酒麴中主要微生物的分離及鑑定

㈡實驗材料：1，酒麴微生物**：經多次釀酒液發酵篩選得的優良民間傳統酒麴。

2，主要培養基：牛肉膏-蛋白腖培養基

3，主要試劑：牛肉膏，蛋白腖，75%和95%酒精，10%氯化鈉，氫氧化鈉-鹽酸緩衝液（ph7.0）

4，儀器：培養皿，超淨工作台，生化培養箱，普通光學顯微鏡。

㈢實驗方法：

1，牛肉膏-蛋白腖培養基的配製

1，配方及配量：牛肉膏0.3克，蛋白腖1克，氯化鈉0.5克，瓊脂1.5克，水100ml,ph7.2-7.4。

2，稱取藥品

3，加熱溶解

4，調ph值

5，分裝：將配置好的培養基分裝在相應的玻璃器皿內待滅菌。

6，加棉塞

7，包紮：在棉塞外再包上一層牛皮紙，以防滅菌時冷凝水直接沾濕棉塞及存放中防止塵埃等汙染。

8，滅菌：將待滅菌的培養基放入加壓滅菌鍋內，於121℃滅菌20min。

9，貯存：經無菌試驗，證實培養基已滅菌徹底後，才能收藏於冰箱或清潔的櫃內貯存備用，在存放期間應盡量避免反覆移位或晃動等易造成汙染的行為。

2，製備無菌生理鹽水

稱0.85克氯化鈉至盛有100ml蒸餾水的三角瓶中，塞上棉塞，塞外包上一層牛皮紙，置加壓蒸汽滅菌鍋內121℃下滅菌20min即為生理鹽水。

3，酒麴懸液的製備：把所選取的酒麴均勻研成粉末並製成懸液。

1，取6-8支無菌試管，依次編號為10-1,10-2,10-3，…,10-6(或10-8)；再取10套無菌培養皿，依次編號10-4,10-5,10-6（或10-6,10-7,10-8），各稀釋濃度做三個重複測定平板，留下乙個平板作空白對照。

2，以無菌操作法用 5ml移液管分別精確吸取4.5ml無菌的生理鹽水於上述各編號的試管中。

3，每次稀釋待測菌的原始樣液時，先將其充分搖勻。然後用1ml無菌移液管在原始樣液中來回吹吸數次，再精確移取0.5ml菌液至10-1的試管中，然後另取1ml無菌移液管，以同樣的方式，先在10-1試管中來回吹吸樣品數次，並精確移取0.

5ml菌液至10-2的試管中，如此稀釋至10-6（或10-8）為止。

4，酒麴微生物的分離、純化

分別取上述稀釋液0.1ml，採用平板劃線分離法接種於牛肉膏-蛋白腖培養基上；每個稀釋濃度分別接種9個平板並各取3個平板分別置於18℃、25℃、30℃下培養1-3d，觀察。