食品（金標特級生抽）中苯甲酸含量測量不確定度評定報告
報告編號：nt-bq-2010-02
編制日期： 年月日
批准日期： 年月日
濟寧耐特食品****品管部實驗室
食品（金標特級生抽）中苯甲酸含量測定
測量不確定度評定報告
一．概述
1．樣品編號：100771；環境條件：溫度20℃；相對濕度40%
2．檢測儀器裝置：
2.1 高效液相色譜儀waters e2695，裝置編號sb-05-082，定量重複性0.7%；
2.2分析天平xs105，裝置編號sb-05-087，精細量程0~41g，最小分度值0.00001g，0~50g示值誤差為±0.00001g；
2.3 a級刻度吸管，1ml，允差為±0.007ml；
2.4 a級容量瓶，100 ml，允差為±0.1ml；
2.5 a級容量瓶，50ml，允差為±0.05ml
3．檢測試劑：
3.1 苯甲酸標準品：購自中國藥品生物製品檢定所；
3.2乙酸銨（分析純）、色譜級甲醇、超純水。
4．檢測依據：gb/t5009.29-2003《食品中山梨酸、苯甲酸的測定》
5．檢測人員：相麗新
6．檢測時間：2023年12月02日
二、檢測原理
依據gb/t5009.29-2003，樣品經前處理後，進高效液相色譜儀，經反相色譜分離後，根據保留時間和峰面積進行定性和定量。
三、測量步驟
3.1苯甲酸標準使用液的配製
3.1.1標準貯備液
將苯甲酸標準品從冰箱中取出放置到室溫，準確稱取50.0mg，置於100ml容量瓶中，用色譜甲醇溶解並定容，搖勻，冷藏於冰箱，作為標準品貯備液。
3.1.2 10ug/ml苯甲酸標準使用液
將苯甲酸標準貯備液從冰箱中取出放置至室溫，準確吸取1.00ml，至50ml容量瓶中，用50%甲醇水溶液定容，混勻後備用。
3.2樣品前處理
移取1ml金標特級生抽醬油於去皮燒杯中準確稱量，先後加入超純水，2%氫氧化鈉溶液、10%硫酸銅溶液5ml，絮凝沉澱去除蛋白等雜質後，用超純水定容至50ml，搖勻，取適量樣品於10000r/min的條件下高速離心3min，上清液經0.45um濾膜過濾後，作為待檢測樣品，同時做空白對照。
3.3試樣測定
按waters高效液相色譜操作規程規定的程式開機平衡系統，待基線穩定後，取製備好的待測樣品液進樣分析，記錄色譜圖，用面積百分比法計算檢測結果。
4數學模型
試樣中苯甲酸含量計算公式如下：
x1=式中：x1---樣品中苯甲酸含量，單位為克每千克（g/kg)；
a---樣品液中苯甲酸峰面積；
as---標準使用液中苯甲酸峰面積；
cs---標準使用液濃度，單位微克每毫公升（μg/ml)
v---樣品最終定容體積，單位為毫公升（ml）
m---樣品質量，單位為克（g）
5測量不定度**
5.1稱採樣品質量產生的不確定度um；
5.2試樣前處理定容時引起的不確定度uv；
5.3標準溶液配製引起的不確定度ucs；
5.3.1 容量瓶定容引起的不確定度
5.3.2 分度吸管移液引起的不確定度
5.4平行試驗重複性產生的不確定度u0；
5.5 測量時由waters高效液相色譜儀產生的不確定度u1；
6不確定度傳播律
採用相對標準不確定度合成公式計算：
7 測量結果及標準差
對配製好的10ug/ml的苯甲酸標準品進行了六次重複測量，其測量結果及標準偏差如表7-1：
表7-1 苯甲酸標準品峰面積六次重複測量結果
在重複性條件下，對金標特級生抽樣品進行八次測量，八次測量資料如表7-2：
表7-2 八次平行測量結果
8不確定度分量的量化
8.1稱採樣品質量產生的相對標準不確定度umr
用十萬分之一天平稱量樣品，校準證書給出天平的重複性誤差為0.0000 g，在50g量程範圍內，天平的示值誤差為±0.00001g，兩次稱量獲得結果，按均勻分布（矩形分布）考慮，
則 um==5.7×10-6g
umr==1.2×10-7
8.2樣品定容引起的相對標準不確定度uvr
體積的標準測量不確定度分量主要有三部分構成；其一，容器體積的不確定度；其二，充滿液體至容器刻度的估讀誤差；其三是容器和溶液溫度與校正溫度不同引起的不確定度。
本次試驗樣品定量總體積為50ml，採用50mla級容量瓶定容，允許差為±0.05ml, 按照均勻分布換算成標準偏差為0.05/=0.
