硝酸鹽還原試驗標準操作規程
1．目的
規範硝酸鹽還原試驗標準操作規程。
2．原理
硝酸鹽培養基中的硝酸鹽可被某些細菌還原為亞硝酸鹽，後者與乙酸作用生成亞硝酸。亞硝酸與對氨基苯磺酸作用，形成偶氮苯磺酸，再與α萘胺結合成紅色的n一萘胺偶氮苯磺酸。
3．試劑
3.1 硝酸鹽培養基成分
3.2 製備上述成分混合後，加熱溶解，調ph 至7．4。分裝試管，，每管約4ml，121℃15分鐘高壓滅菌後備用。
3.3 試劑配製
4．質控
大腸埃希菌atcc 25923為陽性，鮑曼不動桿菌atcc 19606為陰性。
5．操作步驟
將待檢菌株接種於硝酸鹽培養基，35℃孵育1～2日，加入試劑甲液和乙液各2滴，立即觀察結果。若加入硝酸鹽試劑不出現紅色，需檢查硝酸鹽是否被還原。可於原試管內再加入少許鋅粉，如出現紅色，證明產生芳基肼，表示硝酸鹽仍然存在；若仍不產生紅色，表示硝酸鹽已被還原為氨和氮。
也可在培養基內加1支小倒管，若有氣泡產生，表示有氮氣生成，用以排除假陰性。
6．結果判斷
呈紅色者為附性。若不呈紅色，再加入少許鋅粉，如仍不變為紅色者為陽性，表示培養基中的硝酸鹽已被細菌還原為亞硝酸鹽，進而分解成氨秘氮。加鋅粉後變為紅色者為陰性，表示硝酸鹽未被細菌還原，紅色反應是由乎鋅粉的還原所致。
7．注意事項
本試驗在判定結果時泌須在加試劑之後立即判定結果，否則因顏色迅速褪色而造成判定困難。
8. 臨床意義
本試驗在細菌鑑定中廣泛應用，腸桿菌科細菌均能還原硝酸鹽為亞硝酸鹽，部分假單胞菌產生氮氣。
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