1細胞培養：從活的機體中取出組織或細胞，分散成單個細胞，模擬機體內的生長條件，在體外建立無菌、適溫和一定營養條件等，使其在體外環境中繼續生長繁殖的過程，並維持其結構和功能的技術。
2淨化工作間設計標準為萬級
3消毒：殺死病原微生物，但不一定能殺死細菌芽孢的方法，通常用化學的方法來達到消毒的作用，用於消毒的化學藥物叫做消毒劑。
4滅菌：把物理上所有的微生物全部殺死的方法，通常用物理的方法來到達滅菌的目的。
5貼壁依賴型細胞分為4型：成纖維細胞型、上皮細胞型、遊走細胞型、多型細胞型
6傳代培養：體外生長的培養細胞受營養條件、生長空間等因素的限制，當細胞增殖達到一定密度後，則需要分離出一部分細胞和更新培養液進行擴大培養的過程。
7細胞活力：活細胞佔總細胞的百分比
8凍存和復甦的原則：慢凍快融
9細胞凍存常用保護劑為dmso，它是一種滲透性保護劑
10細胞汙染和檢測方法：肉眼直接觀察法、培養檢查法、顯微鏡觀察法、pcr檢測
11支原體汙染的處理：用mra處理細胞、清洗純化法、藥物輔助加溫處理、使用支原體特異性血清
12原代培養：從體內取出組織接種培養到第一次傳代階段，完成了從體內環境到體外環境的過渡和適應過程，恢復了**增殖和生長發育的能力
13實體組織形成細胞懸液的方法：機械分散法、消化分離法（上皮細胞和肝細胞）、貼塊培養法（血管平滑肌細胞）
14懸浮細胞分離方法（淋巴細胞）：密度梯度離心
15原代細胞的純化：自然純化和人工純化（酶消化法、反覆貼壁法、培養及限定方法、流式分選）
16動物細胞大規模培養方式：分批式培養、流加式培養、半連續式培養、連續式培養
17流式細胞術：高能量雷射照射高速流動狀態下被螢光色素染色的單細胞或顆粒，測量其產生的散射光和發射螢光的強度，從而對細胞進行快速多引數定性或定量檢測和分選的一種細胞分析技術。
18流式細胞儀：以流式細胞術為理論基礎，是集流體力學、雷射技術、電子工程學、單轉殖抗體技術、細胞螢光化學和計算機等學科知識為一體的高科技細胞分析儀。
19流式細胞儀特點：單個細胞分析、同時多引數分析、速度快（10000個/s）、統計學意義（提供細胞群體的均值和分布情況）、分選感興趣的細胞
20流式細胞術對照的設定：
空白對照（自發螢光/本底螢光）：未染色細胞
同型/獨特型對照：抗原抗體之間是否特異性結合，排除非特異結合
補償對照：多色分析時做每種螢光素單獨染色的細胞
陽性對照：確定操作過程的正確性
21螢光補償：利用電子技術活計算機軟體等方法將串入相鄰螢光通道的訊號加以扣除的技術
22流式細胞儀資料顯示方式：單引數直方圖、雙引數二維點圖、等高線圖、密度圖
23細胞增殖檢測技術：
直接計數：優點：不需要特定的試劑和儀器、準確。缺點：不適合樣品數量多的情況、不適合評估特定的亞群
胸腺嘧啶核苷摻入法（3h—tdr）：優點：敏感性高、客觀性好、重複性好。缺點：但需要一定裝置條件，存在放射性核素汙染的問題
5溴脫氧尿嘧啶核苷（brdu）檢測法：優點：不僅能用於體外實驗，還能用於活體實驗。
缺點：brdu需要變性dna後才能與抗體結合，破壞dna雙鏈結構，影響其它染料結合染色，導致染色瀰散，準確性降低等問題
羥基螢光素二醋酸鹽琥珀醯亞胺脂（cfse）檢測法：進入細胞後不可逆地與氨基結合偶聯到細胞蛋白質上，當細胞**時，cfse標記螢光可平均分配至兩個子代細胞，其螢光強度是親代的一半，在乙個增殖的細胞群中，各連續代細胞的螢光強度呈對遞減。
mtt檢測法：線粒體內的脫氫酶可將黃色的mtt分解成紫色的水不溶性的甲瓚，並沉積在細胞中，死細胞無此功能，mtt結晶形成的量與細胞數和細胞活力呈正比
