為規範檢驗程式，提高檢驗結果的準確性，要求微生物檢驗員嚴格按照本操作規程檢驗。
樣品準備：
準確稱取10g±1g樣品，剪碎後加入到200ml已滅菌的生理鹽水中，充分混勻，靜置10分鐘，待生理鹽水樣液自然沉降後取上清液作菌落計數，液體樣品可用原液直接做樣液。
如果被檢樣品含有大量吸水樹脂材料而導致不能吸出足夠樣液時，稀釋量可按每次50ml遞增，直至能吸出足夠測試用樣液。在計算細菌菌落總數與真菌菌落總數時相應調整稀釋度。
1. 細菌菌落總數檢測方法
1）儀器：
培養箱35℃±2℃、天平（精確至0.1g）、醫用剪刀、吸球、移液管1ml、250ml錐形瓶、平皿、酒精燈。
2）試液：
0.9%生理鹽水、營養瓊脂。
3）步驟：
用已滅菌的1ml移液管移取1ml樣液，均勻地灑在平皿上，共接種5個平皿。然後用冷卻至45℃左右熔化的營養瓊脂培養基15～20ml倒入每個平皿內混合均勻。待瓊脂凝固後翻轉平皿做好記號並置35℃±2℃培養48h後，計算平板上的菌落數。
結果計算：x1=a*k/5
式中：x1→細菌菌落總數，cfu/g或cfu/ml
a→5塊營養瓊脂培養基平板上的細菌菌落總數
k→稀釋度
4）如果樣品菌落總數超過標準的規定，應進行複檢。
將留存的複檢樣品依前法複測2次，2次結果平均值都達到標準規定，則判定被檢樣品合格，其中有任何1次結果平均值超過標準規定，則判定被檢樣品不合格。
2. 真菌菌落總數檢測方法
1）儀器：
培養箱25℃±2℃、天平（精確至0.1g）、醫用剪刀、吸球、移液管1ml、250ml錐形瓶、平皿、酒精燈。
2）試液：
0.9%生理鹽水、玫瑰紅鈉瓊脂。
3）步驟：
用已滅菌的1ml移液管移取1ml樣液，均勻地灑在平皿上，共接種5個平皿。然後用冷卻至45℃左右熔化的玫瑰紅鈉瓊脂培養基15～20ml倒入每個平皿內混合均勻。待瓊脂凝固後翻轉平皿做好記號並置25℃±2℃培養7天，分別於3、5、7天觀察,計算平板上的菌落數，如果發現菌落蔓延，以前一次的菌落計數為準。
結果計算：x2=b*k/5
式中：x2→真菌菌落總數，cfu/g或cfu/ml
b→5塊玫瑰紅鈉瓊脂培養基平板上的真菌菌落總數
k→稀釋度
4）如果樣品菌落總數超過標準的規定，應進行複檢。
將留存的複檢樣品依前法複測2次，2次結果平均值都達到標準規定，則判定被檢樣品合格，其中有任何1次結果平均值超過標準規定，則判定被檢樣品不合格。
3. 大腸菌群檢測方法
1）儀器：
培養箱35℃±2℃、天平（精確至0.1g）、醫用剪刀、吸球、移液管5ml、250ml錐形瓶、酒精燈、試管架。
2）試液：
0.9%生理鹽水、乳糖膽鹽發酵管、伊紅美藍瓊脂。
3）步驟：
用已滅菌的5ml移液管分別移取5ml樣液，接種於2根50ml乳糖膽鹽發酵管，置35℃±2℃培養24h，如不產酸也不產氣，則報告為大腸菌群陰性。如產酸產氣，則劃線接種於伊紅美藍瓊脂平板上，置35℃±2℃培養18～24h，觀察平板上菌落形態。
4）判定
