培養基化藥1005 100150136 吳郡
一．配製原則
（1）目的明確：在設計培養基前要明確所培養菌種；所獲取的產物；用作實驗室研究還是大生產；作一般研究還是做精密的生理、生化或遺傳學研究；用作種子培養基還是發酵培養基；是生產含氮量低的發酵產物還是生產含氮量高的產物。根據不同的目的運用不同的知識。
（2）營養協調：對微生物細胞組成元素的調查或分析，是設計培養基時的重要參考依據，微生物細胞內各種成分間有一較穩定的比例。因此,在大多數為化能異養微生物配製的培養基中，除水分外，碳源的含量最高，其後依次是氮源、大量元素和生長因子。
他們間大體上存在著10倍序列的遞減趨勢。真菌需要碳氮比較高，細菌尤其是動物病原菌需碳氮比較低。（3)理化適宜：
理化適宜是指培養基的ph、滲透壓、水活度和氧化還原電勢等物理化學條件較為適宜。（4）經濟節約在生產實踐中應做到:①以粗代精②以"野"代"家"③以廢代好④以簡代繁⑤以氮代朊⑥以纖代糖⑦以烴代糧⑧以"國代進"。
二．培養基的作用
培養基是供微生物、植物和動物組織生長和維持用的人工配製的養料。
三．分類：
（一）按對培養基成分的了解分類
①天然培養基:指一類利用動、植物或微生物體包括其提取物製成的培養基。如牛肉膏蛋白腖培養基、麥芽汁培養基等。
②組合培養基:又稱合成培養基或綜合培養基，是一類按微生物的營養要求精確設計後用多種高純化學試劑配製成的培養基。
③半組合培養基:又稱半合成培養基指一類主要以化學試劑配製，同時還加有某種或某些天然成分的培養基。例如，馬鈴薯苷糖培養基。
（二）按培養基外觀的物理狀態作分類
①液體培養基:各營養成分按一定比例配製而成的水溶液或液體狀態的培養基稱為液體培養基。工業上絕大多數發酵都採用液體培養基。
實驗室中微生物的生理、代謝研究和獲取大量菌體也常用液體培養基。
②固體培養基:一般是指液體培養基中加入一定量的凝固劑配製而成的固體狀態的培養基。包括固化培養基，非可逆性培養基天然固態培養基，濾膜。在發酵工業中常用固體培養基進行固體發酵。
③半固體培養基:半固體培養基是指在液體培養基中加入少量的凝固劑而配成的半固體狀態培養基。
④脫水培養基:又稱脫水商品培養基或預製乾燥培養基，指含有除水以外的一切營養成分的商品培養基，使用時只要加入適量水分並加以滅菌、分裝即可，是一類既有成分精確又有使用方便等優點的現代化培養基。
（三）按培養基對微生物的功能分類
①選擇培養基：類根據某微生物的特殊營養要求或其對某化學、物理因素抗性的原理而設計的培養基，具有使混合菌樣中的劣勢菌變成優勢菌的功能，廣泛用於菌種篩選等領域。
②鑑別培養基:一類在成分中加有能與目的菌的無色代謝產物發生顯色反應的指示劑，從而達到只需用肉眼辨別顏色就能方便地從近似菌落中找出目的菌菌落的培養基。最常見的鑑別性培養基是伊紅美藍乳糖培養基。
四．常見配方
1.放線菌培養基:①澱粉硝酸鹽培養基：
溶性澱粉 2.0g硝酸鉀0.1g 磷酸氫二鉀0.
05g 氯化鈉0.05g 硫酸鎂0.05g硫酸亞鐵0.
001g 瓊脂2g 水100ml先把澱粉放在燒杯裡，用5毫公升水調成糊狀後，倒入95毫公升水，攪勻後加入其他藥品，使它溶解。在燒杯外做好記號，加熱到煮沸時加入瓊脂，不停攪拌，待瓊脂完全溶解後，補足失水。調整ph值到7.
2～7.4，分裝後滅菌，備用。
2.細菌培養基：①牛肉膏瓊脂培養基：
肉膏0.3g ，蛋白腖1.0 g，氯化鈉0.
