食品微生物實驗室工作人員，必須有嚴格的無菌觀念，許多試驗要求在無菌條件下進行，主要原因：一是防止試驗操作中人為汙染樣品，二是保證工作人員安全，防止檢出的致病菌由於操作不當造成個人汙染。
一、無菌操作要求
1. 接種細菌時必須穿工作服、戴工作帽。
2.進行接種食品樣品時，必須穿專用的工作服、帽及拖鞋，應放在無菌室緩衝間，工作前經紫外線消毒後使用。
3. 接種食品樣品時，應在進無菌室前用肥皂洗手，然後用75％酒精棉球將手擦乾淨。
4.進行接種所用的吸管，平皿及培養基等必須經消毒滅菌，開啟包裝未使用完的器皿，不能放置後再使用，金屬用具應高壓滅菌或用95%酒精點燃燒灼三次後使用。
5.從包裝中取出吸管時，吸管尖部不能觸及外露部位，使用吸管接種於試管或平皿時，吸管尖不得觸及試管或平皿邊。
6.接種樣品、轉種細菌必須在酒精燈前操作，接種細菌或樣品時，吸管從包裝中取出後及開啟試管塞都要通過火焰消毒。
7.接種環和針在接種細菌前應經火焰燒灼全部金屬絲，必要時還要燒到環和針與杆的連線處，接種結核菌和烈性菌的接種環應在沸水中煮沸5min，再經火焰燒灼。
8. 吸管吸取菌液或樣品時，應用相應的橡皮頭吸取，不得直接用口吸。
二、無菌間使用要求
1.無菌間通向外面的窗戶應為雙層玻璃，並要密封，不得隨意開啟，並設有與無菌間大小相應的緩衝間及推拉門，另設有0.5-0.7m2的小窗，以備進入無菌間後傳遞物品。
2.無菌間內應保持清潔，工作後用2%-3%煤酚皂溶液消毒，擦拭工作檯面，不得存放與實驗無關的物品。
3.無菌間使用前後應將門關緊，開啟紫外燈，如採用室內懸吊紫外燈消毒時，需30w紫外燈，距離在1.0m處，照射時間不少於30min，使用紫外燈，應注意不得直接在紫外線下操作，以免引起損傷，燈管每隔兩周需用酒精棉球輕輕擦拭，除去上面灰塵和油垢，以減少紫外線穿透的影響。
4.處理和接種食品標本時，進入無菌間操作，不得隨意出入，如需要傳遞物品，可通過小窗傳遞。
5. 在無菌間內如需要安裝空調時，則應有過濾裝置
三、消毒滅菌要求
微生物檢測用的玻璃器皿、金屬用具及培養基、被汙染和接種的培養物等，必須經滅菌後方能使用。
（一）乾熱和濕熱高壓蒸氣鍋滅菌方法
1．滅菌前準備
（1）所有需要滅菌的物品首先應清洗晾乾，玻璃器皿如吸管、平皿用紙包裝嚴密，如用金屬筒應將上面通氣孔開啟。
（2）裝培養基的三角瓶塞，用紙包好，試管蓋好蓋，注射器須將管芯抽出，用紗布包好。
2．裝放
（1）乾熱滅菌器：裝放物品不可過擠，且不能接觸箱的四壁。
（2）大型高壓蒸氣鍋：放置滅菌物品分別包紮好，直接放入消毒筒內，物品之間不能過擠。
3．裝置檢查
（1）檢查門的開關是否靈活，橡皮圈有無損壞，是否平整。
（2）檢查壓力表蒸氣排盡時是否停留在零位，關好門和蓋，通蒸氣或加熱後，觀察是否漏氣，壓力表與溫度計所標示的狀況是否吻合，管道有無堵塞。
（3）對有自動電子程式控制裝置的滅菌器，使用前應檢查規定的程式，是否符合於進行滅菌處理的要求。
4．滅菌處理
(1)乾熱滅菌法：此法適應於在乾熱情況下，不損壞、不變質、不蒸發的物品、較常用於玻璃器皿、金屬製品、陶瓷製品等的滅菌。
① 器械器皿應清洗後再幹烤，以防附著在表面的汙物炭化。
②滅菌時安放物品不能過擠，不要直接接觸底和箱壁，物品之間留有空隙。
③菌時將箱門關緊，接上電源，先將排氣孔開啟約30min，排除滅菌器中的冷空氣，溫度公升至160℃調節指示燈，維持1.5 –2h。
④ 滅菌完畢後或溫度公升溫過程中，須在60℃以下才能開啟箱門。
(2) 手提式高壓鍋或立式壓力蒸氣滅菌器的使用應按下列步驟進行：
①手提式高壓鍋在主體內加入3l清水，立式高壓鍋加水16l（重複使用時應將水量補足，水變混濁需更換）.
