總rna的提取（trizol法提取）
在收集到生物材料之後，最好能即刻進行rna製備工作。若需暫時儲存，則應以液氮將生物材料急速冷凍後，儲存於-80℃冷凍櫃。在製備rna時，將儲存於冷凍櫃的材料取出，立即以加入液氮研磨的方式打破細胞，不可以先行解凍，以避免rnase的作用。
1. 提取組織rna時，每50～100mg組織用1ml trizol試劑對組織進行裂解；提取細胞rna時，先離心沉澱細胞，每5-10 ╳106個細胞加1ml trizol後，反覆用槍吹打或劇烈振盪以裂解細胞；
2. 將上述組織或細胞的trizol裂解液轉入ep管中,在室溫15~30c下放置5分鐘；
3. 在上述ep管中，按照每1ml trizol加0.2ml氯仿的量加入氯仿，蓋上ep管蓋子，在手中用力**15秒，在室溫下（15℃～30℃）放置2～3分鐘後，12000g（2℃～8℃）離心15分鐘；
4. 取上層水相置於新ep管中,按照每1ml trizol加0.5ml異丙醇的量加入異丙醇，在室溫下（15℃～30℃）放置10分鐘,12000g（2℃～8℃）離心10分鐘；
5. 棄上清，按照每1ml trizol加1ml 75%乙醇進行洗滌，渦旋混合，7500g（2℃～8℃）離心5分鐘，棄上清；
6. 讓沉澱的rna在室溫下自然乾燥；
7. 用rnase-free water 溶解rna沉澱
pcr實驗室常用dna聚合酶有三種：takara taqtm，takara extaqtm和pyrobesttm dna polymerase。takara taqtm是一般的dna聚合酶，保真性較差，但價錢便宜，一般用於基因表達的檢測等。
takara extaqtm是具有proof reading活性的耐熱性dna聚合酶，具有一定的保真性，而且其擴增得到的pcr產物3』端附有乙個「a」鹼基，如果希望直接將產物轉殖到t-vector可以用此酶。pyrobesttm dna polymerase也是具有proof reading活性的耐熱性dna聚合酶，其特點是保真性極高，擴增得到的pcr產物為平滑末端。如果進行基因的擴增請使用此酶。
1. 按下列組成在pcr反應管中調製反應液：
takara taqtm或takara extaqtm的配方
pyrobesttm dna polymerase的配方
1 反應總體積根據實際情況進行調控，可以做20~50l以節約試劑；
2 將上表各成分加入到0.2ml或0.5ml滅菌的pcr薄壁管中；
3 如果不用pcr儀的加熱蓋，在反應混合液的上層加30 ~50l 的礦物油防止樣品在pcr的過程中蒸發；
2. 按以下程式進行pcr擴增。
pcr反應條件視模板、引物等的結構條件不同而各異，在實際操作中需根據具體的情況以及pcr結果而進行優化。
反應結束後，抽取擴增樣品5l，用瓊脂糖凝膠電泳分析擴增結果，用dna marker判斷擴增片段的大小或冷凍儲存，以備以後分析使用。
rt-pcr
protocol: takara one step rna pcr kit (amv)
1. 按下列組成在pcr反應管中調製反應液
1. 反應總體積根據實際情況進行調控，可以做20~50l以節約試劑；
2. 將上表各成分加入到0.2ml或0.5ml滅菌的pcr薄壁管中；
3. 如果不用pcr儀的加熱蓋，在反應混合液的上層加30 ~50l 的礦物油防止樣品在pcr的過程中蒸發；
2． 按以下條件進行反應
反應結束後，抽取擴增樣品5l，用瓊脂糖凝膠電泳分析擴增結果，用dna marker判斷擴增片段的大小或冷凍儲存，以備以後分析使用。
瓊脂糖核酸電泳
1. 用蒸餾水將制膠模具和梳子沖洗乾淨，放在制膠平板上，封閉模具邊緣，架好梳子；
2. 根據欲分離dn**段大小用凝膠緩衝液配製適宜濃度的瓊脂糖凝膠：準確稱量瓊脂糖乾粉，加入到配膠用的三角燒瓶內，定量加入電泳緩衝液（一般20~30 ml）；
3. 放入到微波爐內加熱熔化。冷卻片刻，加入一滴螢光染料，輕輕旋轉以充分混勻凝膠溶液，倒入電泳槽中，待其凝固；
4. 室溫下30~45分鐘後凝膠完全凝結，小心拔出梳子，將凝膠安放在電泳槽內；
5. 向電泳槽中倒入電泳緩衝液，其量以沒過膠面1mm為宜，如樣品孔內有氣泡，應設法除去；
6. 在dna樣品中加入10×體積的載樣緩衝液（loading buffer），混勻後，用槍將樣品混合液緩慢加入被浸沒的凝膠加樣孔內；