典型的大腸菌落為黑紫色或紅紫色，圓形，邊緣整齊，表面光滑濕潤，常具有金屬光澤，也有的呈紫黑色，不帶或略帶金屬光澤，或粉紅色，中心較深的菌落。
取疑似菌落1～2個作革蘭氏染色鏡檢，同時接種乳糖發酵管，置35℃±2℃培養24h，觀察產氣情況。
凡乳糖膽鹽發酵管產酸產氣，乳糖發酵管產酸產氣，在伊紅美藍平板上有典型大腸菌落，革蘭氏染色為陰性的無芽孢桿菌，可報告被檢樣品檢出大腸桿菌。
4. 致病性綠膿桿菌檢測方法
1）儀器：
培養箱35℃±2℃、天平（精確至0.1g）、醫用剪刀、吸球、移液管5ml、250ml錐形瓶、酒精燈、試管架。
2）試液：
0.9%生理鹽水、scdlp（大豆酪蛋白葡萄糖卵磷脂吐溫80）培養液、十六烷三甲基溴化銨瓊脂。
3）步驟：
用已滅菌的5ml移液管分別移取5ml樣液，接種於50mlscdlp培養液中，充分混勻，置35℃±2℃培養18～24h。如有綠膿桿菌生長培養液表面呈現一層薄菌膜，培養液常呈黃綠色或藍綠色。
4）判定：
如有菌膜生長，從培養液的薄菌膜處挑取培養物，劃線接種至十六烷三甲基溴化銨瓊脂平板上，置35℃±2℃培養18～24h，觀察菌落特徵。綠膿桿菌在此培養基上生長良好，菌落扁平，邊緣不整，菌落周圍培養基略帶粉紅色，其它菌不長。
取可疑菌落塗片作革蘭氏染色，鏡檢為革蘭氏陰性菌者應進行氧化酶實驗。取一小塊潔淨的白色濾紙片放在滅菌平皿內，用無菌的玻棒挑取可疑菌落塗在濾紙片上，然後再其上滴加一滴新配製的1%二甲基對苯二胺試液，30s內出現粉紅色或紫紅色，為氧化酶試驗陽性，不變色者為陰性。
被檢樣品經增菌分離培養後，鏡檢為革蘭氏陰性桿菌，氧化酶試驗為陽性者，即可報告被檢樣品檢出綠膿桿菌。
5. 金黃色葡萄球菌檢測方法
1）儀器：
培養箱35℃±2℃、天平（精確至0.1g）、醫用剪刀、吸球、移液管5ml、250ml錐形瓶、酒精燈、試管架。
2）試液：
0.9%生理鹽水、scdlp（大豆酪蛋白葡萄糖卵磷脂吐溫80）培養液、血瓊脂平板。
3）步驟
用已滅菌的5ml移液管分別移取5ml樣液，接種於2根50mlscdlp培養液中，充分混勻，置35℃士2℃培養24h ,自上述增菌液中取1-2接種環，劃線接種在血瓊脂平板上，置35℃士2℃培養24～48h 。在血瓊脂平板上該菌菌落呈金黃色，大而突起，圓形，不透明，表面光滑，周圍有溶血圈。
4）判定
挑取典型菌落，塗片作革蘭氏染色鏡檢，金黃色葡萄球菌為革蘭氏陽性球菌，排列成葡萄狀，無芽胞與莢膜。鏡檢符合上述情況，應進行下列試驗：
甘露醇發酵試驗:取上述菌落接種甘露醇培養液，置35℃士2℃培養24h ，發酵甘露醇產酸者為陽性。
血漿凝固酶試驗玻片法：取清潔乾燥載玻片，一端滴加一滴生理鹽水，另一端滴加一滴兔血漿，挑取菌落分別與生理鹽水和血漿混合，5 min如血漿內出現團塊或顆粒狀凝塊，而鹽水滴仍呈均勻混濁無凝固則為陽性，如兩者均無凝固則為陰性。凡鹽水滴與血漿滴均有凝固現象，再進行試管凝固酶試驗。
試管法：吸取1:4新鮮血漿0.