029 m1；液體充滿至容量瓶刻度的不確定度估讀誤差為0.005×50=0.25ml, 按照均勻分布計算0.
25/=0.14ml；容量瓶和溶液溫度與校正時的溫度不同引起的體積不確定度，本次試驗中的環境溫度與校準時基本相同，此因素引起的不確定度可忽略不計。以上兩項合成得出：
uv==0.14ml
uvr==0.0028
8.3標準使用液cs的相對標準不確定度分量ucsr
10ug/ml苯甲酸標準使用液是由標準品稱量制得標準貯備液後經過一步稀釋50倍得到的。不確定度**包括由稱量引起的不確定度，定容100ml引起的不確定度，1ml移液管移液引起的不確定度，定容50ml引起的不確定度。
8.3.1由稱量標品引起的相對標準不確定度u1mr
由稱量標品引起的相對標準不確定度計算方法同6.1，
則u1mr= umr=1.2×10-7
8.3.2由定容引起的相對標準不確定度u1vr
此相對標準不確定度分量主要有三部分構成；其一，容器體積的不確定度；其二，充滿液體至容器刻度的估讀誤差；其三是容器和溶液溫度與校正溫度不同引起的不確定度。
本次試驗標品定量總體積為100ml，採用100mla級容量瓶定容，允許差為±0.1ml, 按照均勻分布換算成標準偏差為0.1/=0.
058 m1；液體充滿至容量瓶刻度的不確定度估讀誤差為0.005×100=0.5, 按照均勻分布計算0.
5/=0.29ml；容量瓶和溶液溫度與校正時的溫度不同引起的體積不確定度，本次試驗中的環境溫度與校準時相同，此因素引起的不確定度可忽略不計。以上兩項合成得出：
u1v=0.30ml
u 1vr= =0.003
8.3.3由定容引起的相對標準不確定度u2vr
此相對標準不確定度的計算同6.2，則
u2v= uv=0.14ml
u2vr==0.0028
8.3.4 1m1分度吸管相對標準不確定度u3vr的分析
用1m1有分度吸管量取溶液，其不確定度主要包括三個部分：第一，吸管體積的不確定度，給定容器容量允差為±0.007ml；按照均勻分布換算成標準偏差為0.
007/=0.004ml；第二，充滿液體至吸管刻度的估讀誤差，估計為±0.005×v1，轉化成標準偏差，按均勻分布計算為0.
005 ×v1/=0.005/=0.003ml；第三，分度吸管和溶液溫度與校正時的溫度不同引起的體積膨脹不確定度，本次試驗中的環境溫度與校準時相同，此因素引起的不確定度可忽略不計以上兩項合成得出：
u3v=0.005ml
u3vr=0.005
將以上4項不確定度分量代入公式，得到列表如下：
標淮溶液配製引起的標準不確定度
8.4平行試驗重複性引起的相對標準不確定度u0r的計算
由表7-2可知，金標特級生抽樣品中，樣品八次重複測量的標準偏差為0.004g/kg，樣品苯甲酸含量測量平均值為0.51 g/kg，
則其測量標準不確定度為u0==0.0014 g/kg，
相對標準不確定度為 u0r1==0.0028。
8.5由waters高效液相色譜儀產生的相對標準不確定度u1r
由校準證書上可知，waters高效液相色譜儀的定量重複性為0.7%，則其相對擴充套件不確定度為0.7%，按均勻分布計算，則液相色譜儀的相對標準不確定度為u1r=0.
7%/=0.0040。
9相對標準不確定度分量一覽表
由可得：
u r =
==0.0085
10合成標準不確定度
由上計算可知，金標特級生抽樣品的苯甲酸含量檢測的合成相對標準不確定度為0.0085，則其合成不確定度為
u=0.0085×0.51=0.0043g/kg
11擴充套件不確定度分析
取包含因子k=2（近似95%置信概率），則
u=0.0043×2=0.0086g/kg
報告的擴充套件不確定度是根據合成標準不確定度乘以包含因子k=2得到，它達到的置信概率近似為95%，按近似於正態分佈處理。
12 結果表徵
x1=0.51 g/kg；u=0.0086g/kg；k=2。
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