hplc色譜常見問題
1.用hplc進行分析時保留時間有時發生漂移，有時發生快速變化，原因何在？如何解決？
2.液相色譜中峰出現拖尾或出現雙峰的原因是什麼？
3.hplc靈敏度不夠的主要原因及解決辦法
4.做hplc分析時，柱壓不穩定，原因何在？如何解決？
5.我最近更換了另一種牌號的ods柱，雖然分離情況仍可以，但保留時間不重現，為什麼？
6.我購買的hplc柱驗收測試時柱壓過高，請問為什麼？
7.色譜雙峰產生的可能及判斷和處理
8.色譜柱中的流動相會排幹嗎？
9.使用peek（polyetheretherketone）管路和接頭需要注意什麼問題？
10.液相色譜梯度洗脫中柱溫的影響有那些？
11.為何基線會漂移
12.規則的基線噪音是如何產生的
13.不規則的基線噪音是如何產生的
14.保留時間漂移的故障排除
15.為何出現肩峰或分叉？
16.為何出現鬼峰？
17.為何出現峰拖尾？
18.為何出現峰展寬？
19.除了流速外，還有哪些因素能引起壓力改變？
20.什麼是強溶劑、弱溶劑？
21.怎樣才會使峰位發生重排？
22.除了**脫氣常用的實驗室脫氣方式還有哪些？
23.評價乙個色譜柱的最基本指標有那些？
24.什麼是時間常數？
25.為什麼在實驗過程中有時會出現倒峰？
26.為何會出現「胖"峰和平頭峰？怎樣避免？
27.什麼是次級保留效應？
28.前延峰的發生及處理？
29.峰變寬的原因？
30.柱平衡慢的常見原因有哪些？
31.用內標法實驗時對內標物的要求有哪些？
32.管子切割與安裝注意事項？
33.什麼是hplc的「無限直徑效應"？
34.如何評價一台檢測器？
35.如何簡單判斷比例閥是否內漏？
1.用hplc進行分析時保留時間有時發生漂移，有時發生快速變化，原因何在？如何解決？
關於漂移問題：
① 溫度控制不好，解決方法是採用恆溫裝置，保持柱溫恆定
② 流動相發生變化，解決辦法是防止流動相發生蒸發、反應等
③ 柱子未平衡好，需對柱子進行更長時間的平衡
關於快速變化問題
① 流速發生變化，解決辦法是重新設定流速，使之保持穩定
② 幫浦中有氣泡，可通過排氣等操作將氣泡趕出。
③ 流動相不合適，解決辦法為改換流動相或使流動相在控制室內進行適當混合
2.液相色譜中峰出現拖尾或出現雙峰的原因是什麼？
① 篩板堵塞或柱失效，解決辦法是反向沖洗柱子，替換篩板或更換柱子。
② 存在干擾峰，解決辦法為使用較長的柱子，改換流動相或更換選擇性好的柱子
③ 可能柱超載，減少進樣量。
3.hplc靈敏度不夠的主要原因及解決辦法
① 樣品量不足，解決辦法為增加樣品量
② 樣品未從柱子中流出。可根據樣品的化學性質改變流動相或柱子
③ 樣品與檢測器不匹配。根據樣品化學性質調整波長或改換檢測器
④ 檢測器衰減太多。調整衰減即可。
⑤ 檢測器時間常數太大。解決辦法為降低時間引數
⑥ 檢測器池窗汙染。解決辦法為清洗池窗。
⑦ 檢測池中有氣泡。解決辦法為排氣。
⑧ 記錄儀測壓範圍不當。調整電壓範圍即可。
⑨ 流動相流量不合適。調整流速即可。
⑩ 檢測器與記錄儀超出校正曲線。解決辦法為檢查記錄儀與檢測器，重作校正曲線。
4.做hplc分析時，柱壓不穩定，原因何在？如何解決？
① 幫浦內有空氣，解決的辦法是清除幫浦內空氣，對溶劑進行脫氣處理；
② 比例閥失效，更換比例閥即可；
③ 幫浦密封墊損壞，更換密封墊即可；
④ 溶劑中的氣泡，解決的辦法是對溶劑脫氣，必要時改變脫氣方法；
⑤ 系統檢漏，找出漏點，密封即可；
⑥ 梯度洗脫，這時壓力波動是正常的。
