1 培養基的分類
1.1根據其態相不同分為固體培養基與液體培養基
固體培養基是指加凝固劑的培養基;
液體培養基是指不加凝固劑的培養基,培養基加入一定量的凝固劑,加熱溶解後,分別裝入常用的培養基中冷卻後即得到固體培養基。
1.2 根據培養物的培養過程,培養基分為初代培養基和繼代培養基
1.3 根據其作用不同,培養基分為:
1.3.1 誘導培養基
1.3.2增殖培養基
1.3.3生根培養基
1.4 根據其營養水平不同,培養基可分為基本培養基和完全培養基
基本培養基(就是通常稱呼的培養基)主要有ms、white、 n6、b5 、改良ms、heller、nitsh、sh、 miller等。
完全培養基就是基本培養基的基礎上,根據試驗的不同需要,附加一些物質,如生長調節物質和其他複雜有機物質等。
2 常用培養基種類
2.1 ms培養基
ms培養基是目前應用最多最普遍的培養基。無機鹽的濃度較高,能保證組織培生長所需的礦物質營養。並且因為離子濃度高,在配製、貯存、消毒過程中,即使有些成分略有出入,也不致影響培養基中的離子平衡 。
2.2 b5培養基
特點:含較低的銨。雙子葉植物尤其木本植物組培可選擇。
2.3 white培養基
2023年由white為培養番茄根尖而設計的。2023年又作了改良,稱作white改良培養
基 。特點:無機鹽含量較低。
2.4 n6培養基
2023年朱至清等為水稻等禾穀類作物花藥培養而設計。
特點:成分簡單;kno3 和 (nh4)2so4含量高;廣泛應用於小麥、水稻及其它植物的花
藥培養等。
2.5 km-8p培養基
特點:有機成分複雜,它包括了所有的單醣和維生素;用於原生質體培養( 包括原生質
融合的培養)。
3 培養基的成分
3.1 水
3.2 無機鹽
大量元素(≥0.5mmol/l):n、p、k、ca、mg、s。
微量元素(﹤ 0.5mmol/l):fe、b、mn、cu、mo、zn
3.3 有機物
碳水化合物、維生素、天然複合物、肌醇、氨基酸
3.4 植物激素
自然界中,植物激素是植物新陳代謝中產生的天然化合物,它能以極微小的量影響到植物的細胞分化、生長、發育,影響到植物的形態建成、開花、結實、成熟、脫落、衰老和休眠、萌發等許多生理生化活動。
在培養基中,其各種成分對培養物影響最大的最顯著的就是激素。激素的種類、濃度、以及配比都會顯著的影響愈傷組織的形成、不定根、不定芽的分化,胚狀體的形成等。通常,不同植物,或不同品種,甚至同一植物的不同位置對激素的要求有很大的變化,這主要取決於植物的內源激素水平。
組織培養中使用的激素有的是天然的,如脫落酸(aba)等,有的是合成的,如二氯苯氧乙酸(2,4-d)。
3.4.1生長素類
在自然界中,生長素影響莖和節間的伸長、向性、頂端優勢、葉片脫落和生根等現象。
在組織培養中的主要作用是:誘導細胞的**和根的分化,誘導愈傷組織)。
常用生長素:
二氯苯氧乙酸(2,4-d)、萘乙酸(naa)、吲哚乙酸(iaa)、吲哚--3-丁酸(iba)
naa、iaa、iba被廣泛用於生根,2,4-d有利於愈傷組織的誘導和生長。
iaa容易光解,注意用棕色試劑瓶儲存,儲存時間不要太久。
溶解方法:1m naoh或95%酒精,以前者為好。
儲存:配成一定濃度後,冰箱冷藏儲存。
3.4.2 細胞**素
自然界中,細胞**素影響細胞**,頂端優勢的變化和莖的分化等
組織培養中,細胞分類素主要促進細胞**和由愈傷組織上或器官上分化不定芽。細胞**素常常與生長素相互配合,用以調節細胞**,細胞伸長,細胞分化和器官形成。
常用的細胞**素:
6-苄氨基嘌呤(6-ba)、激動素(6-糠氨基嘌呤、 kt)、玉公尺素(zt)、噻二唑苯基脲( thidiazuron、 tdz )
溶解方法:1mhcl
儲存:配成一定濃度後,冰箱冷藏儲存。
3.5 培養體支援材料
瓊脂用量7~10g/l(0.7%~1%)
注意:① 若濃度過高,培養基就會變得很硬,營養物質就難於擴散到培養的組織中。
②當進行營養需要研究時,應注意不要使用瓊脂,因為市場**所有瓊脂含有雜質,特別是含有ca,mg和微量元素。
其它:卡拉膠、玻璃纖維、濾紙橋、海綿等
3.6 輔助性物質抗生素、抗氧化物、活性炭
4 培養基配製
4.1母液的配製要求
4.1.1母液濃縮倍數:大量元素10;微量元素、鐵鹽100;有機物50;
4.1.2選用蒸餾水、重蒸餾水、分析純或化學純試劑
4.1.3防止沉澱
4.1.4激素母液濃度:1mg/ml,1次配成50或100 ml
4.1.5激素溶解: iaa、iba、ga、zt先溶95%酒精再定容;
naa先溶於熱水或95%酒精再加水;
2,4-d先溶於1m naoh再加水;
kt、ba先溶於1m hcl再加水。
4.2 培養基的配製
4.2.1 量取母液
4.2.2 稱取蔗糖、瓊脂
4.2.3 融化瓊脂
4.2.4 加入母液
4.2.5 定容
4.2.6 調ph值
4.2.7 分裝
4.3 培養基的滅菌 121℃、0.11mpa
5 培養基的選擇
5.1單因子試驗
5.2多因子試驗
5.3逐步增減法
5.4廣譜試驗法
本節小結:通過本節課的學習,主要讓學生了解植物組織培養基的成分及其作用,掌握培養基的配製過程。
思考題:
1 植物組織培養基的成分及其作用
2 植物組織培養基的配製過程
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