(1) 實驗目的
掌握液相色譜法測定市售可樂和茶葉中咖啡因的含量的原理、色譜分析的參考條件及各項操作。
(2) 原理
樣品經過前處理後，過濾後進高效液相色譜儀，經反相色譜柱分離後，根據保留時間和峰面積進行定性和定量。
(3) 試劑
色譜純甲醇、超純水
(4) 儀器裝置
agilent1200系列液相色譜
(5) 樣品處理：
市售可樂飲料經超聲脫氣15 min, 先用普通漏斗過濾, 再經0. 45 μm 濾膜過濾
準確稱取預先烘乾的茶葉1. 000 g 於100 ml 錐形瓶中，加約90 ml 水，在100 ℃水浴鍋中浸提1 h 後冷卻至室溫，過濾，濾液轉移到100 ml 容易瓶中，洗滌殘渣3 次一併轉入容易瓶，定容至刻度線，再經0. 45 μm 濾膜過濾上樣分析
(6)色譜條件：
本實驗採用1200系列高效液相色譜儀帶紫外檢測器; 色譜柱:agilentc18( 4.6 mm × 250mm，5 μm) ; 流動相:
甲醇:水( 55：45，v /v ) ; 流速:
1.0 ( ml·min － 1 ) ; 檢測波長: 272 nm; 柱溫:
35℃; 進樣量: 10 μl。
(7) 實驗結果計算
樣品中咖啡因的含量按下式計算：
式中：x——樣品中咖啡因的含量，g/kg；
a——進樣體積中咖啡因的質量，mg；
v2——進樣體積，ml；
v1——樣品稀釋液總體積，ml；
m——樣品質量，g。
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