江西省高安市人民醫院檢驗科任子翔鄔根香
迄今，血清(血漿)中酶測定是通過它們催化的反應速度測量的，以酶催化(活性)濃度表示。這與以免疫實驗將酶作為蛋白質測定比較，其優點是快速、敏感、特異和低消耗。但是，酶催化濃度測定結果是相對的，它依從於測定原理、單位定義和相應的測定條件。
這些條件中，主要是：(1)底物、輔因子、活化劑、變構劑的種類和濃度。(2)在偶聯酶促反應中，指示酶和輔助酶的種類和濃度。
(3)反應混合液的ph、緩衝劑種類和離子強度。(4)其它影響酶催化反應的因素，如抑制劑、雜酶等。這些影響酶促反應速度的諸因素中任何一項發生變動，都會導致測定結果不同程度的變化。
正是由於這些原因，使酶測定的質量控制遠遠落後於其它生化專案。
為了提高酶測定實驗的準確性和精密度，為了使酶測定結果在方法間，實驗室間有可比性，消除參考範圍的多重混亂，以利於臨床應用，開展酶測定的標準化工作勢在必行。標準化乃是一項技術措施。近20年來，國內外主要從二個方面開展了酶測定的標準化活動：
一是提出和使用推薦方法 (recommended method)；二是使用參考方法(reference method)定值的酶參考物去校正常規方法。
在國際上，國際臨床化學聯合會(ifcc)自2023年首先發表了測定人血清(血漿)中酶催化濃度方法總則。2023年提出了天門冬氨酸氨基轉移酶(ast)和丙氨酸氨基轉移酶(alt)的推薦方法。隨後，γ-谷氨醯基轉換酶(ggt)、鹼性磷酸酶(alp)、肌酸激酶(ck)、乳酸脫氫酶(ldh)的推薦方法相繼推出。
2023年10月又提出了α-澱粉酶的推薦法(徵求意見稿)。某些國家和地區也提出各自的多種酶測定推薦方法，與ifcc的相應方法比較都或多或少地存在一些差異。通過推薦方法在一定範圍內的實施，期望使有關酶的測定方法規範化、一致化，使各實驗室間對同一種酶的測定結果有可比性、互換性或稱可移植性(commutability)，並獲得酶測定的最大準確度和精密度。
實踐已證明這項措施的推行已取得相當大的成功。在這項活動中使很多實驗室發現了他們原來方法的缺點，設法消除偏差，提高了酶測定實驗的質量；一些準確性差的方法被阻止或被淘汰；促使一些試劑盒生產廠家在選擇測定原理和試劑配方等方面向推薦方法靠攏。為了同樣目的，我國檢驗學會也於2023年8月討論通過，2023年3月發表了《中華醫學會檢驗學會酶催化濃度測定的推薦方法》第一部分《測定人血清(血漿)中酶催化濃度方法總則》。
在《總則》中提出所推薦方法應考慮的五點基本原則和建立推薦方法一般應經過的三個步驟。2023年12月通過了alt、ggt和ck三項推薦方法(草案)；2023年12月通過了ldh、alp、ast三項推薦方法(草案)。毋庸置疑，這些推薦方法在我國的實施必將推動我國臨床酶測定標準化的程序，但只能是個良好開端。
國際上推行推薦方法儘管已取得不可忽視的成績，但經過近20年的努力，欲使一種酶的測定廣泛、普遍採用推薦的單一方法的目標並未達到。其原因是多方面的，包括學術觀點的不同，實驗研究結果的差異，跟蹤技術進步的速度快慢及各實驗室物質條件的限制等。這些問題不可避免地也會在我國實施推薦方法過程中有這樣那樣的表現，我們應當未雨綢繆，使方法推薦活動求實有效，為了達到預期目的，一方面要繼續完善已提出的推薦方法，再提出其它(如α-澱粉酶)推薦方法；二要創造條件，包括實驗研究用的原料試劑和檢測儀器，使已提出的推薦方法在臨床檢驗「四要素」——儀器、試劑、方法學和人，均優秀的實驗室扎根，隨時可以用推薦方法去校正常規方法，給酶參考物定值；三並不期望也不可能將這些推薦方法立即廣泛地用於服務性常規實驗室，那麼就存在乙個如何使常規酶測定方法向推薦方法靠擾，使同一項酶的測定在室內、室間測定結果取得最大準確性和重複性的問題。
目前酶測定大都採用連續監測法、自動分析和使用商品試製盒，在儀器規格效能尚不統一的情況下，除從室內質控和室間質評的基礎工作出發，加強儀器效能檢測校正 (特別是波長和溫度控制的準確性和穩定性等)外，應加強對商品試劑盒的質量檢定。促進試劑盒生產廠家盡可能地按推薦方法提出的原理、試劑配方生產，逐步使進入常規實驗室的試劑盒先統
一、規範起來。衛生部已公布alt、ast、酸性磷酸酶(acp)、alp、ggt、ldh、ck、α-羥基丁酸脫氫酶(α-hbdh)、膽鹼酯酶(che)、脂肪酶(lps)、肌酸激酶-同工酶mb(ck-mb)、5′-核苷酸酶(5′-na)、丙酮酸激酶(pk)、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(g-6-pd)、澱粉酶(α-amylase)和ldh1共16項試劑質量檢定標準。關於準確性的檢定標準，後5項「暫缺」，而前11個酶的不準確性都定為≤10%，檢定方法都「暫定與定值血清靶值」比較。
其中，ggt試劑盒接受檢定的必須採用γ-谷氨醯-3-羧基-4-硝基苯胺(glucana)為底物，這就可以使γ-谷氨醯-對-硝基苯胺為底物的試劑盒被淘汰。這與ifcc和我國的ggt推薦法相一致。現在已知後者因溶解度限制，使用濃度只能達到4 mmol/l，相當於其km(0.
