一：實驗課題名稱
——不同濃度甘露醇處理二：選題背景或文獻綜述
植物細胞在遭受逆境脅迫時都會大量積累脯氨酸，起著保護植物免受滲透脅迫傷害的作用。脯氨酸作為一種滲透調節物質，優先儲存在植物液泡中，在細胞受到滲透脅迫時將脯氨酸運輸到細胞質中，通過增大細胞質濃度降低滲透勢，使細胞在低滲透勢條件下仍能吸收胞外水分，從而保持細胞原生質與外界環境的滲透平衡[7]。脯氨酸是所有氨基酸中水溶性最強的一種氨基酸，具有較強的水合能力。
在植物受害時，脯氨酸會與蛋白質相互作用形成疏水骨架，以此來穩定和保護生物大分子和細胞膜結構。據 hamilton 等.研究發現， 脯氨酸具有保護鹽脅迫下植物根部線粒體電子傳遞鏈複合體ⅱ免受傷害的功能，通過維持光合活性而起到保護作用。
脯氨酸也是多種自由基的清除劑。脯氨酸清除活性氧有兩種機制：一種通過專一的螯合單線態氧和羥自由基，減輕脅迫所造成的氧傷害.
【1】湯章城. 逆境條件下植物脯氨酸的積累及可能的意義
[ j] . 植物生理學通訊, 19 84, 20 ( 3 ) : 51 54.
【2】 rap id sensitive technique of determination protein concentration [ j ] .anal 197 6, 7 2: 248 254.
[3] roosens nhcj, thutt, iskandar hm, et of ornithine-δ-aminotransferasecdna and effect of salt stress on its expression in arabidopsis[j]. plant physiol,1998,117:263-271.
[4]delauney a j,hu caa, kishor pbk, et of ornithine-aminotransferase cdna from vigna aconitifolia by trans-complementation in escherichia coli and regulation of proline biosynthesis[j]. j biol chem,1993,268:18673-18678.
【5】《植物生理學》（高等教育出版社第六版） 潘瑞熾主編
【6】《植物生理學實驗指導》（高等教育出版社第四版）張志良等
【7】葉乃器介紹實驗中的點滴經驗植物生理學通訊，1956，（3）：36.
三：實驗目的和要求
1、學會常用實驗材料的培養及處理；
2、掌握植物脯氨酸含量的測定方法；
3、掌握常用實驗儀器的使用操作及提高實驗動手能力；
4、學會文獻的查閱與整理，熟悉實驗設計的一般原則、方法步驟，提高自己的實驗設計能力、操作能力、獨立分析問題、解決問題能力和綜合運用能力。
四：實驗內容及其條件
實驗內容：
1、實驗植物種子的處理及幼苗的培養
2、不同滲透脅迫條件下的脅迫處理；
3、脯氨酸含量的測定。
條件：1、儀器：恆溫培養箱、 722型分光光度計 、 恆溫水浴鍋、
恆溫恆濕光照培養箱 、燒杯、移液管。
2.試劑：冰醋酸，3%磺基水楊酸，標準脯氨酸溶液，酸性茚三酮試劑。
五：實驗原理與方法
當植物遭受滲透脅迫，造成生理性缺水，植物體內脯氨酸含量在一定程度上反映了植株內的水分狀況。所以其含量可作為植物缺水的參考指標。在酸性條件下，茚三酮與脯氨酸反應生成紅色化合物。
其含量與色度成正比，故可用分光光度計測定。
六：實驗步驟設計或實驗方案
（一）標準曲線的繪製
（1）在分析天平上精確稱取25mg脯氨酸，倒入小燒杯內，用少量蒸餾水溶解，然後倒入250ml容量瓶中，加蒸餾水定容至刻度，此標準液中每ml含脯氨酸100μg。
（2）系列脯氨酸濃度的配製取6個50ml容量瓶，分別盛入脯氨酸原液1.0，2.0，3.
0 ， 4.0 ， 5.0及6.
0ml，用蒸餾水定容至刻度，搖勻，各瓶的脯氨酸濃度分別為2，4，6，8，10μg/ml
（3）取5支試管，分別吸取2ml系列標準濃度的脯氨酸溶液，加入2ml蒸餾水，2ml 3%磺基水楊酸、2ml冰醋酸和4ml酸性茚三酮溶液，每管在沸水浴中顯色1h。
（4）冷卻後各試管準確加入4ml甲苯，振盪30s，靜置分層，使色素全部轉至甲苯溶液。
（5）用注射器輕輕吸取各管上層脯氨酸甲苯（紅色甲苯相）溶液至比色杯中，以甲苯溶液為空白對照，於520nm波長處進行比色。
（6）標準曲線的繪製：先求出吸光度值（y）依脯氨酸濃度（x）而變的回歸方程序，再按回歸方程序繪製標準曲線。
（二）含量測定
.取地上部材料0.5g剪碎後，加5ml 3%磺基水楊酸研磨，勻漿移至離心管，在沸水中提取10min，冷卻至室溫後，3000r/min離心10分鐘，取上清液2ml，分別加蒸餾水2ml、冰醋酸2ml和2.
5%茚三酮4ml，置於沸水浴顯色1h。冷卻後於520nm處比色。從標準曲線上查出脯氨酸含量。
七：實驗資料的處理
八：實驗結果與分析
標準曲線回歸方程：y=0.01x
（x為脯氨酸濃度（ug/ml），y為520nm下測得的od值）
根據實驗資料和標準曲線得到下**
九：實驗小結
1.選取實驗材料時，應選生長較好的葉片，不可選用已枯死的葉片。且應避免選取發黃、發紅的葉片，以免影響實驗結果。
2. 茚三酮雖無色，但與蛋白質會發生顯色反應，故使用時應小心避免與**接觸。
3. 製作標準曲線時，應用2ml蒸餾水+ 2ml 3%磺基水楊酸+2ml冰醋酸+4ml茚三酮比色。
4、在環境脅迫條件下，植物體的脯氨酸含量明顯變化。
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