1、準備工作
1. 進樣小瓶：（1）無水乙醇浸泡過夜（2）自來水沖洗8次以上，再用濾過的娃哈哈礦泉水清洗數次（3-8次）（3）烘乾，待用。
2. 色譜級甲醇溶液、色譜級乙腈溶液及娃哈哈礦泉水用砂芯濾器過濾。
注意：（1）先過濾娃哈哈礦泉水：先用自來水清洗砂芯濾器，再用娃哈哈清洗砂芯濾器。
水相濾膜（兩層，0.45um）用娃哈哈水濕潤後，放在砂芯上，按**裝好濾器裝置。先倒入少量娃哈哈水，看是否有漏液，如沒有可大量加入娃哈哈。
濾完後，將水重新裝入瓶中。
（2）濾甲醇：將濾器先用自來水清洗一遍，再用甲醇潤洗一遍。用兩層有機相濾膜(0.45um)過濾。
（3）濾乙腈：將濾器先用自來水清洗一遍，再用乙腈潤洗一遍。用兩層有機相濾膜(0.45um)過濾。
（4）將濾好的溶液，蓋旋鬆，放入超聲清洗儀中超聲10分鐘，以趕走溶液中的氣泡。超聲結束後，擰緊瓶蓋。
（5）清洗濾器，收好。
2、hplc
1. 儀器的開啟
（1）從上往下開啟hplc儀器
（2）開啟幫浦的開關
（3）開啟電腦及instrument 1 online 軟體。（最好等hplc儀器自檢結束後再開啟軟體。）
2. 沖洗系統
（1）換a、b相：a相為水，b相為甲醇；探頭要置底
（2）開啟排氣閥，以排出系統內的氣泡。設定流速為3ml/min，ab相各50%。看1、2、a、b管路有無氣泡。待排完氣泡後，流速調為0ml/min，關上排氣閥。
（3）把b相調為100%，流速慢慢往上公升（先0.3ml/min，後0.6ml/min，最後1ml/min）。壓力穩定就網上調。
（4）流速打到1ml/min後，沖洗10min。
（5）待壓力線和uv檢測線平行後，慢慢降低流速（先從1ml/min到0.6ml/min，再到0.3ml/min，最後0ml/min。）
3. 沖洗柱子
（1）接色譜柱及預柱。如圖。注意方向。預柱是大頭進，小頭出；色譜柱看箭頭，箭頭指向流出的方向。
（2）接完柱子後，慢慢往上調流速1ml/min（先0.2，再0.4，再0.
6，再0.8，最後1ml/min），直至兩條線平行（檢測線和壓力線），線平行後至少要平行5min，才可以往上調。當流速1ml/min，且線平行5min後，慢慢降低流速至0（先1ml/min到0.
8，再0.6，再0.4，再0.
2，最後0ml/min）。
4.樣品的檢測
（1）將甲醇換為乙腈，流動相比例調整為，30%b及70% a。 將流速慢慢往上調至1ml/min（先0.2，再0.
4，再0.6，再0.8，最後1ml/min），直至兩條線平行。
設定檢測的引數、儲存方法，開始檢測樣品。
（2）樣品檢測完後，慢慢降低流速至0（先1ml/min到0.8，再0.6，再0.4，再0.2，最後0ml/min）。
（3）更換流動相，將乙腈換為甲醇，調整流動相比例，先b10%，流速慢慢上公升（先0.2，再0.4，再0.
6，再0.8，最後1ml/min），沖洗系統至兩線平行，流速慢慢降至0ml/min。再調整流動相比例為b100%，流速慢慢上公升（先0.
2，再0.4，再0.6，再0.
8，最後1ml/min），沖洗系統至兩線平行，流速慢慢降至0ml/min。卸柱。
（4）從下往上關閉hplc儀器。
HPLC培訓講稿
一 液相色譜理論發展簡況 液相色譜實際是一種分離方法，就象以前所用的萃取 蒸餾 離心 過濾等等一樣。其分離原理是 溶於流動相 mobile phase 中的各組分經過固定相時，由於與固定相 stationary phase 發生作用 吸附 分配 離子吸引 排阻 親和 的大小 強弱不同，在固定相中滯留...
驗證方案 HPLC
高效液相色譜儀 驗證方案 類別編號 部門 驗證委員會頁碼 共16頁，第1頁 版次 新訂替代 起草部門年月日 審核年月日 審閱會簽 驗證委員會 批准年月日 實施日期 年月日 影印數批准 分發至目錄1 概述3 2 驗證目的3 3 驗證依據及驗證範圍3 4 驗證工作小組3 5 驗證方案審批3 5.1驗證方...
島津HPLC操作
hplc高效液相色譜 實驗目的 了解液相色譜的發展歷史和最新進展。熟悉液相色譜分離 紫外吸收檢測的基本原理和基本構造。掌握高效液相色譜 紫外吸收檢測的操作步驟和分析方法，能夠通過液相色譜分離對目標物分析測定。實驗原理 液相色譜利用液體作為流動相，物質在兩相中的吸附或分配係數的微小差異達到分離的目的。...