HPLC常見問題原因及解決方案

2022-09-26 21:09:04 字數 4680 閱讀 6328

一)壓力異常

操作壓力的變化往往是故障的徵兆。

a、沒有壓力顯示,沒有流動相流動:

原因解決方法

1、電源問題接通電源,開機

2、保險絲被燒壞更換保險絲

3、控制器設定不正確或設定失敗採取恰當的設定、、修理或更換控制器

4、柱塞杆折斷更換柱塞杆

5、幫浦頭內有空氣溶劑脫氣、啟動幫浦抽出空氣

6、流動相不足補充流動相、更換入口濾頭

7、單向閥損壞更換單向閥

8、漏液

擰緊或更換手緊接頭

b、流動相流動正常,但沒有壓力顯示:

原因解決方法

1、儀表損壞更換儀表

2、壓力感測器損壞更換壓力感測器

c、壓力持續偏高

原因解決方法

1、流速設定過高調整流速設定

2、柱前篩板堵塞反衝色譜柱、更換篩板、更換色譜柱

3、流動相使用不當或緩衝鹽的結晶沉澱使用恰當的流動相、沖洗柱塞杆。

4、色譜柱選擇不當選擇恰當的色譜柱

5、進樣閥損壞清洗或更換進樣閥

6、柱溫過低提高溫度

7、控制器失常修理或更換控制器

8、保護柱阻塞清洗或更換保護柱

9、**過濾器阻塞清洗或更換**過濾器

d、 壓力持續偏低:

原因解決方法

1、流速設定過低調整流速

2、系統漏液確定漏液位置並維修

3、色譜柱選擇不當選擇恰當的色譜柱

4、柱溫過高降低溫度

5、控制器失常維修或更換控制器

e、 壓力波動:

原因解決方法

1、幫浦中有氣體溶劑脫氣、從幫浦中除去氣體

2、單向閥損壞更換單向閥

3、幫浦密封損壞更換幫浦密封

4、脫氣不充分重新過濾一遍、溶劑脫氣

5、系統漏液確定漏液位置並維修

6、使用梯度洗脫由於流動相粘度的變化引起的壓力波動

二) 漏液

通常可以通過擰緊或更換管路接頭來解決漏液的問題。但值得注意的是過份擰緊會導致金屬接頭的漏液和塑料接頭的磨損。如果通過稍微擰緊接頭不能解決漏液的問題,就必須將接頭取下,檢查是否損壞(例如,卡套損壞、密封表面有雜質);損壞的接頭應該更換掉。

a)接頭處漏液

原因解決方法

1、接頭鬆動擰緊

2、接頭磨損更換

3、接頭過緊擰松,再重新擰緊、更換

4、接頭被汙染拆下清洗、更換

5、部件不匹配使用同一品牌的配件

b)幫浦漏液

原因解決方法

1、單向閥鬆動擰緊單向閥(不必擰的過緊)、更換單向閥。

2、接頭鬆動擰緊接頭(不必擰的過緊)

3、混合器密封損壞更換混合器密封、更換混合器。

4、幫浦密封損壞維修或更換幫浦密封件

5、壓力感測器損壞維修或更換壓力感測器

6、脈衝阻尼器損壞更換脈衝阻尼器

7、比例閥損壞檢查隔膜,如果漏液立即更換、檢查手緊接頭,損壞的立即更換

8、放空閥的損壞擰緊放空閥、更換放空閥

c)進樣閥漏液

原因解決方法

1、轉子密封損壞重新安裝或更換進樣閥

2、定量環阻塞更換定量環

3、進樣口密封鬆動調整

4、進樣針頭尺寸不合適使用恰當的進樣針

5、廢液管中產生虹吸保持廢液管高於廢液液面

6、廢液管阻塞更換或疏通廢液管

d)色譜柱漏液

原因解決方法

1、尾端接頭鬆動擰緊接頭

2、卡套內有填料拆下、清洗卡套、重新安裝

3、篩板厚度不合適使用合適的篩板

e)檢測器漏液

原因解決方法

1、流通池墊片損壞更換墊片、避免過大的背景壓力(壓力降)

2、流通池窗破碎更換視窗

3、手緊接頭漏液擰緊或更換

4、廢液管阻塞更換廢液管

5、流通池阻塞重新安裝或更換

三)譜圖問題

液相色譜系統的許多問題都能在譜圖上反映出來。其中有一些問題可以通過改變裝置引數得到解決;對於色譜柱和流動相的正確選擇是得到好的色譜圖的關鍵。

a)峰拖尾

原因解決方法

1、篩板阻塞反衝色譜柱、更換進口篩板、更換色譜柱

2、色譜柱塌陷填充填料至色譜柱中

3、干擾峰改變流動相或更換色譜柱

4、流動相ph選擇錯誤調整ph值,一般在3-7

5、樣品與填料表面的溶化點發生反應加入離子對或鹼性修飾劑、更改色譜柱

6、柱外效應調整系統連線(使用更短、內徑更小的管路)使用小體積的流通池

7、二級保留效應,反相模式加入三乙胺(鹼性樣品)、加入乙酸(或酸性樣品)、加入鹽緩衝劑(離子化樣品)換柱

8、緩衝液不合適使用濃度20-100mm的緩衝液、使用pka等於流動相ph值的緩衝液

b)峰前延

原因解決方法

1、柱溫低公升高柱溫,一般為25-40度,不得超過60度

2、樣品溶劑選擇不恰當使用流動相作為樣品溶劑

3、樣品過載降低樣品含量

4、色譜柱損壞更換新柱

c)峰分叉

原因解決方法

1、分析柱汙染可能是柱子汙染,再生;入口可能被阻塞,拆下來清洗必要時更換色譜柱。

2、樣品溶劑不溶於流動相採取流動相作為樣品溶劑。

d)峰變形

原因解決方法

1、樣品過載減少樣品載量

2、樣品溶劑選擇不恰當減少進樣體積、運用低極性樣品溶劑

e)額外的峰

原因解決方法

1、樣品中有其他組份正常

2、前一次進樣的洗脫峰增加執行時間或梯度斜率、提高流速

3、空位或鬼峰檢查流動相是否純淨、使用流動相作為樣品溶劑、減少進樣體積

f)保留時間波動

原因解決方法

1、溫控不當調好柱溫

2、流動相組分變化防止變化(蒸發、反應等)