5.我最近更換了另一種牌號的ods柱，雖然分離情況仍可以，但保留時間不能重現，為什麼？
這是因為被分析物可能具有形成氫鍵的能力。儘管過去幾年來，填料的製造技術有了極大的提高，但不同的廠商的ods填料表面矽醇基的濃度不同。正是這些矽醇基可能與樣品發生相互作用。
因此，同一被分析物中的各組分在不同牌號的ods柱上的相對保留時間就可能不同。在流動相中加入少量競爭物，如三乙基胺（tea），將會使矽醇基的成鍵能力飽和，從而能保證不同牌號柱子上的相對保留時間具有較好的重現性。
如分離情況可以，系統穩定，達到系統適用性要求，就不必保留時間的重現。
6.我購買的hplc柱驗收測試時柱壓過高，請問為什麼？
柱壓過高是hplc柱使用者最常碰到的問題。其原因有多方面，而且常常並不是柱子本身的問題，您可按下面步驟檢查問題的起因。
① 拆去保護預柱，看柱壓是否還高，否則是保護柱的問題，若柱壓仍高，再檢查；
② 把色譜柱從儀器上取下，看壓力是否下降，否則是管路堵塞，需清洗，若壓力下降，再檢查；
③ 將柱子的進出口反過來接在儀器上，用10倍柱體積的流動相沖洗柱子，（此時不要連線檢測器，以防固體顆粒進入流動池）。這時，如果柱壓仍不下降，再檢查；只用於使用過的柱子。
④ 更換柱子入口篩板，若柱壓下降，說明您的溶劑或樣品含有顆粒雜質，正是這些雜質將篩板堵塞引起壓力上公升。若柱壓還高，請與廠商聯絡。一般情況下，在進樣器與保護柱之間接乙個**過濾器便可避免柱壓過高的問題，sge提供的rheodyne 7315型過濾器就是解決這一問題的最佳選擇。
7.色譜雙峰產生的可能及判斷和處理
hplc分析中，在色譜柱正常，樣品靈敏度足夠，分析方法合適，色譜峰在出峰時間較短的條件下（不包括梯度），峰型應對稱而尖銳。但是，在對樣品了解程度不夠，方法不妥，樣品處理方法及進樣方式不合理下，會出現各種意想不到的問題，而對色譜峰難以作出合理的解釋，尤其對於新手更是如此。下面根據本人幾年工作的體會，提出一些看法，向同仁指教。
色譜雙峰指的是明是一種物質，但在色譜圖**現雙峰，而表明含二種物質。我將這種情況分為四種原因。
1 色譜柱
如果你分析樣品時發現每個色譜峰都雙峰出現（出峰越快，雙峰的可能性會減少），尤其採用單一純物質時，可以肯定色譜柱出問題－柱頭受損或柱頭固定相變髒或流失。如果進樣量少，原來色譜柱正常，色譜峰的形狀多為一大峰帶一小峰，不一定拖尾，這一般應是柱頭受堵，將色譜柱反過來接，用流動相沖洗或酸洗或其它溶劑，將堵在柱頭的殘留物沖掉，再反過來，一般情況下就行了。當然不反衝，正沖有時也會正常的。
如果峰拖尾，雙峰強弱相差不大，柱頭固定相變髒或流失可能性更大，這是可以將進樣那頭擰開，將微孔濾片超聲，柱頭刮去一部分填料，重新填上新填料擰緊，不過這種活，需要一定技術，同時不能老幹那種事，否則用不了幾次，色譜柱就會應柱效很低而報廢。
2 溶劑極性及進樣量
許多hplc分析者對此可能不以為然，一般的hplc的書籍和文獻都不會提到這方面的內容，而這確是雙峰產生的乙個很重要的原因。目前hplc分析多為反相色譜，流動相多為甲醇、乙腈、水，加各種新增劑以改善分離效能。樣品一般用與流動相相溶的溶劑溶解。
最佳的溶解方法是用流動相溶解，但是很多情況是不一致的。當用溶劑極性強度大的試劑，如純甲醇、純乙腈，純乙醇，而分析體系中以水為主，樣品進樣量大，如定量管為20ul，此條件下完全可以肯定，單一的純物質出雙峰，第二峰比第一峰小（每次都不太一樣），且拖尾，保留時間會提前（相對進樣量少而言），將進樣量減少一半以上，峰型將變為正常。這是樣品的溶劑與流動相極性相差太大，而流動相來不及將其稀釋達到平衡造成的。