②手提式壓力鍋將頂蓋上的排氣管插入消毒桶內壁的方管中（無軟管或軟管鏽蝕破裂的滅菌器不得使用）。
③蓋好頂蓋擰緊，勿使漏氣；置滅菌器於火源上加熱，立式壓力鍋通上電源，並開啟頂蓋上的排氣閥放了冷氣（水沸騰後排氣10-15min）。
④關閉排氣閥，使蒸氣壓上公升到規定要求，並維持規定時間（按滅菌物品性質與有關情況而定）。
⑤達到規定時間後，對需乾燥的物品，立即開啟排氣閥排出蒸氣，待壓力恢復到零時，自然冷卻至60℃後開蓋取物，如為液體物品，不要開啟排氣閥，而應立即將鍋去除熱源，待自然冷卻，壓力恢復至零，溫度降到60℃以下再開蓋取物，以防突然減壓液體劇烈沸騰或容器爆破。
(3) 臥式壓力鍋蒸氣滅菌器的使用按下列步驟進行：
① 關緊鍋門，開啟進氣閥，將蒸氣引入夾層進行預熱，夾層內冷空氣經阻氣器自動排出。
②夾層達到預定溫度後，開啟鍋室進氣閥，將蒸氣引入鍋室，鍋室內冷空氣經鍋室阻氣器自動排出。
③ 待鍋室達到規定的壓力與溫度時，調節進氣閥，使保持恆定至
④自然或人工降溫至60℃再開門取物，不得使用快速排出蒸氣法，以防突然降壓，液體劇烈沸騰或容器爆破。
⑤使用自動程式控制式壓力蒸氣滅菌器，在放好物品關緊門後，應根據物品類別按動相應開關，以便按要求程式自動進行滅菌，滅菌時必須利用附設儀表記錄溫度與時間以備查，操作要求應嚴格按照廠家說明書進行。
5．滅菌溫度與時間(1) 乾熱滅菌器滅菌溫度160℃，1.5-2h。(2)壓力蒸氣滅菌鍋滅菌溫度與時間
（二）間歇滅菌方法
1.滅菌方法系利用不加壓力的蒸氣滅菌，某些物質經高壓蒸氣滅菌容易破壞，可用此法滅菌。
（1）將欲滅菌物品置於鍋內，蓋上頂蓋，開啟排水口，使器內餘水排盡。
（2）關閉排水口，開啟進氣門，根據需要消毒10～20min。
（3）滅菌完畢關閉進氣門，取出物品待冷至室溫溫度，放入37℃溫箱過夜，次日仍按上述方法消毒，如此三次，即可達到滅菌目的。
2．血清凝固器使用方法，培養基中含有血清或雞蛋特殊成份時，因高熱會破壞其營養成份，故用低溫，可使血清凝固，又可達到滅菌目的。
(1) 在使用該法滅菌的血清等分裝時，需嚴格遵守無菌操作，試管、平皿也經滅菌後使用。
(2)將培養基按要求使成斜面或高層，加足水後，接上電源，公升溫75～90℃1h滅菌，放37℃溫箱過夜，再如此滅菌三次。
3．煮沸消毒：可用煮鍋或煮沸消毒器，水沸騰後再煮5～15 min，也可在水中加入2﹪石炭酸煮沸5min，加入0.02﹪甲醛, 80℃煮60 min均可達到滅菌目的, 但選用煮沸消毒的增消劑時, 應注意對物品的腐蝕性.
