一、實驗目的與內容
1.實驗目的:
2.實驗內容:
二、實驗原理(簡略)
培養基高壓蒸汽滅菌是利用高壓蒸汽產生的高於100℃的高溫、以及熱蒸汽的穿透能力,導致菌體蛋白質凝固變性而達到滅菌的目的。
本實驗通過配製適用於一般細菌、放線菌和真菌的三種培養基來了解和掌握配製培養基的基本原理和方法。如高氏1號培養基中的磷酸鹽和鎂鹽相互混合時易產生沉澱,因此,在混合培養基成分時,一般是按配方的順序依次溶解各成分,甚至有時還需要將2種或多種成分分別滅菌,使用時再按比例混合。此外,合成培養基有的還需要補加微量元素,如高氏1號培養基中的feso4.
7h2o的用量只有0.001%,在配製培養基時需預先配成高濃度的feso4.7h2o貯備液,然後再按需加入一定的量到培養基中。
三、實驗器材
1.溶液和試劑
2. 儀器和其他用品
四、實驗步驟
1.牛肉膏蛋白腖培養基(營養瓊脂培養基)
滅菌:將上述培養基以121°c,高壓蒸汽滅菌20min。具體操作步驟如下:
①加水:往鍋內加入適量的水,切勿加少了。
②裝料:把要滅菌的材料裝入鍋內。
③加蓋:關嚴滅菌鍋蓋和其它閥門,勿使漏氣。
④加熱。編滅菌的程式
⑤排放冷空氣:當壓力上公升至0.05 mpa時,開啟放氣閥,將鍋內的冷空氣放走,待壓力下降為「0」時,再關閉放氣閥門。
⑥公升壓。
⑦保壓:當壓力上公升至所需壓力時,控制熱源,維持壓力至所需時間。
⑧降壓:達到所需滅菌時間後,關閉熱源,讓壓力自然下降到「o」後,開啟放氣閥,再開蓋。
擱置斜面:將滅菌的試管培養基冷卻至50°c左右(以防斜面上冷凝水太多),將試管口端擱在玻璃棒或其他合適高度的器具上,擱置的斜面長度以不超過試管總長的一半為宜。
無菌檢查:將滅菌培養基放入37°c的溫室中培養24~28 h ,以檢查滅菌是否徹底。
2.高氏1號培養基(培養放線菌用)
培養基的配方如下:
3.馬丁氏培養基(分離真菌用)
培養基的配方如下:
五、注意事項
六、實驗結果分析
七、實驗報告
1.將培養基按成分**和物理狀態進行分類;
2.判斷培養基高壓蒸汽滅菌是否徹底。
八、思考與**
1. 試述高壓蒸氣滅菌的主要操作過程和注意事項。
2. 培養基配好後為什麼要立即滅菌?如何檢驗滅菌後的培養基是否無菌?
3. 高壓蒸氣滅菌開始之前,為什麼要將鍋內冷空氣排盡?滅菌完畢後,為什麼待壓力降低「0」時才能開啟排氣閥,開蓋取物?
4. 在使用高壓蒸氣滅菌鍋滅菌時,怎樣杜絕一切不安全的因素?
5. 滅菌在微生物實驗操作中有何重要意義?
實驗一微生物培養基的製備與滅菌
一 目的要求 1 學習配製微生物培養基的一般方法和步驟。2 掌握高壓蒸汽滅菌的原理和操作方法。二 基本原理 正確掌握培養基的配製方法是從事微生物學實驗工作的重要基礎。由於微生物種類及代謝型別的多樣性,因而用於培養微生物的培養基的種類也很多,它們的配方及配製方法雖各有差異,但一般培養基的配製程式卻大致...
第四章微生物的營養和培養基
重點 1.微生物的6大類營養要素 營養型別 營養物質進入細胞的方式 2.培養基的概念及其分類和各自的功能 幾個概念 1.微生物的營養物質 凡是能滿足微生物機體生長 繁殖和完成各種生理活動所需要的物質,都稱為微生物的營養物質。2.營養 微生物獲得和利用營養物質的過程稱為營養。3.培養基 人工配製的,適...
微生物培養基質量控制措施
1 概述 培養基質量是微生物檢測工作的基礎,事關檢測結果的準確性 可靠性,本規範依據gb t 27405 實驗室質量控制規範食品微生物檢測 結合實驗室實際情況,明確了培養基的購置 貯存 製備 效能測試等過程的質量控制措施,以確保培養基質量滿足檢測要求。2 適用範圍 本規範適用於侯馬分中心對微生物檢測...