科學問題：
實驗目的：
h1299細胞釋放的vocs是否可以介導小鼠巨噬細胞raw p3k內nf-κb訊號通路的活化？
實驗原理：
raw p3k細胞內nf-κb基因的5』 端啟動子下游轉染進乙個螢光素酶（luciferase）基因，當raw p3k細胞發生炎症轉換時，nf-κb基因會活化並表達nf-κb蛋白，同時螢光素酶報告基因表達產生螢光素酶，以螢光素（luciferin）為底物來檢測螢光素酶的活性，從而檢測nf-κb基因的表達。其中，螢光素酶是一種分子量約為61 kd的蛋白，在atp、鎂離子和氧氣存在的條件下，可以催化螢光素氧化成氧化螢光素（oxyluciferin），螢光素氧化過程中，會發出生物螢光，可通過化學發光儀或液閃測定儀進行測定。
圖1.螢光素酶的檢測原理圖
實驗設計：
以密封的六孔板培養細胞，保證vocs的**。實驗組為3個孔的h1299細胞，三個孔的raw p3k小鼠巨噬細胞，陰性對照為6個孔的raw p3k細胞（密閉處理），陽性對照為lps（細菌脂多醣）刺激的raw p3k細胞（正常培養）。檢測細胞內螢光素酶基因的表達量，從而衡量nf-κb基因的表達。
試劑/耗材：
h1299細胞、raw p3k細胞、六孔板、dmem培養基、g418（篩選含目的基因的raw p3k細胞）、lps、螢光素酶報告基因檢測試劑盒、化學發光儀等。
實驗步驟（依據螢光素酶報告基因檢測試劑盒進行）：
1. 實驗組將h1299與raw p3k細胞培養在一塊6孔板中，陰性對照組採用6個孔的raw p3k細胞，陽性對照為lps刺激的raw p3k細胞。
2. 分別收集每個孔的細胞，並採用報告基因細胞裂解液裂解細胞，充**解後，10,000-15,000 × g離心3-5 min，取上清用於測定。
3. 每個樣品測定時，採樣品20-100 μl（如果樣品量足夠，**入100 μl；如果樣品量不足可以適當減少用量，但同批樣品的使用量宜保持一致）。
4. 加入100 μl螢光素酶檢測試劑，用槍打勻或用其它適當方式混勻後測定rlu(relative light unit)。以報告基因細胞裂解液為空白對照。
5. 統計分析。
預期結果：
實驗組和陽性對照組raw p3k細胞螢光素酶基因的表達量顯著高於陰性對照組。
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