cck8：優點：a使用方便，省去了洗滌細胞，，即開即用。缺點：a**比較貴b cck8試劑為淡紅色，與含酚紅的培養基顏色相近，容易漏加或多加
ki67（增殖細胞核抗原）：核增殖標誌物，無組織特異性，可靠、迅速反映增殖率
24細胞凋亡檢測技術：
形態學檢測：吉姆薩染色、瑞氏染色、hoechst33342、hoechst33258、dapi
annexin v：凋亡細胞磷脂醯絲氨酸外翻到細胞膜外，annexin v是一種鈣離子依賴的磷脂結合蛋白
pi（碘化丙啶）染色：溴化乙錠的類似物，嵌入雙鏈dna後釋放紅色螢光，dna染色的細胞核染色試劑，常用於細胞凋亡檢測，能穿過破損的細胞膜而對核染色。
dna fragmentation：凋亡細胞dna在核小體間發生有規律的斷裂，出現180—200bp的dn**段，壞死細胞dna斷裂為無特徵的dn**段，進行瓊脂糖電泳可區分凋亡和壞死。
tunel（脫氧核糖核酸酶介導的缺口末端標記法）：細胞凋亡染色體dna雙鏈或單鏈斷裂產生大量的粘性3—oh末端，可在脫氧核醣核苷酸末端轉移酶的作用下，將脫氧核醣核苷酸和螢光素、過氧化物酶、鹼性磷酸酶或生物素形成的衍生物標記到dna的3末端，從而進行凋亡細胞的檢測。
線粒體膜電位：親脂性陽離子螢光染料可結合到線粒體基質，其螢光的增強和減弱說明線粒體內膜電負性的增高和降低（螢光顯微鏡檢測、facs檢測）
細胞色素c釋放：凋亡細胞中細胞色素c從線粒體向胞質釋放（分別抽提線粒體組分和細胞質組分，用抗細胞色素c的抗體進行western-blot分析，可發現細胞色素c由線粒體向細胞質轉位）
caspase活性：caspase3正常以酶原形式存在於胞漿中，在凋亡的早期階段被啟用，可經western-blot分析
25組織工程：應用細胞生物學和工程學原理，將人體某部分的組織細胞種植和吸附在一種生物材料的支架上進行人工培養繁殖、擴增，然後移植到人體內所需要的部位，從而達到器官修復或再造的**目的的一種技術。
26組織工程3個支柱：種子細胞、生長因子、生長支架。
27組織構建主要有3種方式：
體內構建：種子細胞與生物材料復合後，組織尚未完全角成時即植入體內，組織形成與生物材料降解在體內完成。
體外構建：在體外模擬體內環境，應用生物反應器形成組織和器官。
原位組織構建：單純植入生物材料支架於體內組織缺損部位，依靠周圍組織細胞遷移並粘附於生物材料支架，形成並再生組織，這種方式並非經典的組織工程概念。
28幹細胞的主要特徵：圓形或橢圓形、較高的端粒酶活性、增殖緩慢（機體需要時進入分化）、穩定增殖（維持自身數目）
29幹細胞維持自穩性的機制：不對稱**
30胚胎幹細胞：從胚胎著床前胚胎的內細胞團經體外分化抑制培養分離的一種全能性細胞，可以分化成任何一種組織型別的細胞。
31胚胎幹細胞的分離方法：免疫法、組織培養法、顯微分離法
32 ips細胞與es細胞的異同：
相同：表達相同的多能性marker、全基因組比對幾乎相同、都可以培育出小鼠個體
不同：定向分化能力有強弱
33 ips細胞的優勢：不用破壞胚胎，無倫理爭議、不需卵細胞，**廣泛、無免疫排斥、可作為研究疾病的模型。
34轉染：將外源分子（dna、rna）匯入真核細胞的技術。
35轉染的方法：磷酸鈣共沉澱法、deae—葡聚醣法、脂質體轉染法、奈米顆粒作為載體的轉染、電穿孔法、顯微注射法、病毒介導的轉染。
36轉染方法優缺點比較：
電穿孔法：
優點：轉染效率較高。缺點：需要昂貴的儀器，對細胞的損傷較大（需要更多的細胞和dna）
顯微注射法：
優點：轉外源基因沒有長度上的限制，目前已證明數百kb dn**段均能成功。缺點：裝置昂貴、操作技術需要長時間練習、每次只能注射有限的細胞、不適合大量轉染細胞的需要。
磷酸鈣共沉澱法：
