一、目的要求
1、學習配製微生物培養基的一般方法和步驟。
2、掌握高壓蒸汽滅菌的原理和操作方法。
二、基本原理
正確掌握培養基的配製方法是從事微生物學實驗工作的重要基礎。由於微生物種類及代謝型別的多樣性，因而用於培養微生物的培養基的種類也很多，它們的配方及配製方法雖各有差異，但一般培養基的配製程式卻大致相同，例如器皿的準備，培養基的配製與分裝，棉塞的製作，培養基的滅菌，斜面與平板的製作以及培養基的無菌檢查等基本環節大致相同。
三、實驗材料
1、藥品：牛肉膏蛋白腖培養基、瓊脂粉、1mol/l的naoh和1mol/l hcl溶液。
2、儀器及玻璃器皿：電子天平、高壓蒸汽滅菌鍋、超淨工作台、酒精燈、移液管、試管、燒杯、量筒、三角瓶、培養皿和玻璃棒等。
3、其他物品：藥匙、稱量紙、ph試紙、記號筆、棉花、報紙、線繩和注射器等。
四、操作步驟
（一）玻璃器皿的洗滌
玻璃器皿在使用前必須用洗滌劑洗刷乾淨，然後用自來水沖淨，置於烘箱中烘乾後備用。
（二）牛肉膏蛋白腖培養基的配製
1、培養基配製
（1）稱量：按培養基配方計算出各成分的用量，然後用電子天平進行準確稱量後倒入一燒杯中。
注意：稱量藥品時，一定要用稱量紙而不能用濾紙。稱藥品用的藥匙不要混用，稱完藥品應及時蓋緊瓶蓋。
（2）溶解：用量筒稱量所需體積的水（根據實驗需要可用自來水或蒸餾水），倒入燒杯中，用玻璃棒攪動溶解即可。
（3）調ph：一般用ph試紙測定培養基的ph，可用1mol/l naoh或1mol/l hcl溶液進行調節。調節ph時，應逐滴加入naoh或hci溶液，防止區域性過酸或過鹼，破壞培養基中成分。
邊加邊攪拌，並不時用ph試紙測試，直至達到所需ph為止。
注意：ph值不要調過頭，以免**而影響培養基內各離子的濃度。
2、製備液體培養基
（1）用量筒準確量取20ml培養基，倒入100ml三角瓶中，塞好棉塞，用報紙包好瓶口並用棉線包紮好，滅菌。
注意：倒溶液時不要把瓶口沾濕。包紮時不要把瓶子弄倒而把棉塞弄濕。
3、製備固體培養基
（1）平板培養基
a、用量筒準確量取100ml培養基，倒入250ml三角瓶中，加入2g瓊脂粉，塞好棉塞，用報紙包好瓶口並用棉線包紮好，滅菌。
b、將洗淨烘乾的培養皿用報紙包紮好，滅菌。
c、在超淨工作台中，將裝在三角瓶中已滅菌的瓊脂培養基冷至50℃左右傾入無菌培養皿中。溫度過高時，皿蓋上的冷凝水太多；溫度低於50℃，培養基易於凝固而無法製作平板。平板的製作應在火旁進行，左手拿培養皿，右手拿三角瓶的底部，左手同時用小指和手掌將棉塞開啟，灼燒瓶口，用左手大拇指將培養皿蓋開啟，傾入10-15ml培養基，迅速蓋好皿蓋，置於桌上，輕輕旋轉平皿，使培養基均勻分布於整個平皿中，冷凝後即成平板。
（2）斜面培養基
a、用量筒量取100ml培養基，倒入乙個燒杯中，加入2g瓊脂粉，置於石棉網上加熱，用玻璃棒攪動溶解至瓊脂粉溶解。
b、將洗淨烘乾的試管放置在試管架上，用注射器將融化瓊脂粉的培養基倒入試管至試管高度的1/4處。
注意：不要將試管口弄髒。
