一、實驗目的
1． 了解高效液相色譜儀的基本結構和工作原理
2． 學習高效液相色譜儀的使用
3． 學習、掌握液相色譜柱柱效測定方法
4． 考察流動相配比對分離情況的影響
二、基本原理
高效液相色譜法是以液體作為流動相的一種色譜分析法，它亦是根據不同組分在流動相和固定相之間的分配係數的差異來對混合物進行分離的。氣相色譜中評價色譜柱柱效的方法及計算理論塔板數的公式同樣適合於高效液相色譜，即：
式中：tr為組分的保留時間
y1/2為色譜峰的半峰寬度
y為色譜峰的峰底寬度
影響高效液相色譜分離的因素很多，其中，流動相的種類及配比是最重要的引數。
三、儀器和試劑
1． 儀器：agilent 1200 高效液相色譜儀（紫外檢測器）
2． 50μl微量進樣器
3． 試劑：苯、萘、聯苯、甲醇均為分析純；純水為重蒸的去離子水。
配製成含苯、萘、聯苯各30μl/ml 的甲醇溶液。
四、實驗條件
1． 色譜柱長15cm，內徑 4.6mm，裝填5m的c-18烷基鍵合固定相
2． 流動相組成1：甲醇:水（95:5）；組成2：甲醇:水（85:15）；流量均為0.8ml/min
3． 紫外光度檢測器波長254nm
4． 進樣量 5μl
五、實驗步驟
1．設定流動相為「組成1」的比例，按照標準操作步驟將儀器調節至進樣狀態，待儀器流路及電路系統達到平衡，且色譜基線達到平直時，開始進樣。
2．吸取5μl苯、萘、聯苯的甲醇溶液進樣，在此條件下用色譜工作站記錄色譜資料。
3．改變流動相比例至「組成2」，待平衡後重複步驟2操作。
4．用色譜工作站之「資料處理」系統處理資料檔案並記錄所需資料。
六、資料記錄及處理
1． 記錄實驗條件。
（1） 色譜柱與固定相
（2） 流動相及其流量、柱前壓
（3） 檢測器波長
（4） 進樣量
2． 分別記錄三個組分色譜峰的保留時間tr和相應色譜峰的半峰寬y1/2。
3． 分別計算苯、萘、聯苯在兩種流動相組成條件下的理論塔板數n，並比較流動相組成改變前後色譜分離的差異。
七、思考題
1． 由本實驗計算出的各組分理論塔板數說明什麼問題？
2． 紫外光度檢測器是否適用於檢測所有有機化合物，為什麼？
3. 試分析流動相條件改變後保留時間及分離度的差異，並闡明原因。
液相色譜柱壓公升高原因
色譜柱是高效液相色譜的心臟，在高效液相色譜儀的使用中，保持色譜柱的柱效 容量和滲透性，延長柱子的使用壽命非常重要。色譜柱壓公升高一般是由於柱床內產生了雜質，造成流體阻力加大所致。其原因，大致有以下幾方面 1 流動相的前處理 雜質堵塞色譜柱進口濾片，導致壓力公升高。這往往是由於流動相沒有過濾，或雖已過...
氣相色譜柱常用的固定液
一 非極性 1 100 dimethylpolysiloxane，100 聚二甲基矽氧烷，商品名 ac1，ov 101，ov 1，db 1，se 30，hp 1，rtx 1，bp 1 二 弱極性2 5 phenyldimethylpolysiloxane,5 二苯基 95 二甲基聚矽氧烷，商品名 a...
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液相色譜儀由高壓液體幫浦 檢測器及液相色譜柱等三部分組成，其中液相色譜柱的正確安裝和使用，是液相色譜工作的關鍵 也是液相色譜工作者獲得正確可靠的實驗資料的必經之路。一 液相色譜柱的安裝 1 液相色譜柱的結構 a 空柱由柱接頭 柱管及濾片組裝而成。柱接頭採用低死體積結構，柱接頭是兩端螺紋元件，一端是為...