年級：2009 專業：醫學檢驗班級：一班姓名：趙富海學號：2009221792
實驗八、細菌的藥物敏感試驗
【k-b法】
菌種（均為幼齡菌）：金黃色葡萄球菌1.5×108/ml、大腸埃希菌1.5×108/ml
藥物紙片：青黴素、慶大黴素、新諾明、環丙沙星
方法：1.塗菌（棋盤劃線法），室溫放10min；
2.貼藥敏紙片，注意間距（大於24mm）和邊距（大於15mm）；
3.置35℃ 24h判讀結果。
結果如圖所示：
金黃色葡萄球菌
測抑菌環直徑（單位：mm）：
金黃色葡萄球菌抗菌藥物敏感性試驗評價結果
實驗結論：金黃色葡萄球菌對青黴素耐藥，對慶大黴素、新諾明、環丙沙星敏感。
【試管稀釋法】
菌種：金黃色葡萄球菌1.5×108/ml、大腸b1.5×108/ml
抗生素：慶大黴素32u/ml
方法：1.對倍稀釋抗生素
2.加菌液0.1ml/管，搖均35℃ 16—18h
3.判讀mic
試驗操作如下圖所示：
注意 :設立對照管(肉湯對照管,待測菌生長對照管和質控菌生長對照管)
結果判斷: 不出現肉眼可見生長的最低藥物濃度為該藥對該細菌的mic.
如圖：實驗結論：mic=原藥物濃度(32u/ml) ×稀釋倍數(1:24)=2u/ml
【聯合藥敏試驗】（示教）
金黃色葡萄球菌大腸b
結果判斷：金黃色葡萄球菌聯合藥敏試驗結果判讀：
①青+鏈=青單+鏈單→相加作用
②青+紅=青單+紅單→相加作用
③青+萬=青單+萬單→相加作用
④青+林＞青單+林單→協同作用
大腸b聯合藥敏試驗結果判讀：
①青+紅=青單+紅單→相加作用
②青+鏈=青單+鏈單→相加作用
③青+林=青單或林單→無關作用
④青+南＞青單+南單→協同作用
【實驗討論】
1．k-b法原理
將含有定量抗菌藥物的紙片貼在已接種測試菌的瓊脂平板上。紙片中所含有的藥物吸取瓊脂中的水分溶解後便不斷地向紙片周圍區域擴散形成遞減的梯度濃度。在紙片周圍抑菌濃度範圍內測試菌的生長被抑制，從而形成透明的抑菌圈。
抑菌圈的大小反映測試菌對測定藥物的敏感程度。並與該藥對測試菌的最低抑菌濃度（mic）呈負相關關係，即抑菌圈愈大，mic愈小。
法影響因素
①培養基的質量，如ph、深度、硬度和表面濕度等；
②藥敏紙片的質量，含藥量和儲存方式；
③接種菌量正確與否是影響結果的重要因素之一，取決於比濁標準的配製，正確使用和儲存；
④試驗操作質量：接種細菌後貼片時5~15分鐘；
⑤孵育條件，溫度和時間：培養時間 16~18h,不要超過24h。
3．稀釋法原理：
以水解酪蛋白（mh）液體培養基將抗生素作不同濃度的稀釋，然後種入待測細菌，定量測定抗菌藥物對被測菌的最低抑菌濃度(mic)或最低殺菌濃度（mbc）。
4. 稀釋法影響因素：培養基、接種菌量、蛋白質結合率、抗菌藥物的配製、結果觀察的時間等因素均能影響本試驗的結果。
5．抗生素藥物敏感性試驗（ast）的意義
①可**抗生素**的效果，既ast試驗結果為「敏感」時，**可能有效；試驗結果為「耐藥」時，使用該藥物**肯定失敗；
②指導臨床醫生選擇使用抗生素，ast的結果往往在給予病人經驗性**24~48h之後，若ast結果為「敏感」，該**為有效，若結果為「耐藥」，即應更換藥物；
③提供所選擇藥物的依據；
④監測耐藥性，分析耐藥菌的變遷，掌握耐藥菌感染病的流行病學，控制和預防耐藥菌感染的發生和流行。
6．通過此次實驗掌握紙片擴散法（k-b法）、試管稀釋法的原理、操作方法、結果的判讀及其臨床意義，並掌握聯合藥敏試驗結果的觀察、判斷。
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