● pbs緩衝液配製：0.01%，1000ml，ph值7.4
nacl 8g
kcl 0.2g
na2hpo4 1.150g
kh2po4 0.2g
● 多聚甲醛溶液
配製：4%，100ml
多聚甲醛
pbs溶液 100ml
● triton-x溶液
配製：0.5%
pbs溶液 200ml
triton-x 1ml
● 無水酒精
75%酒精、95%酒精也由無水酒精與蒸餾水按體積比配製
● dab顯色試劑盒
武漢博士德生物工程****，產品編號：ar1022
試劑盒組成：
顯色劑a：dab×20倍濃縮液，3ml
顯色劑b：h2o2×20倍濃縮液，3ml
顯色劑c：×20倍tbs濃縮緩衝液，3ml
● sabc試劑盒
武漢博士德生物工程****，產品編號：sa1025
● 二甲苯
● 中性樹脂（用二甲苯溶解後使用）
● 鍍膜載玻片（自製鍍膜）
鍍膜用鉻礬明膠(即配即用)
配製：每100ml
明膠1g
蒸餾水100ml
鉻礬（硫酸鉻鉀）0.1g（水浴攪拌溶化）
★ 溶解後需要過濾再用
① 載玻片在放有洗滌劑的沸水中，沸騰1小時；
② 沖洗晾乾後，放入重鉻酸鉀溶液中過夜；
③ 用蒸餾水沖洗後，浸入無水酒精過夜；
④ 取出後用烘箱烘乾；
⑤ 浸潤鉻礬明膠，用烘箱烘乾；
⑥ 重複⑤，完成備用。
(一) 生物素染色
① 腦片放入4%多聚甲醛中過夜，固定，4℃；
② 換入pbs中過夜，4℃；
③ 放入0.5%triton溶液中1小時；
④ pbs漂洗3次，每次5分鐘；
⑤ 腦片放入sabc溶液中處理12-16小時，4℃；
⑥ pbs漂洗3次，每次5分鐘；
⑦ 腦片放入dab液（取1ml雙蒸水，先後加入dab試劑盒中的tbs濃縮液和dab濃縮液，加入後均需充分混勻）中處理10分鐘；
⑧ 滴入dab試劑盒中的h2o2濃縮液，視腦片的顏色適時以pbs稀釋停止反應，一般為1分鐘左右；
⑨ 將腦片按電生理標記時的位置，呈上下映象放置到玻片上，吸去多餘水分，然後讓其自然風乾，完全貼合在玻片表面；
10： 風乾後，浸入75%酒精3分鐘；
：換入95%酒精3分鐘；
12 ：無水酒精脫水3次，每次1分鐘；
13 ：二甲苯透明2次，每次5分鐘；
14 ：滴上少許用二甲苯溶解的樹脂，蓋上蓋玻片，風乾後製成永久封片。
（注意在通風廚下進行）
（二）尼氏染液
配製200ml0.5%焦油紫（cresyl violet）溶液，ph 3.6
① 配製溶液a：91.5ml雙蒸水加入1.1ml冰醋酸；
② 配製溶液b：7.4ml雙蒸水中加入0.2g醋酸鈉；
③ 將溶液a與溶液b迅速混合；
④ 混合液中加入1.0g焦油紫，並用100ml雙蒸水溶解；
⑤ 過濾後，混合液用冰醋酸調節ph值到3.6，用棕色瓶儲存。
● 染色步驟
① 腦片放入4%多聚甲醛中過夜，固定；
② 換入pbs中過夜；
③ 將腦片按電生理標記時的位置，呈上下映象放置到玻片上，吸去多餘水分，然後讓其自然收乾，完全貼合在玻片表面；
④ 浸入尼氏染液10-15分鐘；
⑤ 取出後，用pbs沖洗去殘液；
注：★ ⑥-⑩為永久封片製作步驟，同上10-14。
生物素測試劑盒操作流程
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高二生物必修三《植物生長素的發現》教學設計及反思
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