4．滅菌處理:滅菌後物品,按正常情況已屬無菌,從滅菌器中取出應仔細檢查放置,以免再度汙染。
(1) 物品取出,隨即檢查包裝的完整性,若有破壞或棉塞脫掉,不可作為無菌物品使用。
(2) 取出的物品,如為包裝有明顯的水浸者,不可作為無菌物品使用。
(3) 培養基或試劑等,應檢查是否符合達到滅菌後的色澤或狀態,未達到者應廢棄。
(4) 啟閉式容器,在取出時應將篩孔關閉。
(5)取出的物品掉落在地或誤放不潔這處,或沾有水液,均視為受到汙染,不可作為無菌物品使用。
(6) 取出的合格滅菌物品,應存放於貯藏室或防塵櫃內,嚴禁與未滅菌物品混放。
(7) 凡屬合格物品,應標有滅菌日期及有效期限。
(8) 每批滅菌處理完成後,記錄滅菌品名、數量、溫度、時間、操作者。
四、有毒有菌汙物處理要求
微生物實驗所用實驗器材、培養物等未經消毒處理，一律不得帶出實驗室。
1.經培養的汙染材料及廢棄物應放在嚴密的容器或鐵絲筐內，並集中存放在指定地點，待統一進行高壓滅菌。
2. 經微生物汙染的培養物，必須經121℃30min高壓滅菌。
3.染菌後的吸管，使用後放入5﹪煤酚皂溶液或石炭酸液中，最少浸泡24h（消毒液體不得低於浸泡的高度）再經121℃30min高壓滅菌。
4.塗片染色沖洗片的液體，一般可直接衝入下水道，烈性菌的沖洗液必須衝在燒杯中，經高壓滅菌後方可倒入下水道，染色的玻片放入5﹪煤酚皂溶液中浸泡24h後，煮沸洗滌。做凝集試驗用的玻片或平皿，必須高壓滅菌後洗滌。
5.打碎的培養物，立即用5﹪煤酚皂溶液或石炭酸液噴灑和浸泡被汙染部位，浸泡半小時後再擦拭乾淨。
汙染的工作服或進行烈性試驗所穿的工作服、帽、口罩等，應放入專用消毒袋內，經高壓滅菌後方能洗滌。
五、培養基製備要求
培養基製備的質量將直接影響微生物生長。因為各種微生物對其營養要求不完全相同，培養目的的不同，各種培養基製備要求如下：
1．根據培養基配方的成分按量稱取，然後溶於蒸餾水中，在使用前對應用的試劑藥品應進行質量檢驗。
2．ph測定及調節：ph測定要在培養基冷至室溫時進行，因在熱或冷的情況下，其ph有一定差異，當測定好時，按計算量加入鹼或酸混勻後，應再測試一次。培養基ph值一定要準確，否則會影響微生物的生長或影響結果的觀察。
但需注意因高壓滅菌可影響一些培養基的ph降低或公升高，故不宜滅菌壓力過高或次數太多，以免影響培養基的質量，指示劑、去氧膽酸鈉、瓊脂等一般在調完ph後再加入。
3．培養基需保持澄清，便於觀察細菌的生長情況，培養基加熱煮沸後，可用脫脂棉花或絨布過濾，以除去沉澱物，必要時可用雞蛋白澄清處理，所用瓊脂條要預先洗淨晾乾後使用，避免因瓊脂含雜質而影響透明度。
4．盛裝培養基不宜用鐵、銅等容器，使用洗淨的中性硬質玻璃容器為好。
5．培養基的滅菌既要達到完全滅菌目的，又要注意不因加熱而降低其營養價值，一般121℃15min即可，如為含有不耐高熱物質的培養基如醣類、血清、明膠等，則應採用低溫滅菌或間歇法滅菌，一些不能加熱的試劑如亞碲酸鉀、卵黃、ttc、抗菌素等，待基礎瓊脂高壓滅菌後涼至50℃左右再加入。
6．每批培養基製備好後，應做無菌生長試驗及所檢菌株生長試驗。如果是生化培養基，使用標準菌株接種培養，觀察生化反應結果，應呈正常反應，培養基不應貯存過久，必要時可置4℃冰箱存放。
微生物實驗室管理
二 微生物實驗室安全規範操作要求 1 檢驗人員在實驗過程中需嚴格按照要求進行操作，不得隨意減少或更改工序。2 高壓鍋 熱空氣消毒箱每次使用時需進行溫度監控，生化培養箱每班進行一次溫度監控，並填寫裝置使用及溫度監控記錄。3 微生物實驗操作人員在稱量配製培養基過程中注意佩戴隔熱手套和防護口罩，煮沸時邊加...
微生物實驗室管理
6.1 微生物實驗室使用三種消毒液 75 v v 乙醇 棉 溶液 0.1 新潔爾滅溶液 84消毒液 1 500 消毒液配製需用純化水配製，每月輪換1次，配製及使用應有記錄，記錄詳見附件一。6.2 微生物實驗前，開啟紫外燈殺菌30分鐘。6.3 每次微生物實驗前，同樣用75 乙醇棉擦手，然後才能開始操作...
微生物實驗室檢測規範
6 儀器裝置應保持清潔，一般應有儀器套罩。7 使用儀器時，應嚴格按操作規程進行，對違反操作規程的因管理不善致使儀器械損壞，要追究當事者責任。三 藥品管理 使用制度 1 依據本室檢測任務，制定各種藥品試劑採購計畫，寫清品名 單位 數量 純度 包裝規格，出廠日期等，領回後建立帳目，專人管理，每半年做出消...