細胞染色方法總結

jc-l染色非常簡單。首先可將成品jc-1以dmso配成儲存液(1～5mg/ml)，儲存於-20℃，用時以培養液稀釋至10ug/ml終濃度。對貼壁細胞可以直接棄去培養液，漂洗細胞後直接加入染色液，10-30min後在螢光顯微鏡下或者雷射共聚焦下觀察。

線粒體狀態好時細胞以綠色為主，當紅光訊號增強時，紅綠相疊，以橙色為主。該染色運用於懸浮細胞時還可以通過流式細胞儀進行檢測，收集紅/綠訊號強度，計算其強度比。

鈣黃綠素-am(calcein-am):calcein -am本身並不是螢光分子，但通過活細胞內的酯酶作用，calcein -am能脫去am基，產生的calcein能發出強綠色螢光（激發：490 nm，發射：

515 nm）。因此calcein -am僅對活細胞染色

細胞活力鑑定——台盼藍染色法

原理：細胞損傷或死亡時，台盼藍可穿透變性的細胞膜，與解體的dna 結合，使其著色。而活細胞能阻止染料進入細胞內。故可以鑑別死細胞與活細胞。

用品：1. 4%台盼藍母液：稱取4g台盼藍，加少量蒸餾水研磨，加雙蒸水至100ml，用濾紙過濾，4度儲存。使用時。用pbs稀釋至0.4%。

2. 吸管、血細胞計數板、顯微鏡

步驟：1、製備單細胞懸液。並作適當稀釋（106 細胞/ml）

2、染色：細胞懸液與0.4%台盼藍溶液以9:1混合混勻。

3、計數：在三分鐘內，用計數板分別計數活細胞和死細胞

結果統計：

鏡下觀察，死細胞被染成淡藍色，而活細胞拒染。

根據下式求細胞活力：

活細胞率（%）= 活細胞總數/（活細胞總數+死細胞總數）×100

注意事項：台盼藍染細胞時，時間不宜過長。否則，部分活細胞也會著色，會干擾計數。

台盼藍染色原理

通常認為細胞膜喪失完整性，細胞即可被認為已經死亡。台盼藍(trypan blue)是檢測細胞膜完整性最常用的生物染色試劑。健康的正常細胞能夠排斥台盼藍，而死亡的細胞，膜的完整性喪失，通透性增加，細胞可被臺盼藍染成藍色。

依據此原理，細胞經台盼藍染色後，可通過顯微鏡，直接鏡下計數或拍照後計數，實現對細胞存活率比較精確的定量分析。

試述台盼藍染髮鑑別死活細胞的原理，試分析染色時間過長本來是活細胞也被染色的原因

死細胞的細胞膜無屏障作用，台盼藍馬上進入細胞而顯藍色。活細胞細胞膜有選擇透性，對台盼藍的透性小，進入細胞慢。若染色時間過長，台盼藍可能通過胞吞或胞飲作用進入細胞。