實驗題目：測定生物樣品中的蛋白質（同步螢光法）
1.實驗原理：蛋白質是一類重要的生物大分子，它是構成生命體最重要的物質基礎之一。
蛋白質的定量測定是臨床檢驗中診斷疾病及檢查**效果的重要指標。因此，蛋白質定量測定在化學、生物、醫藥、食品等各相關學科中已經成為乙個非常熱門的研究課題。
血清白蛋白是動物和人體血漿中重要的載體蛋白，它能和許多種內源或外源化合物產生作用，承載著將藥物運輸到達靶點產生藥效和儲存藥物延長藥效等重要作用，對研究藥物的藥效和藥理及臨床用藥有重要意義。蛋白質測定較常用的經典方法有凱氏定氮法、lowry法、考馬斯亮藍法、紫外分光光度法b1等，其中，凱氏定氮法因其適用樣品廣泛，測試結果準確，是常用分析有機化合物含氮量的經典方法之一。近來又發展了一些新方法如螢光光度法、化學發光法和共振光散射法[等。
同步螢光光譜法自2023年被提出以來，由於其與常規螢光分析法相比具有靈敏度高、選擇性好、光譜簡化、譜帶窄化及可減小散射光影響等優點，已成功地應用於多組分的同時測定以及生物分子的研究中。
2.儀器與試劑：fp-6500螢光分光光度計(日本分光公司)；t-6紫外一可見分光光度計(北京普析通用儀器公司)；pb．10型酸度計(北京賽多利斯儀器系統公司)；bs．110s型電子天平(北京賽多利斯天平公司)；脫氧尿苷1．0×10。
3 mol／l水溶液；人血清白蛋白(hsa，華蘭生物工程公司)4．0×10。5 mol／l水溶液，在冰箱中儲存(1～4 oc)；ph 7．4的％s．hci緩衝溶液；考馬斯亮藍溶液(溶液中含0．0l％考馬斯亮藍g-250，4．7％乙醇，8．5％磷酸)；0．5 mol／l的nacl水溶液。所用試劑均為分析純，實驗用水均為二次去離子水。
3. 實驗方法：於10 ml比色管中依次加入：
ph 7．4的tris．hcl緩衝溶液2．0 ml，0．5 mol／l的naci溶液2．0 illl，一定體積的hsa標準溶液，1．0×10。mol／l的脫氧尿苷溶液o．2 ml，用水定容至刻度，搖勻，用1 cm石英吸收池，在△入=50 rnm時掃瞄體系的同步螢光光譜。
4.注意事項：1）加入順序的影響：
考察了各種不同的物質加入順序對體系同步螢光強度的影響。當加入順序為tris--hci--nacl--deoxyuridine時體系的同步螢光強度最高、且穩定性最好。
2）反應時間和穩定性：在上述實驗條件下，考察了反應時間對體系同步螢光強度的影響。結果表明，在室溫下，該反應在5 min內即可完成，且體系的同步螢光強度至少在5 h內基本不變。
3)線性範圍、回歸方程、檢出限：在最佳實驗條件下，以體系的同步螢光強度對hsa濃度繪製標準工作曲線，線性回歸方程為isf=13．60246+211．19154×107 c(hsa)(mol／l)，相關係數為r=0．9991。測定的濃度範圍在2．76～524.
4微克每毫公升之間。根據iupac的定義，對11份空白溶液進行平行測定，計算了方法的檢出限為0.11毫克每毫公升。
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