ccc製藥****
驗證方案起草、審核、批准表
計畫驗證時間
2023年9月
驗證小組人員名單
目錄1、概述5
2、試驗所需儀器5
3、試劑和樣品5
4、色譜條件5
5、溶液配製5
6、專屬性試驗6
7、溶液穩定性試驗6
8、線性試驗7
9、**試驗7
10、精密度試驗8
11、檢出限和定量限9
12、含量測定方法評價10
1、概述
通過對api含量測定方法的驗證，得到可信賴的和準確的資料，用於藥品的含量測定，從而驗證該方法的可行性。
2、試驗所需儀器
分析天平（靈敏度為 0.01mg ）型號編號有效期
液相色譜儀型號編號有效期
3、試劑和樣品
乙腈 hplc級
api標準品 usp標準品
api有關物質a usp標準品
有關物質b usp標準品
有關物質c usp標準品
4、色譜條件
色譜柱： 4.6mm×10cm c8 柱，其填料粒徑為3.5微公尺
檢測波長：254nm
流速：1.0 ml/min
進樣量：20μl
柱溫：40℃
流動相：a溶液和b溶液不同比例的混合溶液。（見下表）
其中， 稀釋液——水：乙腈（60：40）
a溶液——水：乙腈（70：30）
b溶液——水：乙腈（50：50）
5、溶液配製
系統適應性溶液：取api標準品和api相關物質a和相關物質b標準品，精密稱定，用稀釋液配製成0.05mg/ml的溶液。
標準溶液：取適量api標準品，用乙腈溶解，超聲處理，得到1.0mg/ml的溶液。
取4ml該溶液置於10ml容量瓶中，用水稀釋至刻度。用稀釋液進一步稀釋，即得濃度為0.04mg/ml的溶液。
供試溶液：取本品約20mg，置於50ml容量瓶中，精密稱定，用20ml乙腈溶解（可以超聲處理），然後用水稀釋至刻度。吸取1ml此種溶液置於10ml容量瓶中，用稀釋液稀釋至刻度，混勻即得。
6、專屬性試驗
取系統適應性溶液注入色譜系統，記譜色譜圖，api相關物質b（離api峰最近的雜質峰）與api峰的分離度應不小於1.5，各雜質峰分離良好，同時取稀釋液作空白溶液，注入色譜系統，記譜色譜圖，在api出峰處無干擾峰出現。同時與api降解試驗結果對比，各降解產物峰在api峰處無干擾，不影響api測定。
7、溶液穩定性試驗
取本品約20mg，置於50ml容量瓶中，精密稱定，用20ml乙腈溶解（可以超聲處理），然後用水稀釋至刻度。吸取1ml此種溶液置於10ml容量瓶中，用稀釋液稀釋至刻度，混勻即得製成供試品溶液。取供試品溶液分別於0小時，2小時，4小時，6小時，8小時注入色譜系統，記譜色譜圖，記錄api峰面積，8小時內api峰面積的相對標準偏差（rsd%）不大於2.
0%。8、線性試驗
200%標準貯備溶液：取api標準品20mg，精密稱定，置50ml容量瓶中，用20ml乙腈溶解（可以超聲處理），然後用水稀釋至刻度。精密吸取10ml此種溶液置於50ml容量瓶中，用稀釋液稀釋至刻度，混勻即得濃度為0.