7. 接通電源，紅色為正極，黑色為負極，切記dna樣品由負極往正極泳動 (靠近加樣孔的一端為負)。一般60～100v電壓，電泳20～40min即可；
8. 根據指示劑泳動的位置，判斷是否終止電泳；
9. 電泳完畢，關上電源，在凝膠成像儀上觀察電泳帶及其位置，並與核酸分子量標準marker比較被擴增產物的大小。
膠**純化dna
1. 瓊脂糖電泳，將特異電泳帶用刀切下放入到ep管中，稱瓊脂糖帶的重量；
2. 按照每100mg加400l的量加入binding buffer，放入到ep管振盪器中，45℃～55℃溫育振盪，直到所有的瓊脂糖都溶解（大概要5分鐘）；
3. 取出純化柱，將上述溶解液轉移至柱中，室溫下放置2分鐘，8,000rpm 離心1分鐘，棄ep管中的液體，將純化柱放回ep管中；
4. 加500l的wash buffer至柱中，8,000rpm 離心1分鐘。棄管中的溶液；
5. 重複操作4步的操作1次，最後將純化柱放入ep管中10,000rpm離心30秒，除去痕量的wash buffer；
6. 將純化柱放入乙個新的ep管。加30~40l h2o或者elution buffer至純化柱膜的**，在37℃或50℃下放置2分鐘，10,000rpm離心1分鐘洗脫dna，將ep管中的dna溶液放在-20℃儲存。
7. 注：若想要不電泳而直接純化dna溶液，只需要在第2步中按100l液量加400l的binding buffer,其餘的步驟不變。
大腸桿菌質粒dna的提取（鹼裂解法）
此方法適用於小量質粒dna的提取提取的質粒dna可直接用於酶切pcr擴增。
1. 取1.5ml細菌培養物於ep管中，4000rpm離心1分鐘，棄上清液，使細菌沉澱盡量乾燥；
2. 將細菌沉澱重懸於用冰預冷的100 l溶液i (50 mmol/l葡萄糖，10 mmol/l edta ph 8.0，25 mmol/l tris-hcl ph 8.
0) 中，劇烈振盪；
3. 加入200 l新配製的溶液ii(0.2 mol/l naoh，1％sds（m/v）)，蓋緊ep管口，快速顛倒離心管5次，以混合混合物，確保離心管的整個內表面與溶液ii接觸，不要渦旋，置於冰浴中；
4. 加入150 l預冷溶液iii(每100 ml 的溶液iii中含60 ml 5 mol/l 乙酸鉀，11.5 ml冰乙酸，28.
5 ml h2o)，蓋緊ep管口，反覆顛倒數次，使溶液iii在粘稠的細菌裂解物中分散均勻，之後將管置於冰上3~5分鐘；
5. 在最大轉速下離心5min，取上清液於另一新ep管；
6. 用兩倍體積的乙醇室溫沉澱雙鏈dna，振盪混合於室溫放置2分鐘，最大轉速離心5分鐘；
7. 小心吸去上清液，將離心管倒置於濾紙上，以使所有液體都流出，在將附於管壁的液滴除盡；
8. 加1ml 70％乙醇洗滌沉澱，振盪混合，用12,000g離心2分鐘，棄上清，將開口的ep管置於室溫使乙醇揮發，直至ep管中內沒有可見的液體存在（5～10分鐘），用適量的ddh2o溶解；
9. 用0.5l的rnase 37℃溫育5~10分鐘；
分析實驗室用水規格和試驗方法
1.範圍 本標準規定了分析試驗室用水的級別 規格 取樣及貯存 試驗方法和試驗報告。本標準適用於化學分析和無機衡量分析等試驗用水。可根據實際工作需要選用不同級別的水。2.規範引用檔案 下面檔案中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款。凡是註明日期的引用檔案，其隨後所用的修改單 不包括勘誤的內容 或修...
實驗室常用技術引數
一 核酸及蛋白質常用資料 1 核苷三磷酸的物理常數 2 常用核酸的長度與分子量 3 常用核酸蛋白換算資料 1 重量換算 1 g 10 6g 1pg 10 12g 1ng 10 9g 1fg 10 15g 2 分光光度換算 1a260雙鏈dna 50 g ml 1a260單鏈dna 30 g ml 1...
車間空氣細菌含量檢驗方法實驗室作業
章節號 1 實驗室作業指導書 標題 車間空氣細菌含量檢驗方法實驗室作業指導書版本 換頁 a1 0共1頁第1頁 1.試劑和材料 普通營養瓊脂，按gb4789.28中的3.7條配製。1.2培養皿等。2.取樣 布點 面積小於30平方公尺的車間，設一對角線，上取3點，即中心1點，兩端在距牆1公尺處各取1點 ...