c、待培養基冷卻凝固後，塞上棉塞，以2支或4支為一組，用報紙將試管口包紮好，滅菌。
d、滅菌後，趁熱將試管口端擱在一根長木條上，並調整斜度，便斜面的長度不超過試管總長的1/2。
10．無菌檢查將滅菌的培養基放入37℃溫箱中培養24～48h，無菌生長即可使用，或貯存於冰箱或清潔的櫥內，備用。
（三）培養基的滅菌
培養基經分裝包紮後，應立即按配製方法規定的滅菌條件進行進行高壓蒸汽滅菌。
（四）培養基的滅菌檢查
滅菌後的培養基，一般需進行無菌檢查。最好取出1-2管（瓶），置於37℃溫箱中培養1-2天，確定無菌後方可使用。
五、實驗內容
1、根據要求清洗各種玻璃器皿，並進行烘乾和包紮。
2、根據要求配製微生物培養基。
3、掌握用高壓蒸汽滅菌鍋對培養基滅菌。
4、掌握液體培養基、平板培養基和斜面培養基的製備。
六、實驗報告
1、記錄本實驗配製培養基的名稱、數量，並**說明其配製過程，指明要點。
2、記錄所做培養基的無菌檢查結果。
七、實驗思考題
1、為什麼微生物實驗室所用的三角瓶口或試管口都要塞上棉塞才能使用？能否用木塞或棉皮塞代替？
2、配製培養基時為什麼要調節ph？
3、高壓蒸汽滅菌為什麼比乾熱滅菌要求溫度低、時間短？
4、高壓蒸汽滅菌的原理是什麼？是否只要壓力表上的指標指到所需的壓力時就能達到所需滅菌溫度？為什麼？
5、培養基配製完成後，為什麼必須立即滅菌？若不能及時滅菌應如何處理？已滅菌的培養基如何進行無菌檢查?
6、請設計實驗對飲料進行無菌檢查。
附錄高壓蒸汽滅菌技術
一、目的要求
了解消毒和滅菌的原理，並掌握各種滅菌方法的操作步驟。
二、實驗材料
上述配製的培養基，包紮的培養皿、試管，高壓蒸汽滅菌鍋，注射器，鑷子，玻璃塗棒。
三、基本原理
在微生物實驗中，需要進行純培養，不能有任何雜菌汙染，因此必須對所用器材、培養基和工作場所進行滅菌和消毒。滅菌是指殺死一定環境中的所有微生物，包括微生物的營養體、芽孢和孢子。實驗室常用的滅菌方法包括直接灼燒、恆溫乾燥箱滅菌、高壓蒸汽滅菌、間歇滅菌、煮沸滅菌等方法。
這些方法的基本原理是通過加熱使微生物體內蛋白質凝固變性，從而達到滅菌的目的。
四、操作步驟
高壓蒸汽滅菌是將物品放在密閉的高壓蒸汽滅菌鍋內，在一定的壓力下保持15-30分鐘進行滅菌。此法適用於培養基、無菌水、工作服等物品的滅菌，也可用於玻璃器皿的滅菌。
將待滅菌的物品放在乙個密閉的加壓滅菌鍋內，通過加熱，使滅菌鍋夾套間的水沸騰而產生蒸汽。待水蒸汽急劇地將鍋內的冷空氣從排氣閥中排盡，然後關閉排氣閥，繼續加熱，此時由於蒸汽不能溢位，而增加了滅菌鍋內的壓力，從而使沸點增高，獲得高於100℃的溫度，導致菌體蛋白質凝固變性而達到滅菌的目的。
在相同的溫度下，濕熱滅菌的效果好於乾熱滅菌。有三點原因：1、在濕熱滅菌中菌體吸收水分，蛋白質容易凝固變性，蛋白質隨著含水量的增加，所需凝固溫度降低；2、濕熱滅菌中蒸汽的穿透力比乾燥空氣大；3、蒸汽在被滅菌物體表面凝結，釋放出大量的汽化潛熱，能迅速提高滅菌物體表面的溫度，從而增加滅菌效力。
