實驗一培養基的製備和滅菌

（3）細菌加銅培養液：在細菌培養液的基礎上加入終濃度分別為0、100、200、300的銅。

2．溶化

在上述燒杯中可先加入少於所需要的水量，用玻棒攪勻，然後，在石棉網上加熱使其溶解。待藥品完全溶解後，補充水分到所需的總體積。

3．調ph

在未調ph前，先用精密ph試紙測量培養基的原始ph值，如果ph偏酸，用滴管向培養基中逐滴加入1mol/lnaoh，邊加邊攪拌，並隨時用ph試紙測其ph值，直至ph達7.6。反之，則用1mol/lhcl進行調節。

注意ph值不要調過頭，以免**，否則，將會影響培養基內各離子的濃度。

對於有些要求ph值較精確的微生物，其ph的調節可用酸度計進行。

4．分裝

按實驗要求，可將配製的培養基分裝入試管內或三角瓶內（見圖ⅰ－1）。分裝過程中注意不要使培養基沾在管口或瓶口上，以免沾汙棉塞而引起汙染。分裝試管，其裝量不超過管高的1/5，滅菌後製成斜面；分裝三角瓶的量以不超過容積達一半為宜。

5．加塞

培養基分裝完畢後，在試管口或三角瓶口上塞上棉塞，以阻止外界微生物進入培養基內而造成汙染，並保證有良好的通氣效能。應使棉塞長度的1/3在試管口外，2/3在試管口內。

6. 包紮

加塞後，將全部試管用橡皮筋捆紮好，再在棉塞外保一層牛皮紙或報紙，以防止滅菌時冷凝水潤濕棉塞，其外再用橡皮筋扎好。用記號筆註明培養基名稱，日期。

7. 滅菌

（1）首先將內層滅菌筒取出，再向外層鍋加入適量的水，使水面與三角擱架相平為宜。

（2）放回滅菌桶，並裝入待滅菌物品。三角瓶與試管口端均不要與桶壁接觸，以免冷凝水淋濕包口的紙而透入棉塞，

（3）加蓋，將蓋上的排氣軟管插入內層滅菌桶的排氣槽內。再以兩兩對稱的方式同時旋緊相對的兩個螺栓。

（4）通電加熱，並同時開啟排氣閥，使水沸騰以排除鍋內的冷空氣。待冷空氣完全排盡後，關上排氣閥，讓鍋內的溫度隨蒸汽壓力增加而逐漸上公升，當鍋內壓力公升到所需壓力時，控制熱源，維持壓力至所需時間。

（5）滅菌所需時間到後，切斷電源，讓滅菌鍋內溫度自然下降，當壓力表的壓力降至0時，開啟排氣閥，旋鬆螺栓，開啟蓋子，取出滅菌物品。如果壓力未降到0時，開啟排氣閥，就會因鍋內壓力突然下降，使容器內的培養基由於內外壓力不平衡而衝出燒瓶或試管口，造成棉塞沾染培養基而發生汙染。

8. 擱置斜面

將滅菌的試管培養基冷至50℃左右，將試管棉塞端擱在木條上（見圖ⅰ－2）。

9. 倒平板

將培養基溶化，待冷至55－60℃時，將幾種培養基分別倒平板，每種培養基倒三皿。手持法（見圖ⅰ－5）：右手持盛培養基的試管或三角瓶，置火焰旁，左手拿平皿並鬆動試管塞或瓶塞，用手掌邊緣和小指、無名指夾住拔出。

如果試管內或三角瓶內的培養基一次可用完，則管塞或瓶塞不必夾在手指中。瓶口在火焰上滅菌，左手將培養皿蓋在火焰附近開啟一縫，迅速倒入培養基約15ml，加蓋後，輕輕搖動培養皿，使培養基均勻分布，平置於桌面上，待凝後即可成平板。皿架法（見圖ⅰ－4）：

將平皿疊放在火焰附近的桌面上，用左手的食指和中指夾住管塞並開啟培養皿，再注入培養基，搖均後製成平板。

10.無菌試驗

將已滅菌的培養基，置無菌試管內，放在37℃孵箱中培養24小時，

將取出的滅菌培養基放入37℃溫箱培養24小時，經檢查若無雜菌生長，即可待用。

五、實驗報告

1.如何檢驗滅菌後培養基是否合格？

2.高壓蒸氣滅菌開始之前，為什麼要將鍋內冷空氣排盡？滅菌完畢後，為什麼要待降到0時才能開啟排氣閥，開蓋取物？