優點：便宜、對某些細胞轉染效率高。缺點：細胞有限制性、重複性不佳、微小ph改變會導致轉染的失敗
deae—葡聚醣法：
優點：簡單、重複性比磷酸鈣共沉澱法好、可轉染貼壁細胞和懸浮細胞。缺點：濃度高時有一定細胞毒性、不適用於穩定轉染、轉染時要除掉血清。
脂質體轉染法：
優點：適用於把dna轉入懸浮和貼壁培養細胞，可用於瞬轉和穩轉、轉入效率高，比磷酸鈣法高5—100倍、能夠轉染dna和rna、轉染的穩定性好，可重複性高。
缺點：**較貴，不適合大批量轉染、陽離子脂質體對細胞毒性較高，可能干擾細胞代謝。
病毒介導的轉染：
腺病毒載體：
優點：插入dn**段較長、宿主範圍廣，可感染**細胞和非**細胞、對人致病性低、不整合到染色體上，無插入致突變性、能同時表達多個基因、與人類基因同源，蛋白產物能有效摺疊和修飾、能有效進行增殖，滴度高，外源基因表達效率高、病毒顆粒穩定，易於濃縮和純化。缺點：
表達時間短，需反覆刺激、具有免疫原性，可能刺激宿主。
逆轉錄病毒載體：
優點：能夠整合到宿主細胞、產生假病毒。
缺點：只能感染能夠**的細胞、整合的時候會導致宿主基因組突變、有潛在致瘤性。
慢病毒載體：
優點：**細胞和非**細胞均能感染、能夠整合到基因組、免疫原性弱
缺點：整合時同樣有可能導致宿主基因組突變。
37轉染效率檢測方法：免疫螢光、流式、western、pcr
38瞬時轉染：外源基因進入受體細胞後，存在於游離的載體上，不整合到細胞的染色體上。外源基因匯入細胞1-2天後收穫細胞進行檢測和分析，乙個宿主細胞可同時存在多個拷貝數，產生高水平的表達。
39穩定轉染：dna整合到宿主細胞的染色體，外源dna整合到染色體上的概率很小，大約1/104轉染細胞能整合。通常需要一些選擇性標記反覆篩選，得到穩定轉染的同源細胞系。
40穩定轉染常用的篩選藥物：g418、zeocin、puromycin
41影響細胞轉染的主要因素：細胞狀態、血清、dna質量、轉染技術
42同源重組：將外源基因轉入受體細胞染色體上的方法，因為在該座位有與匯入基因同源的序列，通過單一或雙交換，新基因片段可替換有缺陷的基因片段，達到修正缺陷基因的目的。
43位點特異性重組：發生在兩條dna鏈特異位點上的重組，重組的發生需要一段同源序列即特異性位點（又稱附著點att）和位點特異性的蛋白因子即重組酶參與催化。
44基因打靶技術：利用dna同源重組的原理，在基因組中某一特定部位進行定點的基因重組，是研究基因功能的有效手段。包括基因敲除和基因敲入。
細胞增殖總結
一 細胞 方式的識別 三看法 一看染色體數目 若為奇數，細胞 方式為減數第二次 若為偶數，細胞 方式可以是有絲 或減數第一次 若染色體數為偶數 二看有無同源染色體 沒有同源染色體，細胞 為減數第二次 有同源染色體，細胞 可以是有絲 或減數第一次 若存在同源染色體 三看染色體行為 若出現同源染色體聯會...
淋巴細胞分離的常用方法及原理
檢驗學中的淋巴細胞分離的常用方法及原理是事業單位考試中重要的考點之一，是需要我們著重掌握的內容。今天讓我們一起來學習相關的知識點吧。純淋巴細胞群的採集是利用單核細胞在37 和ca2 存在時，能主動粘附在玻璃 塑料 尼龍毛 棉花纖維或葡聚醣凝膠的特性，從單個核細胞懸液中除去單核細胞，從而獲得純淋巴細胞...
細胞染色方法總結
jc l染色非常簡單。首先可將成品jc 1以dmso配成儲存液 1 5mg ml 儲存於 20 用時以培養液稀釋至10ug ml終濃度。對貼壁細胞可以直接棄去培養液，漂洗細胞後直接加入染色液，10 30min後在螢光顯微鏡下或者雷射共聚焦下觀察。線粒體狀態好時細胞以綠色為主，當紅光訊號增強時，紅綠相...