3、色譜柱沒有平衡在執行前給予足夠的時間平衡色譜柱

4、流速變化重新設定流速

5、幫浦中有氣泡從幫浦中除去氣泡

3、流動相選擇不恰當更換合適的流動相、選擇合適的混合流動相

g)基線漂移

原因解決方法

1、柱溫波動。 控制好柱子和流動相的溫度

2、流動相不均勻或純度不高使用hplc級的溶劑、高純度的鹽及新增劑、重蒸水、流動相在使用前進行脫氣

3、流通池被汙染或有氣體用甲醇或其他強極性溶劑沖洗流通池

4、檢測器出口阻塞取出阻塞物或更換管子

5、流動相配比不當或流速變化更改配比或流速

6、柱平衡慢,特別是流動相發生變化時更改流動相時,平衡半小時

7、流動相汙染、變質檢查流動相的組成、重新配製

8、樣品中有強保留的物質以饅頭峰樣被洗脫出,從而表現出乙個逐步公升高的基線。 重新用水及甲醇清洗柱,除去強留份。

10、檢測器沒有設定在最大吸收波長處。 將波長調整至最大吸收波長處

h)基線噪音

原因解決方法

1、在流動相、檢測器或幫浦中有空氣流動相脫氣。強極性溶劑沖洗系統除去氣。

2、漏液檢查管路接頭是否鬆動,幫浦是否漏液,是否有鹽析出和不正常的噪音。

3、流動相混合不完全用手搖動使混合均勻或使用低粘度的溶劑

4、溫度影響(柱溫過高) 減少差異、穩定時間長一點

5、在同一條線上有其他電子裝置檢查干擾是否來自於外部,加以更正。

6、幫浦振動在系統中加入脈衝阻尼器

7、流動相汙染、變質或由低質溶劑配成檢查流動相的組成。

8、流動相各溶劑不相溶選擇互溶的流動相

9、檢測器/記錄儀電子元件的問題斷開檢測器和記錄儀的電源,檢查並更正。

10、流通池汙染清洗流通池

11、檢測器燈能量不足更換燈

12、色譜柱填料流失或阻塞更換色譜柱

13、流動相混合不均勻或混合器工作不正常維修或更換混合器

i)寬峰

原因解決方法

1、流動相組成變化重新製備新的流動相

2、流動相流速太低調節流速

3、漏液(特別是在柱子和檢測器之間) 檢查接頭是否鬆動、幫浦是否漏液、是否有鹽析出以及不正常的噪音。如果必要更換密封。

4、檢測器設定不正確調整設定

5、柱外效應影響:柱子過載;檢測器對反應時間或池體積響應過大;柱與檢測器間管路太長或管路內徑太大小體積進樣、減少響應時間或使用更小的流通池、使用內徑為0.007-0.

01的短管路、減少響應時間

6、緩衝液濃度太低增加濃度

7、色譜柱汙染或失效,塔板數較低更換同樣型別的色譜柱。如果新柱子可以提供對稱的色譜峰,則用強溶劑沖洗舊柱子。

8、柱入口塌陷開啟柱入口,填補塌陷或更換柱子

9、呈現兩個或多個未被完全分離的物質的峰選擇其它型別的色譜柱以改善分離效果

10、柱溫過低提高柱溫。溫度不宜超過60℃

12、檢測器時間常數太大使用較小的時間常數

j)所有的峰面積都太小

原因解決方法

1、檢測器衰減設定過高或過低減少或增加衰減的設定

2、檢測器時間常數設定太大設定較小的時間常數

3、進樣量太少或太多增大或減少進樣量

4、記錄儀連線不當使用正確的連線

四)進樣閥的問題

以下問題在使用進樣閥過程中有可能發生。

a)手動進樣閥,轉動不靈

原因解決方法

1、轉子密封損壞更換或調整轉子密封

2、轉子太緊調整轉子的鬆緊度

b)手動進樣閥,載樣困難

原因解決方法

1、進樣閥安裝不當重新安裝

2、定量環阻塞清洗或更換定量環

3、進樣器汙染清洗或更換進樣器

4、管路阻塞清洗或更換管路

課堂常見問題及解決方案

四 資源 過分依賴教師所提供的資源,缺少第一手的研究資源。學生的資源過多地依賴於網路,而網上的資料有時缺乏真實性,這就有可能導致研究的結果 失真 教師應指導學生採用多種渠道進行資源的收集,如 採訪 調查 實地觀測 圖書館資料等。五 成果 研究展示成果單一,常用演示文稿和研究報告來代替一切成果,沒有上...

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問 用hplc進行分析時保留時間有時發生漂移,有時發生快速變化,原因何在?如何解決?答 關於漂移問題 1溫度控制不好,解決方法是採用恆溫裝置,保持柱溫恆定 2流動相發生變化,解決辦法是防止流動相發生蒸發 反應等 3柱子未平衡好,需對柱子進行更長時間的平衡 關於快速變化問題 1流速發生變化,解決辦法是...