【目的和要求】
了解轉氨酶在代謝過程中的重要作用及其在臨床診斷中的意義，學習轉氨酶活力測定的原理和方法。
【原理】
生物體內廣泛存在的氨基移換酶也稱轉氨酶，能催化α-氨基酸的α-氨基與α-酮基酸的α-酮基互換，在氨基酸的合成和分解、尿素和嘌呤的合成等中間代謝過程中有重要作用。轉氨酶的最適ph接近7.4，它的種類甚多，其中以谷氨酸-草醯乙酸轉氨酶（簡稱穀草轉氨酶）和谷氨酸-丙酮酸轉氨酶（簡稱谷丙轉氨酶）的活力最強。
它們催化的反應如下。
正常人血清中只含有少量轉氨酶。當發生肝炎，心肌梗死等病患時，血清中轉氨酶活力常顯著增加，所以在臨床診斷上轉氨酶活力的測定有重要意義。
測定轉氨酶活力的方法很多，本實驗採用分光光度法。谷丙轉氨酶作用於丙氨酸α-酮戊二酸後，生成的丙酮酸與2，4-二硝基苯肼作用生成丙酮酸2，4-二硝基苯腙。
丙酮酸2，4-二硝基苯腙加鹼處理後呈棕色，可用分光光度法測定。從丙酮酸2，4-二硝基苯腙的生成量，可計算酶的活力。
【操作方法】
1．標準曲線的給制：取6支試管，分別標上0，1，2，3，4，5六個號。按下表所列的次序新增各試劑。
2,4-硝基苯肼可與有酮基的化合物作用形成苯腙。底物中的α-酮戊二酸與2，4-二硝基苯肼反應，生成α-酮戊二酸苯腙。因此，在製作標準曲線時，須加入一定量的底物，（內含α-酮戊二酸）以抵消由α-酮戊二酸產生的消光影響。
先將試管置於37℃恆溫水浴中保溫10min以平衡內外溫度。向各管內加入0.5ml2，4-二硝基苯肼溶液後再保溫20min，最後，分別向各管內加入0.
4mol/l氫氧化鈉溶液5ml。在室溫下靜置30min，以0號管作空白，測定520nm的光吸收值。用丙酮酸的微摩爾數為橫座標，光吸收值為縱座標，畫出標準曲線。
2．酶活力的測定：取2支試管並標號，用第1號試管做為未知管，第2號試管做為空白對照管。各加入谷丙轉氨酶底物0.
5ml,置於37℃水浴內10min，使管內外溫度平衡。取血清0.1ml加到第1號試管內，繼續保溫60min。
到60min時，向兩支試管內各加入2，4-二硝基苯肼試劑0.5ml，於37℃保溫20min,然後再向2支管中加入0.4mol/l氫氧化鈉溶液5ml。
在室溫下靜置30min後，測定未知管的520nm波長光吸收值（顯色後30min至2小時內其色度穩定）。在標準曲線上查出丙酮酸的微摩爾數。（用1μmol丙酮酸代表1.
0單位酶活力）。計算每100ml血清中轉氨酶的活力單位數。
【試劑和器材】
一`試劑
1．試管及試管架
2．吸管
3．恆溫水浴
4．分光光度計
二`器材
1．0.1mol/l磷酸緩衝液（ph7.4）
2．2.0μmol/ml丙酮酸鈉標準溶液。
取分析純丙酮酸鈉11mg溶解於50ml磷酸緩衝液內 [當日配製]。
3．谷丙轉氨酶底物。
取分析純α-酮戊二酸29.2mg dl-丙氨酸1.78g克置於小燒杯內，加1mol/l氫氧化鈉溶液或1mol/l鹽酸調整ph至7.
4後，加磷酸緩衝液至100ml。然後加氯仿數滴防腐。此溶液每毫公升含α-酮戊二酸2.
0μmol，丙氨酸200μmol。[在冰箱內可儲存一周]。
4．2，4-二硝基苯肼溶液。
在200ml錐形瓶內放入分析純2，4-硝基苯肼19.8mg，加100ml 1 mol/l鹽酸。把錐形瓶放在暗處並不時搖動，待2，4-二硝基苯肼全部溶解後，濾入棕色玻璃瓶內建 [冰箱內儲存]。
5．0.4mol/l氫氧化鈉溶液。
6．人血清 [冰箱內儲存]
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