DNS法測定纖維素酶活實驗方法總結及優化方案

2021-10-21 13:56:09 字數 673 閱讀 2170

目前纖維素酶沒有統一的測定方法,諸多因素影響纖維素酶酶活測定大小的比較。選擇適宜的酶活測定條件,提高測定結果的準確性,可根據有關資料中採用的測定條件,以及通過控制變數法對酶活力測定中的主要影響因素進行研究。

目前實驗室採用測酶活方法:

1、葡萄糖標準曲線製作:

530nm比色。

2、酶活測定方法:

考慮到酶液中培養基成分會對吸光值造成一定的影響,所以空白管0還是採用先將酶高溫滅活的方法,後面保持實驗條件一致,顯色時間與標準曲線的顯色時間保持一致。

單位酶活的計算:

n:稀釋倍數;

k:曲線斜率;

t:反應時間,min;

1000:mg換算成ug.

以下是近期所做的實驗結果:

葡萄糖標準曲線

兩種產纖維素酶細菌不同測試結果

測定結果

實驗結論:從以上幾種對酶液的處理方法來看,183的酶活要比r2高,兩種菌都是以胞外酶為主。目前尚沒找到有關於加緩衝溶液並且超聲破碎的文獻,所得測量結果與前面三種方法均不符,這一步需另外探索。

根據《纖維素酶活力測定條件研究》(夏服寶等,《飼料工業》2005年第26卷第16期)和《影響纖維素酶活力測定的幾個因素》(劉妙蓮等,中國食品發酵工業研究所)這兩篇文獻,實驗室可先從底物濃度、溫度、dns用量、顯色時間以及對菌體的超聲破碎時間這幾方面進行探索,進而優化實驗方法。

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