一、實驗目的
1. 了解配製培養基的一般方法和步驟；掌握牛肉膏蛋白腖培養基、馬鈴薯葡萄糖（蔗糖）培養基的製備方法。
2. 了解滅菌的原理，掌握高壓蒸氣滅菌的操作方法。
二、實驗器材
1. 藥品：牛肉膏；蛋白腖；氯化鈉；葡萄糖（蔗糖）；瓊脂；1n naoh；1n hcl等。
2. 儀器及其他：試管；錐形瓶；量杯；玻璃棒；漏斗；紗布；棉花；報紙；天平或台秤；馬鈴薯；電爐；鋁鍋；滅菌鍋等。
三、實驗方法
（一）配製培養基的基本過程：
（1）稱量：按照培養基配方，稱取各種原料放於鍋中；
（2）溶解：鍋中加入所需水量（自來水），加熱溶解。要不斷攪拌，以免糊底燒焦，最後加水補足失去的水分；
（3）調ph值：按配方要求調節；
（4）過濾：用過濾紙或多層紗布過濾，一般無特殊要求，此步可以省去。
（5）分裝：按實驗要求，可將配製的培養基分裝入試管或三角瓶內。分裝時可用漏斗以免使培養基沾在管口或瓶口上而造成汙染。
分裝量：斜面培養基裝入的培養基約為試管高度的l/5～1/4，滅菌後製成斜面。分裝入三角瓶內以不超過其容積的一半為宜。
（6）加棉塞：試管口和三角瓶口塞上用普通棉花(非脫脂棉)製作的棉塞。
製作棉塞時，應選用大小、厚薄適中的普通棉花一塊，鋪展於左手拇指和食指扣成的圓孔上，用右手食指將棉花從**壓入圓孔中製成棉塞，然後直接壓入試管或錐形瓶口。也可借用玻璃棒塞入，也可以用摺疊卷塞法製作棉塞（見圖）。
棉塞的形狀、大小和鬆緊度要合適，四周緊貼管壁，不留縫隙，才能起到防止雜菌侵入和有利通氣的作用。棉塞不宜過緊或過鬆，塞好後以手提棉塞，以瓶、管不下落為準。
棉塞的2/3應在管內，上端露出1/3，便於提拔。如製作時不慎沾上培養基則不可再用。
（7）包紮：加塞後，將三角瓶的棉塞外包一層牛皮紙或雙層報紙，以防滅菌時冷凝水沾濕棉塞。若培養基分裝於試管中，則應以7支在一起，再於棉塞外包一層牛皮紙，用繩扎好。
然後用筆註明培養基名稱、組別、日期。
（8）滅菌：將上述培養基於121.3℃濕熱滅菌30min。
（9）擺斜面：滅菌後，如製斜面，則需趁熱將試管口端擱在一根長木條上，並調整斜度，便斜面的長度不超過試管總長的1/2。
（10）無菌檢查：將滅菌的培養基放入37℃溫箱中培養24～48h，無菌生長即可使用，或貯存於冰箱或清潔的櫥內，備用。
(二)滅菌方法採用高壓蒸氣滅菌法滅菌，步驟如下：
（1）開啟鍋蓋，內層鍋裝入待滅菌物品。注意不要裝得太擠，以免防礙蒸氣流通而影響滅菌效果。三角燒瓶與試管口端均不要與鍋壁接觸，以免冷凝水淋濕包口的紙而透入棉塞。
（2）加適量水。
（3）加蓋，旋緊螺栓，勿使漏氣。
（4）加熱，並同時開啟上排氣閥，水沸騰排氣後開啟下放氣閥，以除鍋內的冷空。讓鍋內的溫度隨蒸氣壓力增加到逐漸上公升。當鍋內壓力公升到所需壓力時，控制熱源，維持壓力至所需時間。
本實驗用121.5℃，30min滅菌。
滅菌的主要因素是溫度而不是壓力。因此鍋內冷空氣必須完全排盡。
(5)滅菌所需時間到後，切斷電源，讓滅菌鍋內溫度自然下降，當壓力表的壓力降至「0」時，開啟排氣閥，旋鬆螺栓，開啟蓋子，取出滅菌物品。
壓力一定要降到「0」時，才能開啟排氣閥，開蓋取物。否則就會因鍋內壓力突然下降，使容器內的培養基由於內外壓力不平衡而衝出燒瓶口或試管口，造成棉塞沾染培養基而發生汙染，甚至灼傷操作者。
（6）取出的滅菌培養基，需擺斜面的則擺成斜面，然後放入37℃溫箱培養24h，經檢查若無雜菌生長，即可待用。
（三）培養基配方：
1. 肉膏蛋白腖培養基（用於培養細菌）
牛肉膏 5g； 蛋白腖 10g； 氯化鈉 5g； 瓊脂 15～20g；水 1000ml； ph 7.2～7.4
牛肉膏可放在載玻片上稱量，放鍋中溶解後取出玻片。
可免過濾步驟。
2、馬鈴薯葡萄糖培養基（用於培養真菌）
馬鈴薯200克，葡萄糖20克，瓊脂15～20克，1000 ml自來水；ph自然。
制法：將馬鈴薯去皮，並切成薄片，每加，煮沸30分鐘，用紗布過濾，濾液放入乾淨鍋中，加入瓊脂和糖溶化後待分裝。
四、注意事項
1、準確稱量；
2、注意攪拌；
3、分裝前補足水量；
4、分裝時不使培養基沾到管口（瓶口）；
5、滅菌時要排淨冷氣。
圖棉塞的製作過程
實驗一培養基的製備和滅菌
3 細菌加銅培養液 在細菌培養液的基礎上加入終濃度分別為0 100 200 300的銅。2 溶化 在上述燒杯中可先加入少於所需要的水量，用玻棒攪勻，然後，在石棉網上加熱使其溶解。待藥品完全溶解後，補充水分到所需的總體積。3 調ph 在未調ph前，先用精密ph試紙測量培養基的原始ph值，如果ph偏酸，...
實驗一微生物培養基的製備與滅菌
一 目的要求 1 學習配製微生物培養基的一般方法和步驟。2 掌握高壓蒸汽滅菌的原理和操作方法。二 基本原理 正確掌握培養基的配製方法是從事微生物學實驗工作的重要基礎。由於微生物種類及代謝型別的多樣性，因而用於培養微生物的培養基的種類也很多，它們的配方及配製方法雖各有差異，但一般培養基的配製程式卻大致...
培養基的製備與滅菌實驗報告 詳細
1 實驗題目 培養基的製備與滅菌 2 實驗目的 1 明確培養基的配置原則，掌握配置方法。2 了解滅菌的原理，學習掌握滅菌器的使用方法。三 實驗器材 1 藥品 牛肉膏 蛋白腖 氯化鈉 水 瓊脂。2 儀器 三角瓶 培養皿 試管 線繩 棉花 燒杯 報紙 移液管 試管架 鐵針 量筒。四 實驗原理 1 培養基...