98 mmol/l)的4.1倍，測定準確性低(?%)，而推薦方法中glucana溶解度好，採用6 mmol/l濃度，相當於km(0.
65 mmol/l)的9.23倍，使測定準確性達95%以上。另如，alp試劑盒接受檢定的產品必須使用2-氨基-2-甲基-1-丙醇(2a2m1p)為緩衝劑，而不接受以二乙醇胺(dea)或碳酸鹽為緩衝劑的產品，這也將有利於提高alp測定結果的室間可比性，提高測定的準確性。
這與ifcc的推薦方法一致，但與2023年日本jscc和我國2023年提出的推薦方法不同，後二者採用的緩衝液是2-乙基氨基乙醇(eae)。eae優於2a2m1p已有論述。在ldh一項中，檢定標準規定的反應方向與推薦法一樣是l→p，這就可以避免l→p和p→l二種試劑盒並存造成的ldh測定結果的混亂。
當然，需討論的問題還有很多，在此不一一贅述。總之，「與定值血清靶值」比較將顯示出試劑盒質量的優劣。但問題是：
(1)「定值血清」是什麼血清?是人的混合血清還是動物血清或是蛋白含量和離子成份與人血清相似的「人造血清」?(2)向血清中加入的酶是人血清或組織**的酶，還是動物組織**的酶，還是基因工程細胞的酶?
(3)給血清中各種酶定值採用什麼方法?由什麼實驗室參與定值?「靶值」如何確定等等。
對這些問題必須有科學明確的答案，才能使準確性的檢定科學有效。
ifcc已於2023年提出了乙個關於《酶測定參考物》的檔案(草案)，按要求應當由參考實驗室採用參考方法給酶定值。現已有歐洲(cbr)和美國(nbs)的酶校正物，它們都是在嚴格指定的測定程式中，提供乙個有確切催化濃度的測定靶值。cbr的酶參考物定值專案包括alp、ggt、alt、ck；nbs的srm-909定值專案包括acp、alp、alt、ast、ck、ldh、ggt。
多項研究使用這些酶校正物成功地以ifcc推薦方法校正了各自地區性的推薦方法，用嚴謹科學的實驗研究證明了二種方法間的可移值性。同樣，在確定常規方法與推薦法間是否有可移值性的過程，需要理論和實驗研究的結合；待接受酶參考物校正的常規方法或待檢定質量的商品試劑盒，在分析原理上要與定值用的參考方法相同；第二要用實驗證明二種方法對酶校正物和一定數目的病人標本的分析應答相同。其中包括對目標酶有同樣或非常接近的特異性；對存在的同工酶或同工酶亞型有相似的選擇性；對內源性酶促或非酶促「旁路反應」(「side reaction」)有相似的不敏感性。
應指出，參考方法的效能特點，如精密度和無偏差等，並不會因為其定值的校正物使用而轉移到常規方法身上，校正後的結果質量反映的仍是常規方法自身的效能特點。具有可移植性的二個方法間應有乙個恆定的數學相關，並應依此將被校正的方法參考值做相應的轉換。多年來，國內外的實驗研究都證明，必須非常恰當、嚴格的選擇校正物和測定方法，才能科學有效地用一種方法去校正另一種方法。
否則，即使有了一種用參考方法定值、效能穩定的酶校正物，而不問青紅皂白，不做深入細緻的實驗或調查，一律要求在常規實驗室中，將各種常規方法的測定結果硬性「拉到」校正物定值上，把酶校正物簡單地當作一般代謝物的已知純度的標準物那樣使用，這不僅不會提高酶實驗質量，無助於酶測定的標準化，相反會造成測定結果和臨床應用的混亂。
酶測定的標準化是一項艱鉅、科學性強的任務，需從理論、實驗和組織上做深入、細緻、持久的工作。當前，國內尚無參考實驗室，為了開展這項工作，在此建議：(1)選擇幾個「四要素」均屬優秀的實驗室，作為國內酶測定標準化的帶頭者，在制訂和推行推薦方法，研製酶參考物質，給酶參考物定值等活動中發揮作用，同時創造條件早日建立國家級酶學參考實驗室。
(2)通過嚴格認真的法定試劑質檢工作，促進商品試劑盒質量提高，規格統一。(3)重視相關企業對推進酶測定標準化的作用，開發和引進效能穩定、適合國情的酶參考物。(4)在酶測定標準化程序中，更要強調加強各級技術人員臨床酶學基礎理論和實驗技術的培訓。
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