微生物綜合實驗小結
0743002222 陸健
本組組員：謝桂琴王前堂陸健
本次微生物綜合實驗分為三部分，分別是抗生素效價測定、水中細菌總數測定以及濾膜法測定水中大腸桿菌菌群。實驗中主要涉及的微生物實驗知識有培養基製備、抑菌實驗、平板菌落計數、濾膜法過濾菌體等基本實驗技能。
第乙個實驗抗生素效價測定時本次實驗中難度相對較大的乙個，主要是製作抗生素的效價標準曲線，也是該實驗的核心內容。實驗採用擴散法，抗生素在牛津杯中會慢慢擴散，濃度越高產生的抑菌圈越大。操作的大致步驟方法是：
1.配製ph為6的磷酸緩衝液，以及青黴素標準溶液。
2.使用青黴素標準液和緩衝液配製不同濃度標準的青黴素液。
3.製作金黃色葡萄球菌懸液。
金黃色葡萄球菌的菌液濃度不宜過高，在下面製作抗生素擴散平板時應根據菌液濃度新增適宜量的金黃色葡萄球菌。
4.抗生素擴散平板製備。
抗生素擴散平板由兩層培養基構成，底層為不含葡萄糖的牛肉膏蛋白腖培養基，上層為混有金黃色葡萄球菌的含糖牛肉膏蛋白腖培養基。
5.製作標準曲線。
培養基製作完成後在每個平板上放上四個牛津杯，距離相等，共18個平板72個牛津杯，4個牛津杯間隔的2個中各加入1u/ml的標準品溶液，將每三個平板組成一組，共六組。在第一組的每個平板的2個空牛津杯中均加入0.4u/ml的標準液，依次將6種不同濃度的標準液分別加入6組平板中。
37℃下培養16—18h。
實驗結果如下（單位mm）：
根據實驗結果並對抑菌圈直徑進行校正：
繪製半對數標準曲線：
擴散法測定標準曲線所需的步驟過多，所引起的累積誤差極易影響實驗的準確性，這是本方法的最大缺點。
水中細菌總數測定檢測自來水和池水的細菌數量，前者採用混菌法，即將水樣直接與未凝固的牛肉膏蛋白腖培養基混合再培養，而後者則為普通的塗平板菌落計數。由於自來水已經過消毒處理，實驗組兩個平板分別長出了7個和1個菌落，平均為4個菌落，由於僅取了0.1ml水樣，因此平均每毫公升自來水中含菌為40個。
每100微公升池水塗平板的結果如下表：
每毫公升池水的細菌總數在幾十個到上百個之間，是含菌量極少的池水。
平板菌落計數是最常用的細菌計數方式，但是細菌種類繁多，不同細菌有不同的生長要求，本實驗所採用的牛肉膏蛋白腖培養基並不可能使所有細菌在短時間內生長成菌落，隨著時間的增加，可能會有一些不同種類的菌落形成，還有些細菌可能一直無法形成菌落，因此實驗所測資料並不完全代表水中所含細菌的數目。
最後乙個實驗濾膜法測定水中大腸桿菌菌群，濾膜孔徑為0.45nm，可以截留水中的細菌。方法是使用滅菌後的帶濾膜的濾器抽濾一定體積的自來水，再將濾膜取下，用少量無菌水沖洗或直接將濾膜貼在伊紅美藍培養基上，由於大腸桿菌分解乳糖產生酸性物質與伊紅美藍結合，生成帶金屬光澤的淺藍色化合物，可以區別其他菌落，故而採用此方法辨別大腸桿菌。
該實驗中伊紅美藍培養基的製作過程需格外注意滅菌溫度，由於乳糖高溫下極易分解，因此滅菌操作直接關係實驗的成敗。其次，本實驗中所用自來水已經過消毒處理，大腸桿菌會很少，因此可以加大抽濾量。因為自來水龍頭處較容易滋生各類微生物，在取自來水前需首先對自來水龍頭進行滅菌。
本組實驗時所抽濾的自來水體積為3l，結果為僅有乙個桿菌大腸菌落，符合飲用水每公升大腸桿菌不超過三個的質量要求。
本次綜合實驗共16學時，耗時2至3天。儘管實驗比較簡單，但基本涵蓋了微生物所有的基礎實驗操作，強化了對於微生物實驗的認識並明確了實驗的重點所在。
2023年6月2日
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