問：用hplc進行分析時保留時間有時發生漂移，有時發生快速變化，原因何在?如何解決?
答：關於漂移問題：
1溫度控制不好，解決方法是採用恆溫裝置，保持柱溫恆定
2流動相發生變化，解決辦法是防止流動相發生蒸發、反應等
3柱子未平衡好，需對柱子進行更長時間的平衡
關於快速變化問題
1流速發生變化，解決辦法是重新設定流速，使之保持穩定
2幫浦中有氣泡，可通過排氣等操作將氣泡趕出。
3流動相不合適，解決辦法為改換流動相或使流動相在控制室內進行適當混合
問：hplc靈敏度不夠的主要原因及解決辦法
答：1樣品量不足：解決辦法為增加樣品量
2樣品未從柱子中流出：可根據樣品的化學性質改變流動相或柱子
3樣品與檢測器不匹配：根據樣品化學性質調整波長或改換檢測器
4檢測器衰減太多：調整衰減即可。
5檢測器時間常數太大：解決辦法為降低時間引數
6檢測器池窗汙染：解決辦法為清洗池窗。
7檢測池中有氣泡：解決辦法為排氣。
8記錄儀測壓範圍不當：調整電壓範圍即可。
9流動相流量不合適：調整流速即可。
10檢測器與記錄儀超出校正曲線：解決辦法為檢查記錄儀與檢測器，重作校正曲線。
問：做hplc分析時，柱壓不穩定，原因何在?如何解決?
答：原因可能有：
1幫浦內有空氣，解決的辦法是清除幫浦內空氣，對溶劑進行脫氣處理；
2比例閥失效，更換比例閥即可。
3幫浦密封墊損壞，更換密封墊即可。
4溶劑中的氣泡，解決的辦法是對溶劑脫氣，必要時改變脫氣方法；
5系統檢漏，找出漏點，密封即可。
6梯度洗脫，這時壓力波動是正常的。
保留時間變化
1.柱溫變化柱恆溫
2.等度與梯度間未能充分平衡至少用10倍柱體積的流動相平衡柱
3.緩衝液容量不夠用》25mmol/l的緩衝液
4.柱汙染每天沖洗柱
5.柱內條件變化穩定進樣條件,調節流動相
6.柱快達到壽命採用保護柱
保留時間縮短
1.流速增加檢查幫浦,重新設定流速
2.樣品超載降低樣品量
3.鍵合相流失流動相ph值保持在3~7.5檢查柱的方向
4.流動相組成變化防止流動相蒸發或沉澱
5.溫度增加柱恆溫
保留時間延長
1.流速下降管路洩漏,更換幫浦密封圈,排除幫浦內氣泡
2.矽膠柱上活性點變化用流動相改性劑,如加三乙胺,或採用鹼至鈍化柱
3.鍵合相流失同前(二)3
4.流動相組成變化同前(二)4
5.溫度降低同前(二)5
出現肩峰或分叉
1.樣品體積過大用流動相配樣,總的樣品體積小於第一峰的15%
2.樣品溶劑過強採用較弱的樣品溶劑
3.柱塌陷或形成短路通道更換色譜柱,採用較弱腐蝕性條件
4.柱內燒結不鏽鋼失效更換燒結不鏽鋼,加**過濾器,過濾樣品
5.進樣器損壞更換進樣器轉子
鬼峰1.進樣閥殘餘峰每次用後用強溶劑清洗閥,改進閥和樣品的清洗
2.樣品中未知物處理樣品
3.柱未平衡重新平衡柱,用流動相作樣品溶劑 (尤其是離子對色譜)
4.三氟乙酸(tfa)氧化(肽譜) 每天新配,用抗氧化劑
5.水汙染(反相) 通過變化平衡時間檢查水質量，用hplc級的水
6:氣泡干擾。
7:外電網干擾，及雙通道或多通道互相干擾。
8:濾膜或樣品過濾器干擾。
9:其他因素。
基線雜訊
1.氣泡(尖銳峰) 流動相脫氣,加柱後背壓
2.汙染(隨機雜訊) 清洗柱,淨化樣品,用hplc級試劑
3.檢測器燈連續雜訊更換氘燈
4.電干擾(偶然雜訊) 採用穩壓電源,檢查干擾的**(如水浴等)
5.檢測器中有氣泡流動相脫氣,加柱後背壓
峰拖尾1.柱超載降低樣品量,增加柱直徑採用較高容量的固定相
2.峰干擾清潔樣品,調整流動相
3.矽羥基作用加三乙胺,用鹼致鈍化柱增加緩衝液或鹽的濃度降低流動相ph值,鈍化樣品
4.同前(四)
5.同前(四)3
6.死體積或柱外體積過大連線點降至最低,對所有連線點作合適調整,盡可能採用細內徑的連線管
7.柱效下降用較低腐蝕條件,更換柱,採用保護柱
峰展寬1.進樣體積過大同(四)1
2.在進樣閥中造成峰擴充套件進樣前後排出氣泡以降低擴散
3.資料系統取樣速率太慢設定速率應是每峰大於10點
4.檢測器時間常數過大設定時間常數為感興趣第一峰半寬的10%
5.流動相粘度過高增加柱溫,採用低粘度流動相
6.檢測池體積過大用小體積池,卸下熱交換器
7.保留時間過長等度洗脫時增加溶劑含量也可用梯度洗脫
8.柱外體積過大將連線管徑和連線管長度降至最小
9.樣品過載進小濃度小體積樣品
HPLC的常見問題及解答
一 問 用hplc進行分析時保留時間有時發生漂移，有時發生快速變化，原因何在？如何解決？答 關於漂移問題 1 溫度控制不好，解決方法是採用恆溫裝置，保持柱溫恆定 2 流動相發生變化，解決辦法是防止流動相發生蒸發 反應等 3 柱子未平衡好，需對柱子進行更長時間的平衡 關於快速變化問題 1 流速發生變化...
HPLC常見問題原因及解決方案
一 壓力異常 操作壓力的變化往往是故障的徵兆。a 沒有壓力顯示，沒有流動相流動 原因解決方法 1 電源問題接通電源，開機 2 保險絲被燒壞更換保險絲 3 控制器設定不正確或設定失敗採取恰當的設定 修理或更換控制器 4 柱塞杆折斷更換柱塞杆 5 幫浦頭內有空氣溶劑脫氣 啟動幫浦抽出空氣 6 流動相不足...
常見問題說辭
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