微生物斜面接種 高壓鍋使用 細胞染色實驗

2022-10-05 05:57:03 字數 1974 閱讀 6927

斜面接種

將微生物從乙個斜面培養基接種至另乙個斜面培養基上的方法,稱為斜面接種法。其方法步驟如下:

首先,點燃酒精燈。將菌種和斜面培養基的兩隻試管平行放在左手上,用拇指與其它四指夾住,並使中指位於兩試管之間,兩試管的管口齊平。

其次,用右手先將棉塞擰轉鬆動,並稍拉出一些,以利接種時拔出。

第三,右手持接種針,在酒精燈將針凡糠稚蘸烀鵓。針頭以上凡是接種時可能進入試管的部分,均應用火灼燒。

以下操作都要使試管口靠近火旁。

第四,用右手的小指與掌間拔掉左手上兩隻試管上的棉塞,同時迅速將試管口在酒精燈上燒灼3秒鐘左右,使管口上可能沾染的少量雜菌得以燒死。

第五,將燒過的接種針伸入菌種管內,先將針頭接觸培養基上沒有菌的部位(如斜面的頂端),使其冷卻,以免燙死被接種的菌體。然後輕輕接觸菌體,取出少許,慢慢將接種針抽出試管,接種針抽出時不要使針頭部分碰到管壁和管口,取出後,不可使針頭通過火焰,更不可觸及其它無關物品或桌面。

第六,迅速將接種針伸進另一試管,在培養基上輕輕劃線,接種菌體於其上。劃線時,要由底部起劃較密的平行線,一直劃到頂部,以充分利用斜面面積,但不要將培養基劃破。

第七,燒灼試管口,將棉塞塞上。塞棉塞時,不要移動試管迎接棉塞,以免試管在移動中納入可能含菌的空氣。

第八,將針頭在火焰上燒灼滅菌。放回原處後,騰出手將棉塞塞緊。

高壓滅菌鍋的使用

1.首先將內層滅菌桶取出,再向外層鍋內加入適量的水,使水面與三角擱架相平為宜。

2.放回滅菌桶,並裝入待滅菌物品。注意不要裝得太擠,以免防礙蒸汽流通而影響滅菌效果。三角燒瓶與試管口端均不要與桶壁接觸,以免冷凝水淋濕包口的紙而透入棉塞。

3.加蓋,並將蓋上的排氣軟管插入內層滅菌桶的排氣槽內。再以兩兩對稱的方式同時旋緊相對的兩個螺栓,使螺栓鬆緊一致,勿使漏氣。

4.用電爐或煤氣加熱,並同時開啟排氣閥,使水沸騰以排除鍋內的冷空氣。待冷空氣完全排盡後,關上排氣閥,讓鍋內的溫度隨蒸汽壓力增加而逐漸上公升。當鍋內壓力公升到所需壓力時,控制熱源,維持壓力至所需時間。

本實驗用 1.05kg/cm2,121.3℃,20分鐘滅菌。

5.滅菌所需時間到後,切斷電源或關閉煤氣,讓滅菌鍋內溫度自然下降,當壓力表的壓力降至0時,開啟排氣閥,旋鬆螺栓,開啟蓋子,取出滅菌物品。如果壓力未降到0時,開啟排氣閥,就會因鍋內壓力突然下降,使容器內的培養基由於內外壓力不平衡而衝出燒瓶口或試管口,造成棉塞沾染培養基而發生汙染。

6.將取出的滅菌培養基放入 37℃溫箱培養24小時,經檢查若無雜菌生長,即可待用。

滅菌鍋使用注意事項

a 待滅菌的物品放置不宜過緊;b 必須將冷空氣充分排除,否則鍋內溫度達不到規定溫度,影響滅菌效果;c 滅菌完畢後,不可放氣減壓,否則瓶內液體會劇烈沸騰,沖掉瓶塞而外溢甚至導致容器爆裂。須待滅菌器內壓力降至與大氣壓相等後才可開蓋;d 現在已有微電腦自動控制的高壓蒸氣滅菌鍋,只需放去冷氣後,儀器即可自動恆壓定時,時間一到則自動切斷電源並鳴笛,使用起來很方便。

細菌簡單染色技術

5.1塗片取兩塊潔淨無油的載玻片,在無菌的條件下各滴一小滴生理鹽水(或蒸溜水)於玻片**,用接種環以無菌操作,分別從枯草芽孢桿菌、藤黃微球菌和大腸桿菌斜面上挑取少許菌苔於水滴中,混勻並塗成薄膜。若用菌懸液(或液體培養物)塗片,可用接種環挑取2~3環直接塗於載玻片上。

注意滴生理鹽水(蒸餾水)和取菌時不宜過多且塗抹要均勻,不宜過厚。

5.2乾燥室溫自然乾燥。也可以將塗面朝上在酒精燈上方稍微加熱,使其乾燥。但切勿離火焰太近,因溫度太高會破壞菌體形態。

5.3固定如用加熱乾燥,固定與乾燥合為一步,方法同乾燥。塗片、乾燥和熱固定。

5.4染色將玻片平放於玻片擱架上,滴加染液1~2滴於塗片上(染液剛好覆蓋塗片薄膜為宜)。呂氏鹼性美藍染色1~2min,石炭酸複紅(或草酸銨結晶紫)染色約1min。

5.5水洗傾去染液,用自來水從載玻片一端輕輕沖洗,直至從塗片上流下的水無色為止。水洗時,不要水流直接沖洗塗面。水流不宜過急、過大,以免塗片薄膜脫落。

5.6乾燥甩去玻片上的水珠自然乾燥、電吹風吹乾或用吸水紙吸乾均可以(注意勿擦去菌體)。

5.7鏡檢塗片乾後鏡檢。塗片必須完全乾燥後才能用油鏡觀察。

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