5 ml，放滅菌小試管中，加人等量待檢菌24h肉湯培養物0.5ml,混勻，放35℃士2℃培養箱或水浴中，每半小時觀察一次，24 h之內呈現凝塊即為陽性。同時以已知血漿凝固酶陽性和陰性菌株肉湯培養物各0.
5 ml,作為陽性與陰性對照。
凡在瓊脂平板上有可疑菌落生長，鏡檢為革蘭氏陽性葡萄球菌，並能發酵甘露醇產酸，血漿凝固酶試驗陽性者，可報告被檢樣品檢出金黃色葡萄球菌。
6.溶血性鏈球菌檢測方法
1）儀器：
培養箱35℃±2℃、天平（精確至0.1g）、醫用剪刀、吸球、移液管5ml、250ml錐形瓶、酒精燈、試管架。
2）試液：
0.9%生理鹽水、葡萄糖肉湯培養液、血瓊脂平板。
3.）步驟：
用已滅菌的5ml移液管分別移取5ml樣液，接種於2根50m l葡萄糖肉湯，35℃±2℃培養24h ，將培養物劃線接種血瓊脂平板，35℃±2℃培養24h 觀察菌落特徵。溶血性鏈球菌在血平板上為灰白色，半透明或不透明，針尖狀突起，表面光滑，邊緣整齊，周圍有無色透明溶血圈。
4）判定
挑取典型菌落作塗片革蘭氏染色鏡檢，應為革蘭氏陽性，呈鏈狀排列的球菌。鏡檢符合上述情況，應進行下列試驗:
鏈激酶試驗：吸取草酸鉀血漿0.2ml(0.
01g草酸鉀加5ml兔血漿混勻，經離心沉澱，吸取上清液)，加人0.8m l滅菌生理鹽水，混勻後再加人待檢菌24h肉湯培養物0.5ml和0.
25%氯化鈣0.25ml混勻，放35℃±2℃水浴中，2min觀察一次(一般10min內可凝固)，待血漿凝固後繼續觀察,並記錄溶化時間。如2h內不溶化，繼續放置24h觀察，如凝塊全部溶化為陽性，24h仍不溶化為陰性。
桿菌膚敏感試驗:將被檢菌菌液塗於血平板上，用滅菌鑷子取每片含0.04單位桿菌膚的紙片放在平板表面上，同時以已知陽性菌株作對照，在35℃±2℃下放置18--24h，有抑菌帶者為陽性。
凡鏡檢為革蘭氏陽性鏈狀排列球菌，血平板上呈現溶血圈，鏈激酶和桿菌膚試驗陽性，可報告被檢樣品檢出溶血性鏈球菌。
微生物標準操作規程
血瓊脂培養基配製標準 操作規程 1.目的 規範血瓊脂培養基配製操作規程，保證培養基質量。2.原理 羊血或兔血等是細菌生長繁殖的良好營養物質。在45 50 的基礎培養基中加入血液可以完好儲存血液中某些不耐熱的生長因子，同時血細胞不被破壞。若將nacl濃度提高到0.85 可使血平皿在35 培養18 24...
微生物標準操作規程
m h培養基配製標準操作規程 1 目的 規範m h培養基配製操作規程，保證培養基質量。2 原理 m h培養基用mueller hinton瓊脂 水解酪蛋白瓊脂 配製，澱粉為保護性膠體，能對抗細菌中的毒性物質，水解酪蛋白含多種氨基酸，牛肉浸膏能提供細菌氮源的主要營養物質。藥敏試驗中，為保證結果重複性及...
微生物標準操作規程三
莫拉菌屬檢驗標準操作規程 1 概述 莫拉菌屬現有2個亞屬，即莫拉菌亞屬和布蘭漢亞屬。莫拉菌屬包括奧斯陸莫拉菌 腔隙莫拉菌等7個種。2 標本型別 血液 尿液 痰 腦脊液 穿刺液 膿液等標本。3 鑑定 3.1 形態與染色革蘭陰性球桿菌，多數成對或短鏈排列。3.2 培養特性在血瓊脂平板上35 培養18 2...