實驗室常用的滅菌鍋有非自控手提式高壓蒸汽滅菌鍋和自控式滅菌鍋，其結構和工作原理是相同的。本實驗介紹的是半自控高壓蒸汽滅菌鍋，自控式滅菌鍋的使用可參考廠家說明書。具體操作步驟如下：
1、加水：首先將內層鍋取出，再向外層鍋內加入適量的水，使水面沒過加熱蛇管，與三角擱架相平為宜。切勿忘記檢查水位，加水量過少，滅菌鍋會發生燒乾引起炸裂事故。
2、裝料：放回內層鍋，並裝入待滅菌的物品。注意不要裝得太擠，以免妨礙蒸汽流通而影響滅菌效果。
裝有培養基的容器放置時要防止液體溢位，三角瓶與試管口端均不要與桶壁接觸，以免冷凝水淋濕包紮的紙而透入棉塞。
3、加蓋：將蓋上與排氣孔相連的排氣軟管插入內層鍋的排氣槽內，擺正鍋蓋，對齊螺口，然後以對稱方式同時旋緊相對的兩個螺栓，使螺栓鬆緊一致，勿使漏氣，並開啟排氣閥。
4、排氣：開啟電源加熱滅菌鍋，將水煮沸，使鍋內的冷空氣和水蒸汽一起從排氣孔中排出。一般認為當排出的氣流很強並有噓聲時，表明鍋內的空氣已排盡，沸騰後約需3分鐘。
5、公升壓：冷空氣完全排盡後，關閉排氣閥，繼續加熱，鍋內壓力開始上公升。
6、保壓：當壓力表指標達到所需壓力時，控制電源，開始計時並維持壓力至所需的時間。如本實驗中採用0.
1mpa，121.5℃，20分鐘滅菌。注意：
滅菌的主要因素是溫度而不是壓力，因此鍋內的冷空氣必須完全排盡後，才能關閉排氣閥，維持所需壓力。
7、降壓：達到滅菌所需的時間後，切斷電源，讓滅菌鍋溫度自然下降，當壓力表的壓力降至「0」後，方可開啟排氣閥，排盡餘下的蒸汽，旋鬆螺栓，開啟鍋蓋，取出滅菌物品。壓力一定要降到「0」後，才能開啟排氣閥，開蓋取物。
否則就會因鍋內壓力突然下降，使容器內的培養基或試劑由於內外壓力不平衡而衝出容器口，造成瓶口被汙染，甚至灼傷操作者。
8、無菌檢查：將已滅菌的培養基放入37℃恆溫培養箱培養24h，無雜菌生長後即可使用。
常見微生物培養基的製備
一 實驗目的與內容 1.實驗目的 2.實驗內容 二 實驗原理 簡略 培養基高壓蒸汽滅菌是利用高壓蒸汽產生的高於100 的高溫 以及熱蒸汽的穿透能力，導致菌體蛋白質凝固變性而達到滅菌的目的。本實驗通過配製適用於一般細菌 放線菌和真菌的三種培養基來了解和掌握配製培養基的基本原理和方法。如高氏1號培養基中...
實驗一培養基的製備與滅菌
一 實驗目的 1.了解配製培養基的一般方法和步驟 掌握牛肉膏蛋白腖培養基 馬鈴薯葡萄糖 蔗糖 培養基的製備方法。2.了解滅菌的原理，掌握高壓蒸氣滅菌的操作方法。二 實驗器材 1.藥品 牛肉膏 蛋白腖 氯化鈉 葡萄糖 蔗糖 瓊脂 1n naoh 1n hcl等。2.儀器及其他 試管 錐形瓶 量杯 玻璃...
實驗一培養基的製備和滅菌
3 細菌加銅培養液 在細菌培養液的基礎上加入終濃度分別為0 100 200 300的銅。2 溶化 在上述燒杯中可先加入少於所需要的水量，用玻棒攪勻，然後，在石棉網上加熱使其溶解。待藥品完全溶解後，補充水分到所需的總體積。3 調ph 在未調ph前，先用精密ph試紙測量培養基的原始ph值，如果ph偏酸，...