實驗室常用技術引數

2021-03-04 09:35:58 字數 2506 閱讀 5105

一、核酸及蛋白質常用資料

1.核苷三磷酸的物理常數

2.常用核酸的長度與分子量

3.常用核酸蛋白換算資料

(1)重量換算

1μg=10-6g      1pg=10-12g

1ng=10-9g      1fg=10-15g

(2)分光光度換算:

1a260雙鏈dna=50μg/ml

1a260單鏈dna=30μg/ml

1a260單鏈rna=40μg/ml

(3)dna摩爾換算:

1μg 100bp dna=1.52pmol=3.0**mol末端

1μg pbr322 dna=0.36pmol

1pmol 1000bp dna=0.66μg

1pmol pbr322=2.8μg

1kb雙鏈dna(鈉鹽)=6.6×105道爾頓

1kb單鏈dna(鈉鹽)=3.3×105道爾頓

1kb單鏈rna(鈉鹽)=3.4×105道爾頓

(4)蛋白摩爾換算:

100pmol分子量100,000蛋白質=10μg

100pmol分子量50,000蛋白質=5μg

100pmol分子量10,000蛋白質=1μg

氨基酸的平均分子量=126.7道爾頓

(5)蛋白質/dna換算:

1kb dna=333 個氨基酸編碼容量=3.7×104mw蛋白質

10,000mw蛋白質=270bp dna

30,000mw蛋白質=810bp dna

50,000mw蛋白質=1.35kb

100,000mw蛋白質=2.7kb dna

4.常用蛋白質分子量標準參照物

5.常用dna分子量標準參照物

續上表二、常用緩衝液

1.分子轉殖常用緩衝液

2.磷酸緩衝液

(1)25℃下0.1mol/l磷酸鉀緩衝液的配製※

(2)25℃下0.1mol/l磷酸鈉緩衝液的配製※

※:用蒸餾水將混合的兩種1mol/l貯存液稀釋至1000ml,根據henderson-hasselbalch方程計算其ph值:

ph=pk』+1g([質子受體]/[質子供體])

在此,pk』=6.86(25℃)。

3.電泳緩衝液

測序凝膠加樣緩衝液

98%去離子甲醯胺

10mol/l edta(ph8.0)

0.025%二甲苯青ff

0.025%溴酚藍

甲醯胺:許多批號的試劑級甲醯胺,其純度符合使用要求,無須再進行處理。不過,一旦略呈黃色,則應用在磁力攪拌器上將甲醯胺與dowex xg8混合床樹脂共同攪拌1小時進行去離子處理,並用whatman 1號濾紙過濾2次,去離子甲醯胺分裝成小份,充氮存於-70℃。

常用的電泳緩衝液

說明:①tbe溶液長時間存放後會形成沉澱物,為避免這一問題,可在室溫下用玻璃瓶儲存5×溶液,出現沉澱後則予以廢棄。

以片都以1×tbe作為使用液(即1:5稀釋濃貯液)進行瓊脂糖凝膠電泳。但0.

5×的使用液已具備足夠的緩衝容量。目前幾乎所有的瓊脂糖膠電泳都以1:10稀釋的貯存液作為使用液。

進行聚丙烯醯胺凝膠垂直槽的緩衝液槽較小, 故通過緩衝液的電流量通常較大,需要使用1×tbe以提供足夠的緩衝容量。

②鹼性電泳緩衝液應現用現配。

③tris-甘氨酸緩衝液用sds聚丙烯醯胺凝膠電泳。

2×sds凝膠加樣緩衝液:

100mmol/l tris·hcl(6.8)

200mmol/l二硫蘇糖醇(dtt)

4%sds(電泳級)

0.2%溴酚藍

20%甘油

不含dtt的2×sds凝膠加樣緩衝液可儲存於室溫,應在臨用前取1mol/l貯存液現加於上述緩衝液中。

4.凝膠加樣緩衝液

使用以上凝膠加樣緩衝液的目的有三:增大樣品密度;以確保dna均勻進入樣品孔內;使樣品呈現顏色,從而使加樣操作更為便利,含有在電塊中能以可預知速率向陽極泳動的染料。溴酚藍在瓊脂糖中移動的速率約為二甲苯青ff的2.

2倍,而與瓊脂糖濃度無關。以0.5×tbf作電泳液時,溴酚藍在瓊脂糖中的泳動速率約與長300bp的雙鏈線狀dna相同,而二甲苯青ff的泳動則與長4kb的雙鏈線狀dna相同。

在瓊脂糖濃度為0.5%~1.4%的範圍內,這些對應關係受凝膠濃度變化的影響並不顯著。

選用哪一種加樣染料純屬個人喜惡。但是,對於鹼性凝膠應當使用溴甲酚綠作為示蹤染料,因為在鹼性ph條件下其顯色較溴酚更藍為鮮明。

5.各種ph值的tris緩衝液的配製

某一特定ph值的0.05mol/l tris緩衝液的配製:將50ml 0.

1mol/l tris鹼溶液與上表所示相應體積(單位:ml)的0.1ml/l hcl混合,加水將體積調至100ml

(2)溫度對50mmol/l tris·hcl液ph值的影響

(6)常用緩衝液的pka值

a:三羥甲基氨基甲烷;b:n-2-羥乙基哌嗪-n』-2-乙磷酸;c:3-(n-嗎啉代)丙磺酸;d:n,n』-雙(2-乙磺酸)哌嗪;e:2-(n-嗎啉代)乙磺酸。

7.溫度對常用緩衝液ph的影響

三、常用酶的配製

冷庫技術引數

基本資訊 1.1 尺寸 10.5m 16.5m 5.5m 內尺 1.2 機組 4臺12匹獨立機組,製冷劑r404a 冷風機4臺 每台4個風扇 每台風扇0.55kw 1.3 控制系統 乙個控制系統控制4臺機組,包括庫內燈 空氣風幕。1.4 聯動裝置 大門與小門輸出開關訊號,作為聯動訊號 1.5 庫溫要...

紙箱技術引數

楞型結構 外箱使用三瓦楞結構,內箱使用雙瓦楞結構或三瓦楞結構。雙瓦楞紙板可使用aa,ab,ac,cc 楞型製作,三瓦楞紙板不規定使用楞型和楞型組合 規格表1為幾種常用紙箱的規格。要求.粘合劑 瓦楞紙板應使用無異味 無腐蝕性和無有害物質的澱粉粘合劑或具有等同效果的其他粘合劑。紙板和紙箱外觀技術要求.印...

電纜技術引數

vv vlv zr vv zr vlv 0.6 1kvpvc絕緣pvc護套阻燃或非阻燃電力電纜 護套電纜近電纜近似重量 導體標稱直徑 絕緣厚度 厚度似外徑 銅mm21 1.51 2.51 41 61 101 161 251 351 501 701 951 1201 1501 1851 2401 30...