08mg/ml的200%的標準貯備溶液。
160%標準溶液：精密移取8.0ml的200%標準儲備溶液置10ml容量瓶中，加稀釋液稀釋至刻度，混勻即得。
120%標準溶液：精密移取6.0ml的200%標準儲備溶液置10ml容量瓶中，加稀釋液稀釋至刻度，混勻即得。
100%標準溶液：精密移取5.0ml的200%標準儲備溶液置10ml容量瓶中，加稀釋液稀釋至刻度，混勻即得。
80%標準溶液：精密移取4.0ml的200%標準儲備溶液置10ml容量瓶中，加稀釋液稀釋至刻度，混勻即得。
40%標準溶液：精密移取2.0ml的200%標準儲備溶液置10ml容量瓶中，加稀釋液稀釋至刻度，混勻即得。
20%標準溶液：精密移取1.0ml的200%標準儲備溶液置10ml容量瓶中，加稀釋液稀釋至刻度，混勻即得。
分別取上述線性供試品溶液注入液相色譜儀，記錄api峰面積，以api的峰面積對其濃度進行一元線性回歸，其相關係數（r）不小於0.999。
9、**試驗（標準加入法）
標準溶液：按方法要求製備
供試品溶液：按方法要求製備
120%加標供試品溶液：以線性試驗中120%的標準溶液替代稀釋液配製供試品溶液，平行製備三份。
100%加標供試品溶液：以線性試驗中100%的標準溶液替代稀釋液配製供試品溶液，平行製備三份。
80%加標供試品溶液：以線性試驗中80%的標準溶液替代稀釋液配製供試品溶液，平行製備三份。
測試法：分別吸取上述配製好的溶液，按前述色譜條件進樣，記錄api峰面積，按下式計算**率，要求**率在98%~102%範圍內，9個**率的rsd%應不大於2.0%。
10、精密度試驗（系統精密度，重複性和方法中間精密度試驗）
方法重複性-1：第一天（不同人或不同儀器），按5中供試品配製方法，平行配製六份樣品，按含量測試法進行測定，六份樣品檢測結果的相對標準偏差（rsd）不大於2.0%。
方法重複性-2：第二天（不同人或不同儀器），按5中供試品配製方法，平行配製六份樣品，按含量測試法進行測定，六份樣品檢測結果的相對標準偏差（rsd）不大於2.0%。
每次新鮮配製標準溶液和供試品溶液。
方法中間精密度：兩次方法重複性的12個結果的rsd%應不大於3.0%。
系統精密度：兩次方法重複性試驗的標準溶液的6次重複進樣峰面積的rsd%應不大於2.0%。
11、檢出限和定量限
對線性溶液中20%的標準溶液的s/n進行評價，定量限s/n應不小於10，檢出限s/n應不小於3。
式中：cdl——檢出限（g/ml）
cql——定量限（g/ml）
c——樣品濃度（g/ml）
s/n——訊雜比
12、含量測定方法評價
附：我們的相關提問：
1、上面5中標準溶液的配製是直接從usp31中翻譯過來的，但我們覺得那種說法很繁瑣，並且標準溶液和樣品溶液配製方法不一致，我們覺得直接按它的供試品溶液配製方法配製標準品挺好的，後面驗證時我們也是就按供試品溶液配製法配的標準溶液。不知是否妥當，請你們參考一下。有關物質驗證時也涉及到這個問題。
2、含量方法中間精密度12個資料的rsd%多少合適，相關物質呢？我們以前做國內只做過6個資料的評價。
3、原料藥的**試驗怎麼做啊，請指點一下。上面我們是按你們給我們殘留溶劑的方案套用過來的。我們以前做國內一般都不做原料藥的**試驗，而是直接從精密度等其他驗證專案中推論而得。
我們只做過製劑的向空白輔料裡加原料的**試驗。
4、我們的含量和相關物質都是按usp31方法做的，是不是實際上只需做精密度，溶液穩定性，專屬性，降解試驗就可以了?
5、我們看了一下q2a，含量測定時是不是不需做檢出限和定量限？
6、在上面的含量方案裡我們把所有驗證內容都理出來了，還是請你們一一給我們審閱一下，把你們的建議給我們提出來。
非常的感謝！
含量測定分析方法驗證
在進行質量研究的過程中，一項重要的工作就是要對質量標準中所涉及到的分析方法進行方法學驗證，以保證所用的分析方法確實能夠用於在研藥品的質量控制。為規範對各種分析方法的驗證要求，我國已於2005年頒布了分析方法驗證的指導原則。該指導原則對需要驗證的分析方法及驗證的具體指標做了比較詳細的闡述。但是文中未涉...
檢驗方法驗證方案含量測定
目的 證明所採用的檢驗方法適於相應的檢測要求，具有可靠的準確度 精密度。範圍 含量的檢定方法的前驗證 編定依據 藥品生產質量管理規範 1998年修訂版及驗證管理辦法 職責 驗證小組人員 目錄1.概述 2.驗證目的 3.職責 3.1驗證小組 3.2品質部 3.3化驗室 4.驗證內容 4.1驗證的準備工...
含量驗證方案
頭孢替安酯片 含量分析方法驗證方案 protocol approval 頭孢替胺酯片含量測定依照日本藥典採用高效液相色譜內標法進行計算。規定限度為標示量的90.0 110.0 3.0.2 液相色譜條件 色譜柱 c18矽烷鍵合矽膠柱 流動相 0.2m磷酸氫二鉀 1 2 乙腈 冰醋酸 72 28 1 稀...