5g，瓊脂 1.5g，水 100ml在燒杯內加水100毫公升，放入牛肉膏、蛋白腖和氯化鈉，用蠟筆在燒杯外作上記號後，放在火上加熱。待燒杯內各組分溶解後，加入瓊脂，不斷攪拌以免粘底。
等瓊脂完全溶解後補足失水，用10%鹽酸或10%的氯化鈉調整ph值到7.2～7.6,分裝在各個試管裡，加棉花塞，用高壓蒸汽滅菌：
1.05千克每平方厘公尺、121攝氏度維持15到30分鐘。②馬鈴薯培養基：
新鮮牛心（除去脂肪和血管）250克，用刀細細剁成肉末後，加入500毫公升蒸餾水和5克蛋白腖。在燒杯上做好記號，煮沸，轉用文火燉2小時。過濾，濾出的肉末乾燥處理，濾液ph值調到7.
5左右。每支試管內加入10毫公升肉湯和少量碎末狀的幹牛心，滅菌，備用。
3.真菌培養基:薩市培養基：
白腖 10g 瓊脂20g麥芽糖40g 水1000ml先把蛋白腖、瓊脂加水後，加熱，不斷攪拌，待瓊脂溶解後，加入40g麥芽糖（或葡萄糖），攪拌，使它溶解，然後分裝，滅菌，備用。
五.微生物的分離和純培養
分離方法：細胞挑取法平板畫線法
純化方法：①根據要分離菌的特性，找適合的初篩培養基，找到要純化的菌。②若知道目標菌的形態，可以直接挑混合菌劃平板，直到長出當個菌落，並且在鏡下沒有雜菌即可；或者挑菌稀釋塗佈得到單個菌落也行。
稀釋混合平板法：與稀釋塗佈平板法基本相同，無菌操作也一樣，所不同的是先分別吸取0．5ml10-4、10-5、10-6稀釋度的土壤懸液對號放入平皿，然後再倒入溶化後冷卻到45℃左右的培養基，邊倒入邊搖勻，使樣品中的微生物與培養基混合均勻，待冷凝成平板後，分別倒置於28℃和37℃溫室中培養後，再挑取單個菌落，直至獲得純培養。
六.保藏技術
通過分離純化得到的微生物純培養物，還必須通過各種保藏技術使其在一定時間內不死亡，不會被其它微生物汙染，不會因發生變異而丟失重要的生物學性狀，否則就無法真正保證微生物研究和應用工作的順利進行。菌種保藏就是根據菌種特性及保藏目的的不同，給微生物菌株以特定的條件，使其存活而得以延續。在需要時再通過提供適宜的生長條件使保藏物恢復活力。
傳代培養保藏:培養與培養物的直接使用密切相關，是進行微生物保藏的基本方法。常用的有瓊脂斜面、半固體瓊脂柱及液體培養等。
採用傳代法保藏微生物應注意針對不同的菌種而選擇使用適宜的培養基，並在規定的時間內進行移種，以免由於菌株接種後不生長或超過時間不能接活，喪失微生物菌種。一般來說，通過降低培養物的代謝或防止培養基乾燥，可延長傳代保藏的儲存時間。
七.無菌技術
通常採用濕熱滅菌或過濾滅菌。
濕熱滅菌通常在高壓鍋或培養基製備容器中進行，一般高壓滅菌採用121℃滅菌15min.體積超過1000ml的培養基，必要時適當的調整滅菌條件但必需按照國際標準或使用說明的規定進行。高壓滅菌過程應當監控，可使用能記錄溫度、壓力的測試條件或熱電耦進行監測，以保證滅菌的溫度。
對大容量如大於1000ml的培養基滅菌時，要注意避免過度加熱。對於一些敏感的培養基和大容器中的培養基，加熱後採用適當的方法冷卻，以防加熱過度。
過濾除菌可在真空負壓或正壓的條件下進行，使孔徑為0.22μm的濾膜或濾墊，過濾前先將濾膜或濾墊除菌，過濾器在121℃滅菌15min，可以整體滅菌也可以拆卸後滅菌，必要時在生物安全櫃中無菌組裝。為避免過濾中由於吸附作用引起過濾物質濃度變化，操作者應事先將濾膜用無菌水潤濕。
培養基滅菌後必須在35-37℃下恆溫培養24h，確定無菌生長，方可使用。
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實驗八 ms培養基的配製和滅菌 一 實驗目的 了解培養基的配製原理和方法，掌握其配製過程和分裝方法。二 實驗材料 天平 牛角匙 量筒 燒杯 攪拌機 膠桶 組培瓶 6種母液 白沙糖 活性炭 卡拉膠。三 方法步驟 1 母液配製 大量元素 母液 mg l 100ml。2 微量元素 母液 3 鐵鹽 母液 4...
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培養基濕熱滅菌
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