏度低，不能用於梯度洗脫的分離模式。專用型檢測器對樣品中組分的某種物理或化學性質敏感，可用於測量被分離組分某類特性的變化。這類檢測器包括紫外檢測器、螢光檢測器、質譜檢測器、放射性檢測器。
5 資料處理系統：
資料處理系統可以分為資料處理系統和專用智慧型處理系統兩類，前者可以完成一般的色譜資料處理任務，有些軟體可以實現部分儀器的控制功能。前者即一般的色譜工作站，後者通常稱之為專家系統。
五 、實驗資料
資料一：資料二：
11ｈｐｌｃ－ｌ
六 、高效液相色譜的使用中的注意事項
流動相：
1 、流動相應選用色譜純試劑、高純水或雙蒸水，酸鹼液及緩衝液需經過濾後使用，過濾時注意區分水系膜和油繫膜的使用範圍；
2、 水相流動相需經常更換（一般不超過2天），防止長菌變質； 樣品：
1、 採用過濾或離心方法處理樣品，確保樣品中不含固體顆粒；
2、 用流動相或比流動相弱（若為反相柱，則極性比流動相大；若為正相柱，則極性比流動相小）的溶劑製備樣品溶液，盡量用流動相製備樣品液；
手動進樣時，進樣量盡量小，使用定量管定量時，進樣體積應為定量管的3～5倍； 色譜柱：
1、 使用前仔細閱讀色譜柱附帶的說明書，注意適用範圍，如ph值範圍、流動相型別等； 2、 使用符合要求的流動相； 3、 使用保護柱；
4、 如所用流動相為含鹽流動相，反相色譜柱使用後，先用水或低濃度甲醇水（如5％甲醇水溶液），再用甲醇沖洗。
5、 色譜柱在不使用時，應用甲醇沖洗，取下後緊密封閉兩端儲存； 6、 不要高壓沖洗柱子；
7、 不要在高溫下長時間使用矽膠鍵合相色譜柱；篇二：分析實驗報告高效液相色譜
華南師範大學實驗報告
學號： 專業： 年級班級： 課程名稱：儀器分析實驗實驗專案：液相色譜分析混合樣品中的苯和甲苯實驗時間：
一、[實驗目的:]
1、掌握高效液相色譜定性和定量分析的原理及方法 2、了解高效液相色譜的構造、原理及操作技術二、[實驗原理:]
高效液相色譜法：以液體作為流動相的色譜法。它是在經典液相色譜實驗基礎上，引入氣相色譜的理論，在技術上採用高壓輸液幫浦，高效固定相和高靈敏的檢測器，而發展起來的快速分離分析技術。
具有分離效能高，檢出限低，操作自動化和應用範圍廣的特點。
其基本原理：利用欲分配的諸組分在固定相和流動相間的分配有差異（即由不同的分配係數），當兩相做相對運動時，這些組分在此兩相中分配反覆進行，從幾千次到百萬次，即使組分的分配係數只有微小差異，隨著液體流動相卻可以有明顯的差異，最後使這些組分都得到分離，通過檢測器時，樣品濃度被轉換成電訊號傳送到記錄儀。 三、[儀器和試劑:
]1.主要儀器：島津液相色譜儀(lc-10at)[配有紫外檢測phenomenexo柱]； 10μl微量注射器 2、試劑： 甲醇、水
苯和甲苯混合待測溶液苯標準溶液：2.0μl/ml
甲苯標準溶液：2.0μl/ml苯、甲苯混合標準溶液：1.0μl/ml、2.0μl/ml、5.0μl/ml、10.0μl/ml 四、[實驗步驟]
1、按操作規程開機。
2、.選擇合適的流動相配比，優化色譜條件
通過調節溶劑甲醇和水的混合比例，從而來優化色譜調劑。
調好最佳色譜條件，控制流速為1ml/min。柱溫30℃，檢測波長354nm 3、苯、甲苯定性分析
在最佳條件下，待基線走穩後，用10μl微量注射器分別進樣10μl苯和甲苯混合待測溶液，10μl苯標準溶液（2.0μl/ml）和10μl甲苯標準溶液（2.0μl/ml）(微量注射器用甲醇潤洗3～5遍)，觀察並記錄色譜圖上顯示的保留時間，確定苯和甲苯的峰。
4、苯、甲苯定量分析
在最佳條件下，待基線走穩後，用10μl微量注射器分別進樣1.0μl/ml、2.0μl/ml、5.