上面提到進樣量造成雙峰的乙個原因，另乙個原因是，進樣量不一定大，但絕對量很大，色譜圖上的雙峰緊靠在一起，基本上齊高，不拖尾（如果出峰很快，也可能是色譜柱問題）。將樣品稀釋再進樣就可以了，這是由於進樣量過大，色譜柱過載造成的。 臨床實驗室
3 樣品的特性
有些樣品由於其化學結構的特點，存在互變異構現象，而這種互變異構體無法分開，而是以乙個動態平衡存在。在色譜分析時，在乙個特定的條件下，一種物質將出現雙峰，雙峰靠的很近，基本齊高，不拖尾，條件稍一變化，尤其ph，雙峰現象將消失，如紅黴素等。有的樣品紫外的色譜圖上看不到雙峰，但在lc－ms下，用質譜檢測器，其質譜的總離子流圖上較明顯，例如我分析過的農藥啶蟲眯（吡蟲清）。
4 引數記錄的引數一般都內定的，不必修改，但gc和hplc的引數是不完全一致的，例如c－r3a資料記錄儀上的一般記錄時間間隔gc為2ms，hplc
為5ms，如果記錄間隔時間縮短，乙個峰將變為二個峰或更多。
8.色譜柱中的流動相會排幹嗎？
不少做色譜分離試驗的人遇到過這樣的情形：不慎未及時補充流動相，幫浦將溶劑瓶中的流動相吸乾了，hplc系統由此而停止工作了。如此情況是否會損壞色譜柱？
幫浦是否已將色譜柱中所有流動相都排乾了？色譜柱還能使用嗎？事實上，如果幫浦將溶劑瓶中的流動相吸乾，並不會造成色譜柱的損壞。
即使幫浦中充滿了空氣，幫浦也不會將空氣排入色譜柱。因為幫浦只能輸送液體，而不能輸送空氣。
相比之下，另乙個更可能發生的情況是忘記蓋上色譜柱兩端的密封蓋或蓋子太鬆而使色譜柱變幹。同樣，整個色譜柱乾涸的情況不太容易發生，多半可能只是色譜柱兩端的幾個公釐變乾了，因揮發掉所有溶劑是色譜柱變幹需要相當長的時間。即使色譜柱真的變乾了，也不一定就不可救藥了。
可以嘗試用一種完全脫氣的、表面張力低的溶劑（如經氦氣脫氣的甲醇）沖洗色譜柱以除去氣體。較低的表面張力有助於浸潤填料表面；已脫氣的溶劑應該能夠溶解並去除滯留在填料中的氣體。色譜柱大約需要（以1ml/min的流速）衝乙個小時或更多的時間被徹底浸潤，恢復到正常狀態。
9.使用peek（polyetheretherketone）管路和接頭需要注意什麼問題？
氣相色譜與液相色譜的比較 總結
液相色譜和氣相色譜相比較，在以下幾個方面具有優越性 1 氣相色譜不適用於不揮發物質和對熱不穩定物質，而液相色譜卻不受樣品的揮發性和熱穩定性的限制。有些樣品因為難以汽化而不能通過柱子，熱不穩定的物質受熱會發生分解，也不適用於氣相色譜法。這使氣相色譜法的使用範圍受到了限制。據統計，目前氣相色譜法所能分析...
液相色譜實驗報告
儀器分析實驗報告 實習名稱 液相色譜分析實驗 學院 化學工程學院 專業 化學工程與工藝 班級 化工班 姓名 學號 指導教師 日期一 實驗目的 1 了解液相色譜的構造 原理及操作技術 2 了解並熟悉液相色譜儀的流程及操作方法。二 實驗原理 液相色譜由幫浦 進樣器 色譜柱 檢測器 記錄儀等幾部分組成。高...
安捷倫HPLC液相色譜維護
安捷倫維護 hplc 液相色譜中的鹽帶來的問題？一 如何處理 hplc 中的鹽帶來的問題？很多問題是由於流動相含有鹽成分造成的。建議在清洗時將水加熱後再沖洗，這樣既可以將鹽溶解的更好，也可以溶解一些脂溶性物質，會減少很多問題的發生,包括管路堵塞,鹽析出，基線噪音 液相幫浦的日常維護 二 安捷倫 11...