0μl/ml 10.0μl/ml的苯和甲苯混合標準溶液10μl。觀察並記錄各色譜圖上的保留時間和峰面積。
繪製苯和甲苯混合標準溶液峰面積與相應濃度的標準曲線 5、苯和甲苯混合待測溶液分析
根據得到的苯和甲苯混合待測溶液的液相色譜圖上顯示的峰面積值，從繪製的標準曲線上查出苯和甲苯混合待測溶液中苯和甲苯的各自的濃度。 六、實驗資料處理及分析 1、色譜條件優化
2.00
色譜1.75
70%1.50
1.251.00
0.75
0.50
0.250.00
min 分析：本次實驗分別選擇了甲醇：水=60%：
40%，70%：30%，80%：20%的溶劑配比，通過比較不同溶劑配比條件下，甲苯和苯的峰寬、保留時間從而確定採用甲醇：
水=80%：20%作為本次實驗的最佳色譜條件。 2、定性分析
5.04.54.03.53.02.52.01.51.00.50.0-0.5
μmin
分析：在同一色譜操作條件和進樣量下，分別測定試樣溶液中苯和甲苯組分及已知苯和甲苯純物質的保留時間，並將其色譜峰、保留時間與對應的已知苯和甲苯純物質進行比較，兩者基本相同，從而確定混合樣品中含有苯和甲苯。 3、定量分析
苯、甲苯混合標準溶液濃度分別為：1 ul/ml, 2 ul/ml, 5 ul/ml, 10 ul/ml。
4、未知樣品濃度
七、結果討論
1、實驗中為什麼採用標準曲線法作為定量的方法？
答：因為實驗中待測溶液的組分只有苯和甲苯兩種物質，組分比較簡單。只要在實驗過程中，嚴格控制且定量進樣，就能採用操作、計算簡便的標準曲線法得出準確的實驗結果。
若採用歸一化法或內標法，雖然能得到準確更高的實驗結果，但由於實驗操作、計算複雜，不能快速分析，故實驗中採用標準曲線法作為定量的方法。
2．在選擇溶劑時，溶劑的極性是選擇的重要依據。
採用正相液-液分配分離時：首先選擇中等極性溶劑，若組分的保留時間太短，降低溶劑極性，反之增加。也可在低極性溶劑中，逐漸增加其中的極性溶劑，使保留時間縮短。
3．選擇流動相時應注意的幾個問題
（1）盡量使用高純度試劑作流動相，防止微量雜質長期累積損壞色譜柱和使檢測器雜訊增加。
（2）避免流動相與固定相發生作用而使柱效下降或損壞柱子。如使固定液溶解流失；酸性溶劑破壞氧化鋁固定相等。
（3）試樣在流動相中應有適宜的溶解度，防止產生沉澱並在柱中沉積。 （4）流動相同時還應滿足檢測器的要求。當使用紫外檢測器時，流動相不應有紫外吸收。
4．影響分離的因素與提高柱效的途徑
1）．液體的黏度比氣體大一百倍，密度為氣體的一千倍，故降低傳質阻力是提高柱效主要途徑，降低固定相粒度可提高柱效。
2）．液相色譜中，不可能通過增加柱溫來改善傳質；（恆溫）3）．改變淋洗液組成、極性是改善分離的最直接的因素。 5. 高效液相色譜與氣相色譜的主要區別可歸結於以下幾點：
(1)進樣方式的不同：高效液相色譜只要將樣品製成溶液，而氣相色譜需加熱氣化或裂解；
(2)流動相不同，在被測組分與流動相之間、流動相與固定相之間都存在著一定的相互作用力；
(3)由於液體的粘度較氣體大兩個數量級，使被測組分在液體流動相中的擴散係數比在氣體流動相中約小4~5個數量級；
(4)由於流動相的化學成分可進行廣泛選擇，並可配置成二元或多元體系，滿足梯度洗脫的需要，因而提高了高效液相色譜的解析度（柱效能）；
(5)高效液相色譜採用5~10lm細顆粒固定相，使流體相在色譜柱上滲透性大大縮篇三：高效液相實驗報告
化學與環境化學科學學院分析化學駱洪偉 20144015016
一、實驗目的
1.了解高效液相的實驗原理。
2.學習並掌握高效液相色譜儀(hplc)的操作步驟。
二、實驗原理
高效液相色譜由儲液器，幫浦、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成，儲液器中的流動相被高壓幫浦打入系統，樣品溶液經進樣器進入流動相，被流動相載入色譜柱內，由於樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配係數，在兩相中作相對運動，經過反覆多次的吸附—解吸的分配過程，各組分在移動速度上產生較大的差別，被分離成單個組分依次從柱內流出，通過檢測器時，樣品濃度被轉換成電訊號傳送到記錄儀。
高效液相色譜實驗報告
4 檢測系統 hplc檢測器分為通用型檢測器和專用型檢測器兩類。通用型檢測器可連續測量色譜柱流出物 包括流動相和樣品組分 的全部特性變化。這類檢測儀器包括示差折光檢測器 介電常數檢測器 電導檢測器和磁光旋轉檢測器。這類檢測器適用範圍廣，但是對於流動相有響應，受溫度變化 流動相流速和組成變化的影響，檢...
液相色譜實驗報告
儀器分析實驗報告 實習名稱 液相色譜分析實驗 學院 化學工程學院 專業 化學工程與工藝 班級 化工班 姓名 學號 指導教師 日期一 實驗目的 1 了解液相色譜的構造 原理及操作技術 2 了解並熟悉液相色譜儀的流程及操作方法。二 實驗原理 液相色譜由幫浦 進樣器 色譜柱 檢測器 記錄儀等幾部分組成。高...
液位實驗報告
專案一液位檢測儀表安裝 除錯與維護 任務一浮筒式液位計的安裝 除錯與維護 一 實驗目的 掌握浮筒式液位計的安裝方法及注意事項，更夠用各種方法校驗浮筒液位物位計的精度是否合格，並認識到浮筒液位計的工作環境和日常維護工作。二 儀表的相關知識 1.浮筒液位計是根據阿基公尺德原理，當物體被浸沒的體積不同是物...